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文档简介

蕐三节蛋白质的分离纯化」一、蛋白质分离纯化的一般原则蛋白质纯化的总目标增加制品的纯度或比活(1)前处理:把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态蛋白质的分离释放出来,并保持原来的天然状态,不丢失生物活性。(2)粗分级分离:将所要的蛋白质与其他杂蛋白分离开来纯(3)细分级分离:样品的进一步纯化步(4)结晶:是蛋白质分离纯化的最后步骤。1、前处理:组织和细胞的破碎电动捣碎机(Waringblender)动物组织和细胞:匀浆器破碎超声波处理(u1trasonication)了研磨的方法破碎植物组织和细胞:纤维素酶处理超声波震荡细菌细胞的破碎:与砂研磨高压挤压溶菌酶处理(以分解肽聚糖)等提取蛋白液水溶性蛋白用中性缓冲溶液抽提酸性蛋白用稀碱性溶液抽提,脂溶性蛋白用表面活性剂抽提等。2、粗分级分盐析简便方法」等电点沉淀特点处理量大有机溶剂分级分离既能除去大量杂质(包又能浓缩蛋质溶液蛋白质提取液体积较大,则可采用超过滤凝胶过滤冷冻真空干燥或其他方法(如聚乙二醇浓缩法)3、细分级分离」凝胶过滤般使用层析法包括离子交换层析吸附层析亲和层析等区带电泳必要时还可选择电泳法等电聚焦等作为最后的纯化

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