人工冬虫夏草与野生冬虫夏草差异蛋白分析

1人工冬虫夏草与野生冬虫夏草差异蛋白分析王艺璇利用PDQUESTTMBasic软件对冬虫夏草图谱进行匹配分析后，建立冬虫夏草共有蛋白凝胶作为参照胶，分别对人工虫草图谱为分析胶进行组间匹配，进行差异表达分析经过分析后得到感光度sensity=3.0的差异表达蛋白点。结果显示，在野生冬虫夏草与人工冬虫夏草的对比分析中，仅存在野生冬虫夏草中的差异表达蛋白25个，如图38；仅存在于人工冬虫夏草中的差异表蛋白2个，表达量明显差异的蛋白3个，如图39。这些差异蛋白多分布在15kD~30kD的范围内，多为酸性蛋白。.2人工冬虫夏草菌虫复合体与野生冬虫夏草菌虫复合体差异蛋白分析利用PDQUESTTMBasic软件对冬虫夏草虫体图谱进行匹配分析后，建立冬虫夏草菌虫复合体共有蛋白凝胶作为参照胶，对人工虫草菌虫复合体部分图谱为分析胶进行组间匹配，进行差异表达分析经过分析后得到感光度sensity=3.0的差异表达蛋白点。结果显示，在野生冬虫夏草菌虫复合体与人工冬虫夏草菌虫复合体部分的对比分析中，仅存在于野生冬虫夏草菌虫复合体中的差异表达的蛋白30个，如图40；仅存在于人工冬虫夏草菌虫复合体部分的差异蛋白4个，如图41。这些差异蛋白多分布在30kD~75kD的范围内，多为中性及碱性蛋白3人工冬虫夏草子座与野生冬虫夏草子座差异蛋白分析利用PDQUESTTMBasic软件对冬虫夏草子座图谱进行匹配分析后，建立冬虫夏草子座共有蛋白凝胶作为参照胶，对人工虫草子座图谱为分析胶进行组间匹配，进行差异表达分析经过分析后得到感光度sensity=3.0的差异表达蛋白点。结果显示，在野生冬虫夏草子座与人工冬虫夏草子座部分的对比分析中，仅存在于野生冬虫夏草子座中的差异表达蛋白22个，如图42；仅存在于人工冬虫夏草子座部分的差异表达蛋白4个，如图43。图谱显示，这些差异蛋白多分布在25kD~50kD的范围内，多为酸性蛋白。本部分研究通过2-DE技术，获得了野生冬虫夏草、人工冬虫夏草及其菌虫复合体、子座的蛋白质表达图谱。图谱分析发现野生冬虫夏草与人工冬虫夏草蛋白质均具有良好的多样性，蛋白质种类丰富；野生冬虫夏草与人工冬虫夏草蛋白质斑点分布模式相似，表明蛋白质在冬虫夏草种内表达稳定。冬虫夏草共有蛋白质验证前期课题组通过双向电泳技术(2-DE)得到冬虫夏草共有蛋白质斑点88个[29]。本研究在此基础上，对野生冬虫夏草整体、菌虫复合体、子座及人工冬虫夏草整体、子座、菌虫复合体进行2-DE分析，建立蛋白质双向电泳图谱，使用PDQUEST对其进行图像分析，验证得到：野生冬虫夏草中存在共有蛋白质70个，野生冬虫夏草子座中存在共有蛋白质60个，野生冬虫夏草菌虫复合体存在共有蛋白质67个；人工虫草中存在共有蛋白质59个，人工虫草子座中存在共有蛋白质53个，人工虫草菌虫复合体存在共有蛋白质54个。野生冬虫夏草样品中共有斑点均多于人工样品人工冬虫夏草与野生冬虫夏草差异蛋白分析蛋白质含量上，野生冬虫夏草样品蛋白质含量为0.65%，人工冬虫夏草样品为0.57%；蛋白质种类上，两种冬虫夏草样品均显示出良好的多样性，但图谱显示野生冬虫夏草样品蛋白质斑点数为550，人工冬虫夏草样品为364，差异蛋白多分布在15kD-30kD的范围内，多为酸性蛋白。人工冬虫夏草菌虫复合体与野生冬虫夏草菌虫复合体差异蛋白分析蛋白质含量上，野生冬虫夏草菌虫复合体样品蛋白质含量为0.78%，人工冬虫夏草菌虫复合体样品为0.67%；蛋白质种类上，两种菌虫复合体样品均显示出良好的多样性，但图谱显示野生菌虫复合体样品蛋白质斑点数为468，人工菌虫复合体样品为379，差异蛋白多分布在30kD-75kD的范围内，中性及碱性蛋白占多数。人工冬虫夏草子座与野生冬虫夏草子座差异蛋白分析蛋白质含量上，野生冬虫夏草子座样品蛋白质含量为0.86%，人工冬虫夏草样品为0.54%；蛋白质种类上，两种冬虫夏草子座样品均显示出良好的多样性，但图谱显示野生子座样品蛋白质斑点数为535，人工冬虫夏草样品为300，差异蛋白多分布在25kD-50kD的范围内，多为酸性蛋白。综上所述，野生冬虫夏草及其菌虫复合体、子座虽然与人工冬虫夏草2-DE图谱相似，具有相似的蛋白质成分表达，但各部分蛋白质含量与蛋白斑点数均高于人工品，差异蛋白主要集中在15kD-75kD的范围内，且多为酸性蛋白。其中差异最大的是子座部分。蛋白质含量上野生冬虫夏草子座比人工冬虫夏草子座高出约0.3%，蛋白质种类上，野生冬虫夏草子座比人工冬虫夏草子座多出近200种蛋白质。提示在冬虫夏草菌侵染小金蝠蛾幼虫的过程中，环境因子对冬虫夏草内在化学成分表达呈正向的影响揭示了蛋白质层面。表明了野生冬虫夏草蛋白质含量更高，多样性更丰富，远优于人工冬虫夏草。对野生冬虫夏草、菌虫复合体、子座及人工冬虫夏草、菌虫复合体、子座的蛋白质组进行2-DE分析，发现野生样品中冬虫夏草共有蛋白质及正伪品指标性蛋白质均多于人工样品。一方面证实了实验所用人工冬虫夏草样品区别于伪品并能够从蛋白质组层面分辨，另一方面说明了人工样品蛋白质种类的多样性不及野生样品。2-DE图谱显示冬虫夏草各样品蛋白质较丰富，在分子量10kD-90kD范围内普遍分布，多样性良好。野生冬虫夏草及其菌虫复合体、子座与人工冬虫夏草2-DE图谱相似，具有相似的蛋白质成分表达，但各部分蛋白质含量与蛋白斑点数均高于人工品，差异蛋白主要集中在15kD-75kD的范围内，且多