免疫球蛋白IgM测定

免疫球蛋白IgM测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。2原理免疫透射比浊法抗免疫球蛋白M抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置―150C――200C冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4试剂4.1试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgM试剂盒,国械注进20142405056YZB/GER5724-2014）4.1.1试剂组成R1:TRIS缓冲液：20mmol/l，pH8.0；氯化钠：200mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。R2:抗人免疫球蛋白M抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20mmol/l；氯化钠：150mmol/L；防腐剂4.1.2试剂准备：试剂为即用式。4.1.3试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：90天。4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。4.2校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgM校准品对自动分析仪进行校准4.3质控品：使用正常值、病理值复合控制品。5仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪,西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6操作步骤6.1样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。6.3项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪,西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪,西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。7质量控制在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。8计算方法以IgM复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以g/l报告。9参考值成人0.4-2.3g/L(40-230mg/dL；0.4-2.4umol/L)儿童及青少年0-1岁0.00-1.45g/L(0-145mg/dL；0.00-1.49umol/L)1-3岁0.19-1.46g/L(19-146mg/dL；0.19-1.50umol/L)4-6岁0.24-2.10g/L(24-210mg/dL；0.25-2.16umol/L)7-9岁0.31-2.08g/L(31-208mg/dL；0.32-2.14umol/L)10-11岁0.31-1.79g/L(31-179mg/dL；0.32-1.84umol/L)12-13岁0.35-2.39g/L(35-239mg/dL；0.36-2.46umol/L)14-15岁0.15-1.88g/L(15-188mg/dL；0.15-1.94umol/L)16-19岁0.23-2.59g/L(23-259mg/dL；0.24-2.67umol/L)我室的参考范围:0.35-2.6g/l10临床意义:正常的IgM由10个重μ链和10个κ或λ轻链组成，IgM分子中的κ或λ轻链总是相等的。还有1个J链将所有的μ链连接在一起，简言之，IgM与IgG相比，是五聚体的结构。IgM的相对分子量为900000，在免疫球蛋白中最大，但其只占血浆免疫球蛋白的6％。在感染后，IgM是最早出现的特异性抗体，能激活补体系统协助杀灭细菌。但是和IgG相比，在感染控制后IgM水平就会较快地下降。临床上比较IgG及IgM的滴度来鉴别急性与慢性感染。如以IgM为主，感染是急性的；以IgG为主，感染为慢性的（如：风疹、病毒性肝炎）。多克隆IgM水平升高见于病毒、细菌、和寄生虫感染，肝病，类风湿性关节炎，硬皮病，胆囊纤维化，和海洛因吸毒等。单克隆IgM水平升高见于Waldenstrom巨球蛋白血症。IgM流失增加见于肠道病和烧伤的蛋白流失。IgM的合成减低见于获得性及先天性免疫缺陷综合征。11操作性能11.1线性范围：0.25-6.5g/l11.2精密度采用内部协议重复检测人样本和质控品（n=21），结果如下：标准应用（IGM-2）样本批内精密度批间精密度均值变异系数%均值变异系数%g/Lumol/Lg/Lumol/L低值质控0.750.771.811.091.122.00高值质控1.241.281.312.562.642.08人血清5.405.560.815.265.421.54敏感应用（IGMP2）样本批内精密度批间精密度均值变异系数%均值变异系数%g/Lumol/Lg/Lumol/L高值质控0.0340.0353.850.0340.0351.99低值质控0.7610.7840.510.7460.7680.49人血清1.3831.4240.501.3971.4390.3412超出范围结果处理本法线性上限为6.5g/l。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：4稀释，重新测定，结果乘以5。13病危报警值的处理无警告/危急值14方法局限性14.1准则：回收率在初始值±10%的范围内。14.2标准应用（IGM-2）14.2.1黄疸：I指数达到60（近似结合和非结合胆红素的浓度为60mg/dL或1026µmol/L）时，未出现明显干扰。14.2.2溶血：H指数达到1000（近似血红蛋白浓度为：621umol/L（1000mg/dL））时未出现明显干扰。14.2.3脂血（脂肪乳剂Intralipid）：L指数达到3000时未出现明显干扰。L指数（相当于浊度）和甘油三酯浓度之间的相关性较差。14.2.4多克隆样本中由于抗原过剩可能造成错误的低值在浓度达到230g/L（23000mg/dL；236.9umol/L）时。14.2.5免疫球蛋白A,G,M之间没有交叉反应。14.3敏感应用（IGMP2）：14.3.1黄疸：I指数达到60（近似结合和非结合胆红素的浓度为60mg/dL或1026µmol/L）时，未出现明显干扰。14.3.2溶血：H指数达到1000（近似血红蛋白浓度为：621umol/L（1000mg/dL））时未出现明显干扰。14.3.3脂血（脂肪乳剂Intralipid）：L指数达到3000时未出现明显干扰。L指数（相当于浊度）和甘油三酯浓度之间的相关性较差。14.3.4多克隆样本中由于抗原过剩可能造成错误的低值在浓度达到30g/L（3000mg/dL；187.5umol/L）时。14.3.5免疫球蛋白A,G,M之间没有交叉反应。14.3.6联合其他比浊方法测定时，由于个体样本特性的差异（可使用电泳评估），本测试尚不能为单克隆γ-球蛋白病病人提供准确结果。15补救措施当仪器发生故障时，迅