几种无机离子对黄孢原毛平革菌的酶活性影响分析及挤塑板玻纤网外保温外饰涂料施工方案

施工工艺PAGEPAGE24几种无机离子对黄孢原毛平革菌的酶活性影响分析摘要：以黄孢原毛平革菌为代表的白腐真菌，其分泌的木质素过氧化物酶（LiP）和锰过氧化物酶（MnP）等酶系能降解木质素以及前体类似物。本研究对几种无机金属离子、无机阴离子对黄孢原毛平革菌所产酶系中的木质素过氧化物酶（LiP）和锰过氧化物酶（MnP）的酶活性影响进行了比对分析。结果表明，Fe3+对木质素过氧化物酶（LiP）和锰过氧化物酶（MnP）都有很强的抑制作用，Fe2+、Ca2+对木质素过氧化物酶（LiP）和锰过氧化物酶（MnP）表现出不同的促进作用，Br-比Cl-的激活作用稍弱。关键词：黄孢原毛平革菌；木质素过氧化物酶；锰过氧化物酶；酶活TheImpactofInorganicIonsonEnzymaticActivityofPhanerochaetechrysosporiumAbstract：AstherepresentativeofWhite-rotFungus,PhanerochaetechrysosporiumcansecreteLigninperoxidesandManganeseperoxidesandsoon,whichcandepredateLigninandPrecursoranalogs.ThroughusingInorganicionsandOrganicmoleculesasActivator，Enzymeactivityindifferentconditionswasresearched.TheresultsshowthatFe3+onLiPandMnPhadstronginhibitoryeffect,butFe2+andCa2+onthoseshoweddifferentpromotingeffect,AndBr-thanCl-activationinvitromp,EDTAisliftingofheavymetalionsonenzymeinhibition.Keyword：Phanerochaetechrysosporium，LigninPeroxides，Manganeseperoxides，Enzymaticactivity木质素广泛存在于植物细胞中，是自然界中含量最多的有机可再生资源。在植物体内，木质素通过化学键和半纤维素连接，然后包裹在纤维素外，形成木质纤维素。木质素由于具有各种生物学稳定的复杂键型而不易被微生物降解。要解决如何高效利用木质纤维素这一问题，关键在于如何降解包裹在纤维素晶体外面的木质素以及半纤维素，从而增加纤维素表面积，使纤维素易于降解和利用[1]。随着人类可利用资源的越来越紧缺,木质素的微生物降解成了当今研究的热点。白腐真菌作为已知的唯一可独立降解木质素的微生物，其能分泌木质素过氧化物酶（LiP）、锰过氧化物酶（MnP）和漆酶（Laccase）等酶降系统[2]。在黄孢原毛平革菌的整个生长阶段，木质素过氧化物酶（LiP）的合成量要比锰过氧化物酶（MnP）大得多，它在木质素降解中起主要作用。同时，木质素过氧化物酶（LiP）是降解木质素的模型物，因此木质素过氧化物酶（LiP）在木质素降解中起主导作用[3]。而锰过氧化物酶（MnP）是几乎所有的木生白腐菌和各种土壤中的枯叶分解真菌所产生的，是最为普遍的木质素修饰过氧化物酶[4]。本文对几种无机金属离子、无机阴离子对黄孢原毛平革菌所产酶系中的木质素过氧化物酶（LiP）和锰过氧化物酶（MnP）的酶活性影响进行研究，以期通过比对分析，来为这两种酶的大规模应用提供一定的参考数据。1材料与试验方法1.1试验材料1.1.1菌种选用白腐真菌中的黄孢原毛平革菌为研究对象。1.1.2培养基（1）固体PDA培养基土豆浸出液200g，葡萄糖20g，琼脂20g。（2）液体培养基葡萄糖（碳源）10g/L、酒石酸铵（氮源）1.2mmol/L、醋酸-醋酸钠缓冲液0.2mol/L、KH2PO42.0g/L、CaCl20.130g/L、MgSO4·7H2O1.5g/L、吐温-800.5g/L、VA0.4mmol/L以及微量元素混合液10mL。（3）微量元素混合液MnSO42.9mmol/L、CaCl21.0mmol/L、NaCl0.15mmol/L、NaBr0.15mmol/L、ZnCl20.345mmol/L、FeSO40.358mmol/L、CuSO40.4mmol/L、CoCl2·6H200.458mmol/L、KAl（SO4）2·12H2O0.022mmol/L、HBO30.16mmol/L、NaMoO4·2H2O0.042mmol/L。1.1.3主要仪器设备752型紫外-可见分光光度计，SPX-250B-Z型生化培养箱，YXQ-LS-50S立式压力蒸汽灭菌器，SHZ型水浴恒温振荡器。1.2试验方法1.2.1粗酶液的制备将黄孢原毛平革菌接种在固体PDA培养基上，置于30℃恒温培养箱中培养。待菌种长满整个平板后取8mm菌塞，250mL摇装入液体培养基100mL，接入菌塞2个。30℃、120r/min恒温振荡培养。选取黄孢原毛平革菌第8d的培养液经4000r/min、15min离心后取上清液作为粗酶液。1.2.2酶活测定木质素过氧化物酶（LiP）：50mmol/L的酒石酸-酒石酸钠缓冲液（pH值约2.5）、去离子水、2mmol/L的蔾芦醇、4mmol/LH2O2以及一定量的粗酶液，用紫外-可见分光光度计检测310nm处在2.5min内吸光值变化；定义氧化1µmol/min蔾芦醇成蔾芦醛所需的酶量为1个酶活力单位。锰过氧化物酶（MnP）：50mmol/L的酒石酸-酒石酸钠缓冲液（pH值约5）、1.6mmol/LH2O2、6mmol/LMnSO4以及一定量的粗酶液，用紫外-可见分光光度计检测310nm处在4min内吸光值变化；定义氧化1µmol/minMn2+为Mn3+所需的酶量为1个酶活力单位。木质素过氧化物酶（LiP）和锰过氧化物酶（MnP）的性质测定方面，分别选择Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Fe2+、Fe3+、Zn2+、Cu2+、Ag+等金属离子，以及阴离子NO3-、Cl-、Br-作为效应物，在酶活力测试体系中，加入不同浓度的效应物，测定酶的相对活力。2结果与分析2.1不同金属离子对酶活性的影响向反应体系中加入浓度为50mmol/L金属离子溶液，使反应体系最终金属离子浓度为5mmol/L，预热至37℃，加入1.6mmol/L的H2O2溶液0.1mL启动反应，测定反应最初3分钟内λ=240nm处吸光度变化。其余相同温度、pH条件下测定酶活[5]。结果如图1、2所示。酶活力Enzymeactivity（%）0酶活力Enzymeactivity（%）020406080100120140160180481216202428浓度Concentration（mmol/L)123456789图1不同金属离子浓度与LiP酶活力关系图（注：1——Na+，2——K+，3——Mg2+，4——Zn2+，5——Fe2+，6——Fe3+，7——Ca2+,8——Cu2+，9——Ag+）由图1可知，随着Ca2+浓度的增加，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力增加，这说明Ca2+对木质素过氧化物酶（LiP）的酶活有一定促进作用。而随着Na+浓度的增加，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力减小，这说明Na+对木质素过氧化物酶（LiP）的酶活有一定抑制作用。而随着K+和Mg2+浓度的增加，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力变化不明显。Zn2+只有在浓度达到24mmol/L才表现出明显的促进作用，随之到达28mmol/L,又迅速降到原来水平。而随着Fe2+浓度从4mmol/L增加到24mmol/L，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力由慢而快地增大，超过12mmol/L，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力又由快到慢地降到原来水平。这说明Fe2+浓度为12mmol/L时，酶活力最高。Fe3+则是随着浓度的增加，到28mmol/L时，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力降到近乎丧失了酶活力，这说明Fe3+对木质素过氧化物酶（LiP）的酶活有一定抑制作用。在4～8mmol/L时，随着Cu2+浓度的增加，酶活也增加；当Cu2+浓度为8mmol/L时，酶活最高；8mmol/L之后，酶活随着Cu2+浓度的增加而降低。而Ag+浓度几乎不影响木质素过氧化物酶（LiP）的酶活性。图2不同金属离子浓度与MnP酶活力关系图（注：1——Na+，2——K+，3——Mg2+，4——Zn2+，5——Fe2+，6——Fe3+，7——Ca2+,8——Cu2+，9——Ag+）由图2可知，在同样条件下，锰过氧化物酶（MnP）的酶活力也随金属离子浓度改变而异。随着Ca2+浓度的增加，锰过氧化物酶（MnP）的酶活力逐渐增加，这说明Ca2+对锰过氧化物酶（MnP）的酶活也有一定促进作用。而随着Na+浓度的增加，锰过氧化物酶（MnP）的酶活力减小，这说明Na+对锰过氧化物酶（MnP）的酶活也有一定抑制作用。而随着K+和Mg2+浓度的增加，锰过氧化物酶（MnP）的酶活力也变化不明显。Zn2+只有在浓度达到24mmol/L才表现出明显的促进作用，随之到达28mmol/L,又迅速降到原来水平。这点与对木质素过氧化物酶（LiP）的作用类似。但是，较对木质素过氧化物酶（LiP）的酶活影响有所不同的是，Fe2+始终对锰过氧化物酶的酶活起促进作用，而且锰过氧化物酶（MnP）的酶活力与浓度成正比。Fe3+对锰过氧化物酶（MnP）的酶活也有一定抑制作用，而且锰过氧化物酶（MnP）的酶活力与Fe3+浓度成反比。在4～8mmol/L时，随着Cu2+浓度的增加，酶活也增加，当Cu2+浓度为8mmol/L时，酶活最高；8mmol/L之后，酶活随着Cu2+浓度的增加而降低，这与对木质素过氧化物酶（LiP）的酶活影响比较分析，其结果近乎类似。而Ag+浓度也几乎不影响锰过氧化物酶（MnP）的酶活力。2.2阴离子对酶活性的影响向反应体系中加入浓度为50mmol/L阴离子表面活性剂，使反应体系最终阴离子浓度为5mmol/L，预热至37℃，加入1.6mmol/L的H2O2溶液0.1mL启动反应，测定反应最初3分钟内λ=240nm处吸光度变化。其余相同温度、pH条件下测定酶活[6]。结果如图3所示。图3不同阴离子浓度与LiP酶活力关系图（注：1——Cl-，2——Br-，3——NO3-）由图3可知，阴离子表面活性剂对木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力有明显的影响。在15～30mmol/L时，随着Br-和Cl-浓度的增加，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力升高，这说明Br-和Cl-对木质素过氧化物酶（LiP）的酶活有一定促进作用。在30～105mmol/L时，随着Br-和Cl-浓度的增加，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力降低，酶活力与浓度关系成反比，这说明Br-和Cl-对木质素过氧化物酶（LiP）的酶活有一定抑制作用。结果表明，当30mmol/L时，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力达到最大。但是，对其作用方向是激活或是抑制尚无一个统一的结果，只是Br-比Cl-的激活作用稍弱。而随着NO3-浓度的增加，木质素过氧化物酶（LiP）的酶活力变化不明显。3结论（1）经过木质素过氧化物酶（LiP）和锰过氧化物酶（MnP）的酶学性质对比分析，表明Fe3+对木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶（MnP）都有很强的抑制作用，Fe2+、Ca2+则对木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶（MnP）表现出不同的促进作用。此外，Na+对木质素过氧化物酶(LiP)表现出一定的抑制作用，对锰过氧化物酶（MnP）作用却不明显，Cu2+对锰过氧化物酶（MnP）有很强的促进作用但对木质素过氧化物酶(LiP)作用不明显。（2）在阴离子影响酶活性方面，Br-比Cl-的激活作用稍弱。这与具体的反应机理有关，缺乏对照的实验将很难给出客观的数据分析。参考文献：[1]周群英，王士芬.环境工程微生物学[M].北京：高等教育出版社，2010.[2]董旭杰，曹福祥，陈静，吕聪.3种白腐菌木质素降解酶的比较[J]，中南林业科技大学学报.2007,27（3）：131-135.[3]王敏.白腐菌降解木质素研究进展[J]，衡水学院学报，2011,12（1）：51-53.[4]索凡，朱启忠，尚立国，宋炳红，李文静.白腐菌F-9过氧化物酶的酶学性质研究[J]，江苏农业科学，2010（3）：407-409.[5]郭蔼光.基础生物化学[M].北京：高等教育出版社，2000.[6]张红，张剑，周婷，王丽.无机阴离子对两种淀粉酶活力的影响，武汉工业学院学报[J].2008,27(1)：18-19，42.挤塑板外墙外保温面饰涂料施工方案20XX年8月挤塑板外墙外保温面饰涂料施工工艺一、编制依据1、外墙外保温建筑构造99J121-2；2、88J2-4墙身-外墙保温；3、88JZ2挤塑聚苯板保温构造；4、外墙外保温施工技术规程DBJ/T01-38-2002；5、建筑装饰装修工程质量验收统一标准GB50204-20026、外墙外保温聚合物砂浆质量检验标准JG149-20037、本公司制定的企业施工规程及图集二、保温体系构造基本做法首层加强做法三、作业条件1、总包方为本工程提供室外垂直运输设备。现场施工及生活所需的水电及工人住宿的临建设施等。2、脚手架或吊篮按外装修用改装完毕，并经安全人员检查合格。3、基层墙体垂直度要求为全高允许偏差10㎜以内，表面平整度在8㎜以内，墙面的水泥灰浆应清除，墙表面的凸起物应剔除，外墙上的锣栓点堵严。4、门窗框及墙身上各种进户管线，水浴管架及各种预埋管件架按设计安装完毕。5、主要材料：聚合物粘结砂浆、挤塑板、界面剂、聚合物抹面砂浆、耐碱玻璃纤维网格布、尼龙胀栓等。6、施工机具：外接电源设备、电动搅拌器、角磨机、电锤、称量衡器、密齿手锯、壁纸刀、剪刀、钢丝刷、腻子刀、抹子、阴阳角抿子、托线板、2m7、气候条件：操作地点环境和基底温度不低于5℃四、劳动力组织（一）劳动力、工程进度计划根据招标文件工期条款、总包方工程施工进度计划及现场施工条件，我方安排工程施工进度和劳动力用工计划。（二）物资供应工程所需材料均由我公司物资部按计划供应，用于工程主体的所有材料保证质量，检测报告、合格证齐全，验收合格方可进入施工现场。薄抹灰外保温系统的性能指标试验项目性能指标吸水量，g/m2，浸水24h≤500抗冲击强度，J普通型(P型)≥3.0加强型(Q型)≥10.0抗风压1）抗风压值不小于工程项目的风荷载设计值耐冻融表面无裂纹、空鼓、起泡、剥离现象水蒸气湿流密度，g/≥0.85不透水性试样防护层内侧无水渗透耐候性1）表面无裂纹、粉化、剥落现象1）可由设计或供需双方协商确定。界面剂技术性能指标试验项目性能指标拉抻粘接强度（与XPS板）Mpa原强度≥0.7耐水(7d)≥0.5耐冻融（10次）≥0.5可操作性，h（与XPS板）1.5h-4.0h柔韧性≤3.0胶粘剂的性能指标试验项目性能指标拉伸粘接强度，MPa（与水泥砂浆）原强度≥0.60耐水≥0.40拉伸粘接强度1），MPa（与膨胀聚苯板）原强度≥0.10，破坏界面在膨胀聚苯板上耐水≥0.10，破坏界面在膨胀聚苯板上可操作时间，h1.5～4.0挤塑聚苯板主要性能指标试验项目性能指标导热系数，W/(m·K)≤0.030表观密度，kg/m330～50抗拉强度，MPa≥0.25压缩强度，MPa≥0.25尺寸稳定性，%≤0.20氧指数，%（阻燃型）≥26抹面胶浆的性能指标试验项目性能指标拉伸粘接强度，MPa(与膨胀聚苯板)原强度≥0.10，破坏界面在膨胀聚苯板上耐水≥0.10，破坏界面在膨胀聚苯板上耐冻融≥0.10，破坏界面在膨胀聚苯板上柔韧性抗压强度/抗折强度(水泥基)≤3.0开裂应变(非水泥基)，%≥1.5可操作时间，h1.5～4.0耐碱网布主要性能指标试验项目性能指标单位面积质量，g/m2≥130耐碱断裂强力（经、纬向），N/50m≥750耐碱断裂强力保留率（经、纬向），%≥50断裂应变（经、纬向），%≤5.0锚栓技术性能指标试验项目技术指标单个锚栓抗拉承载力标准值，kN≥0.60单个锚栓对系统传热增加值，W/(K·m2)≤0.004其他材料符合各省市建筑和防火规程。五、施工工序贴挤塑板从下往上，贴网，安装尼龙胀栓从上往下施工。具体工艺流程：基层清理——抄平放线——挤塑板涂界面剂——配聚合物粘结砂浆——粘贴挤塑板——锚固件安装——配制聚合物抹面砂浆——抹一遍罩面砂浆——压入网格布——抹第二遍罩面砂浆——刮腻子——面饰涂料。外墙外保温的主要施工步骤简述如下：1、基层处理：将墙面的混凝土残渣和脱模剂必须清理干净，墙面平整度超差部分应剔凿或修补。伸出墙面的（设备、管道）联结件已安装完毕，并留出外保温施工的余地。2、控线挂基准线：根据建筑立面的设计和外墙外保温的技术要求，在墙面弹出外门窗水平、垂直控制线及伸缩缝线，装饰缝线，在建筑外墙大角挂垂直基准钢线，每个楼层适当位置挂水平线，以控制墙面的垂直度和平整度。3、挤塑板涂界面剂：在挤塑板表面（两面）均匀涂刷一薄层界面剂，以增强挤塑板与聚合物砂浆之间的粘结力。4、配制粘结用聚合物砂浆，将抹灰砂浆胶粉与水按5：1重量比配制，用电动搅拌器搅拌均匀，一次配制用量以一小时内用完为宜；配好的料注意防晒避风，超过可操作时间不准再度加水使用。集中搅拌，专人定岗。5、粘贴挤塑板（以下简称保温板）使用厚度30mm的挤塑板，用抹子在每块保温板（标准板尺寸为600mm×1200mm*30）四周边上涂上宽约5厘米，厚约1厘米的粘结剂，然后再在保温板同一侧中部均匀刮上5块直径约12厘米、厚约1厘米（2）涂好后立即将保温板贴在墙面上，动作要迅速，以防止粘结剂结皮而失去粘结作用。（3）保温板贴在墙上时，应用2米靠尺进行压平操作，保证其平整度和粘结牢固。板与板之间要挤紧，不得有较大的缝隙。若因保温板面不方正或裁切不直形成大于2mm的缝隙，应用保温板条塞入并打磨平。（4）保温板应水平粘贴，保证连续结合，而且上下两排保温板应竖向错缝搭接，搭接长度不小于10厘米。（5）在墙拐角处，应先排好尺寸，裁切保温板，使其粘结时垂直交错连接，保证拐角处顺直且垂直。（6）在粘贴窗框四周的阳角和外墙阳角时，应先弹出基准线，作为控制阳角上下竖直的依据。（7）保温板连接处不能粘有粘结剂。6、尼龙胀栓的安装（1）使用电锤进行打孔以安装尼龙胀栓。结构墙体上的孔深应在5厘米以上，呈梅花状布置。建筑物标高3层以下4层—6层7层—10层11层—14层15层—18层尼龙胀栓数量（个/m2）23568（2）打完孔后，将尼龙胀栓的塑料圆盘装入孔中，尼龙胀栓应在粘贴挤塑板的聚合物粘结砂浆初凝后，方能钻孔安装。7、配制抹面砂浆：配制及搅拌方法与粘结砂浆相同。8、抹底层聚合物抹面砂浆（1）在挤塑板面抹底层抹面砂浆，厚度2～3mm（2）贴压网格布：将网格布绷紧后贴于底层抹面砂浆上，用抹子由中间向四周把网格布压入砂浆的表层，要平整压实，严禁网格布皱褶。网格布不得压入过深，表面必须暴露在底层砂浆之外。单张网格布长度不宜大于6m。铺贴遇有搭接时，必须满足横向100mm、纵向80mm的搭接长度要求。（3）抹面层砂浆：在底层抹面砂浆凝结前再抹一道抹面砂浆罩面，厚度1～2mm，仅以覆盖网格布、微见网格布轮廓为宜。面层砂浆切忌不停揉搓，以免形成空鼓。砂浆抹灰施工间歇应在自然断开处，方便后续施工的搭接，如伸缩缝、阴阳角、挑台等部位。在连续墙面上如需停顿，面层砂浆不应完全覆盖已铺好的网格布，需与网格布、底层砂浆呈台阶形坡茬，留茬间距不小于150mm，以免网格布搭接处平整度超出偏差。9、缝的处理：留设伸缩缝时，分格条应在进行抹灰工序时就放入，待砂浆初凝后起出，修整缝边。缝内填塞发泡聚乙烯圆棒作背衬，直径或宽度为缝宽的1.3倍，再分两次勾填建筑密封膏，深度为缝宽的50～70%。10、加强层做法：考虑首层与其它需加强部位的抗冲击要求，在标准外保温做法基础上加铺一层网格布，并再抹一道抹面砂浆罩面，以提高抗冲击强度。在这种双层网格布中，底层网格布可以是标准网格布，也可以是质量更大、强度更高的增强网格布，以满足设计要求的抗冲击强度为原则。加强部位抹面砂浆总厚度宜为5～7mm。在同一块墙面上，加强层做法与标准层做法间应留设伸缩缝。11、装饰线条做法：装饰缝按本工程建筑设计图处理成凹形或凸形。凸形称为装饰线，以苯板来体现为宜，此处网格布与抹面砂浆不断开。粘贴苯板时，先弹线标明装饰线条位置，将加工好的苯板线条粘于相应位置。线条突出墙面超过100mm时，需加设机械固定件。线条表面按普通处保温抹灰做法处理。凹形称为装饰缝，用专用工具在苯板上