-基因工程的基本操作程序

1.2基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用

载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。

才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。一、目的基因的获取1目的基因主要是编码蛋白质的基因：如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因、具调控作用的因子等。2获取目的基因的常用方法：1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成1骨.从晌基刮因裙文脊库杏中认获筋取榴目蜂的享基劣因1贿.基别因高文眯库锡的岩概舒念:将呆含顺有抛某钱种投生技物外不棉同羡基兆因装的狱许疤多D沿N逼A片暑断苹，恰导呈入嚼到脆受庄体冲菌必的群挠体坐中建，船各持个凳受晌体宏菌盆分洪别倾含饮有瞧这投种聋生监物塘的膛不歌同景基占因品。2不.基附因求文末库运的长种撤类:基桃因锋组图文疲库晴：含洁有访一柔种翻生洗物沾的全简部基豆因部认分难基出因救文俩库康：只佩包辽含棒了财一磁种梅生逗物控的部弓分基狮因障，如猎：c田D独N苦A文岸库基齐因签组D毒N漏A文卵库巨与c蔑D啊N烘A文需库某林生充物名体风内铜全小部D揭N晒A许访多D碰N遥A片怖段受库体阀菌炒群未体限制酶与秤运惊载植体鸭连浊接昆导蜂入基织因奔组定文廊库c弃D叠N源A反转录受企体旺菌犹群捕体与飞运器载作体尊连片接们导奖入c巴D壤N盏A文肚库某列种软生悲物揭某伐个听时第期婚的m袭R社N好A基弹因沈的慌结抽构非啊编驴码律区非资编虎码聚区编咳码帜区R槐N各A聚陪合浑酶行结神合律位绣点外劣显幻玉子内临含公子终只止尖子启啊动喝子原静核真技核原爆核逝细帖胞伍的腹基判因铁结半构非轰编龙码耗区非尿编醒码堪区编旨码肢区编妹码污区些上递游编旨码天区撤下谱游与R粮N趋A聚洒合砌酶瓣结剥合婚位泉点启堵动姻子终燃止贫子①不喜编膝码申蛋身白扬质惠。：斤编忍码钻蛋疫白淡质,连改续阔不恭间脖断编吨码山区非起编妄码旗区②调估控蚁遗犯传闪信园息忧表馋达,上游头的R灾N霜A聚随合晨酶偶结讲合似位骡点:基凶因打结你构真全核喘细盆胞谱的殊基忍因优结患构编稻码盏区非弟编瓶码信区非喊编械码划区内抓含软子外杰显乏子启湿动薄子终柜止宋子编翻码扑区俊上继游编撤码洗区薄下业游编货码介区非姿编巡寿码乓区外兵显雨子恨：伞能验编妙码谅蛋爱白筑质纵的芝序梅列内扶含闭子律：淘不赠能桶编冈码叙蛋历白称质塞的院序留列：洒有蒙调宫控贼作再用,上窃游离有R驾N骡A聚伸合插酶给结哲合胁位冶点(启豪动刑子)。与R碌N售A聚妥合愤酶拾结校合丙位疏点基疼因裙结沫构原眉核虏细蒜胞蜻与殃真远核卧细及胞乱的念基羊因夫结侧构芽比康较原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的，边_________边_________编码区是间隔的、_____的，先_____后_____相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的连鼓续不迅连槐续编治码汁区非连编扩码转罪录翻割译转糠录翻粮译基斯因蓄文意库熄的即构透建春方载法①基杰因戴组方文愈库长的蝴构调建提粗取终某勺种皆生佣物杜的全度部D续N而A用夏适倘当淡的取限迹制悲酶家酶篇切一码定舰大率小废的D近N墨A片念段将D吩N蹲A片眉段狡与闹载声体货连游接重饿组奥载肌体基习因老组劝文港库导伸入涝受王体努菌缝中芹储寄存②c刘D病N蚀A文暑库勒的制构扭建-象-箭-处-贼-逆欧转窜录宗法滴：提白取引某够种桐生捧物旋的听某哈器宿官惊或特建定发盐育牌时毯期石的m详R观N拘A单迟链D耗N筐A双纤链c誉D投N烂A片搜段重羽组景载缎体与检载王体普连乔接c询D宅N淡A文斩库反年（架逆党）俊转只录卷酶D衔N桌A聚弟合锁酶导皮入旧受暮体礼菌轰中斯储悠存思核考掉？真皂核爹生接物虾的件基俱因叉用主逆临转值录别法悲得才到群的c铸D父N顾A与波原兰基括因赤相乏同坊吗佩？真英核钻细冠胞毫的c药D私N熄A的么获亭取编查码告区非横编挺码评区非愉编央码贝区D详N握A聚房诚合称酶剪难接最有范关芝的菊酶R铸N云A聚影合迟酶m缺R赏N本A前广体m闻R壳N迅A单洪链D痰N翼Ac床D僻N拼A逆凯转辣录搜酶转夹录剪粒接逆艰转愧录复振制启怜动蚀子终术止识子基搂因不屈含非亩编巩码袭序倦列。豆即夹不赌含非时编流码钟区和内纠含仙子基捐因舰组D金N刊A文霞库弦与c解D纯N毁A文期库锻的颈比出较

文库类型cDNA文库

基因组文库

文库大小基因中启动子（具有启动作用的DNA片段）基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段）

基因多少

物种间的基因交流小大无有无有某租种杠生盼物赌的尾部丹分吼基未因某援种崖生离物访的凑全呜部旷基证因可词以部俘分暑基陡因炎可株以怎晒样廊从终基猛因馒文通库男中火得企到页我拜们筹所界需哗的老目桃的帐基玩因州呢?依唯据友：抹目钩的舒基篮因日的厅有阳关向信贺息获。如肚：名根诵据辫基使因浮的汽核谷苷牧酸忙序闻列基候因策的闭功云能基药因拖在摧染评色赖体切上县的深位府置基池因似的叹转枯录援产窄物m趣R爹N芽A基硬因碎翻领译协产葱物热蛋省白四质侦等托特月性④茄从门基辱因钞文钱库脉中妈得婶到牺目尚的寻基顿因习的虾方宪法2平.利忍用P配C盈R技敏术屿扩比增辟目怖的接基贸因1概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术。2原理：DNA复制原料：模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶多峰聚迁酶驶链晚式偷反问应体弊外特择定D光N懂A片消段3前提：已知目的基因的一段核苷酸序列P踢C绣R技嚷术斜的金操张作恢过坚程a字D沾N局A变努性（9谎0需℃并-磨9掘5希℃）舰：愈双缘瑞链D撇N甘A模复板甘在团热灿作拣用婚下唐，_遍_缘瑞_国_书_断而裂酷，逮形怠成_屈_气_谎_畅_咳_请_镜_b、蜂退凭火（复驳性5眉5皮℃集-征6均5剥℃）节：蓬系查统半温息度宇降症低朽，引半物与D尿N尾A模糕板录结牧合千，惜形素成朗局荒部_六_抚_抽_骆_壤_含_垮_。c、吉延旁伸（7深0饺℃冰-多7屡5稀℃）瘦：垒在T汇a割q酶的肾作录用趟下鼻，呜合匹成蛛与韵模田板堂互捡补凯的_协_包_洽_荐_矩_惭_锯_。氢道键单暑链D交N湿A双铲链D尸N阁A链d锅.重赞复a申.卸b谈.若c步粒骤查：董每本重踩复留一扎次塞，聪目舍的怖基览因帝增配加_器_份_倍一2、利利前用P窗C分R技悠术笼扩掏增甩目添的助基弊因P弃C停R技灰术坡的筒操址作乐过决程P坑C里R反带应礼体革系春中精目鞋的辜基增因种成指持数(栏2n)形御式待扩殃增P贩C露R技瞎术萝扩售增邀与D需N猜A复乎制迫的钉比棍较DNA复制PCR技术场所原理条件解旋方式酶特点结果碱厌基棒互缸补艰配兵对唐原义则碱题基妄互眠补垄配盒对则原额则四寇种晚脱航氧偏核絮苷豆酸悼、斩模吊板琴、痛酶夜、A扮T厉P四惧种辽脱蹄氧喉核腊苷酷酸鞭、情模涛板喇、探酶辜、引误物D确N趴A在弃高豆温丈下口变刃性糊解城旋解典旋断酶亭催络化泛解闻旋半勒保潜留毯复恭制士、边盯解晚旋谢边袭复绿制半窜保色留饶复戏制浑、全州解封旋溜再氏复泳制体绣外堂复握制主问要卸在誓细债胞筹核絮内大衣量耗的D来N研A片辅段形民成捞整阿个D捉N盐A分碗子热横稳臣定烘的D蛮N送A聚冶合万酶细离胞娇内金的D浆N淹A聚杰合凶酶港、制解晓旋撤酶趟等P促C队R技斑术部的孝操驾作剧过采程a患D茫N沈A变纯性（9哥0繁℃洁-艘9娘5盆℃）扬：贫双停链D是N董A模感板询在恢热贸作择用档下敲，_雪_魔_丑_颗_断竟裂幅，撕形眼成_概_催_片_咏_毫_冈_榜_b、康退肚火（复笼性5坛5萝℃竿-貌6码5壤℃）调：携系摇统汇温降度馅降椅低汗，引绢物与D西N访A模核板魂结牵合程，火形烈成拥局蔑部_永_姻_虾_这_兽_络_腊_。c、纵延剑伸（7固0岔℃艰-祝7漠5亿℃）岸：递在T妈a移q酶的订作刚用拍下达，至合己成练与两模歇板俗互湖补恳的_子_扮_逮_允_峡_物_似_。氢子键单务链D败N扇A双驻链D歌N鄙A链d辩.重锁复a驶.皆b哈.乖c步轰骤形：也每烛重蝴复享一羊次茫，矿目耽的替基仙因肾增诵加_季_秩_倍一人陪工族合件成压法反铃转应录枪法目合的弦基行因坝的差信衡使R篇N拜A目子的比基庄因化见学树合踢成桃法肽关链磁氨腔基连酸她序讽列信侵使R衣N提A序众列基窄因宰的伞核挖苷蹲酸掘序孕列目驶的鹿基著因合丈成推孔测推行测单芽链D风N挠A合丝式成在形基色因烟较糕小费，拍核屠苷董酸员序荒列浅已蛙知品的犬情久况冬下献，锋可徒以追利益用D或N肯A合株成献仪毁人忽工出合麦成蛋嘴白怨质违的歪氨波基北酸缠序史列m举R棵N协A的秋核枯苷神酸姑序炮列基吵因陶的竹核咏苷遍酸舍序南列目溉的召基搁因化辜学脏合至成推登测推戴测思映考逃：化撒学革法陈合束成匹的惧目赠的弦基笑因拜含内姑含商子们、红启兼动馆子委和窜终镜止寇子吗皱？目弄的绒基哭因义的筹获抖取1、聋从笔基辅因刃文返库弓中搁获侮取2、林利脉用P蹈C纽奉R技同术企扩瞧增3、描人余工寻合伞成种虽类基蒜因含组沉文黎库突：含袋有族一预种盟生饱物愧的全远部基素因部亮分划基形因瓜文吃库瓦：只乒包况含现了衔一熊种餐生蓝物粗的部及分基调因悬，如每：c扬D估N弱A文同库二布、蛛基严因园表乐达胡载泉体拳的帽构观建—吴—基朽因拌工冷程慌的谋核置心1目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。2基因表达载体的组成：复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因表革达漫载协体启秧动固子而：位渔于千基元因绪的狗首势端博的陈一圾段蕉特氏殊秆的D庸N笛A片枣断乓，店它培是R糕N聚A聚糠合同酶昨识朋别豆和慰结芝合沙的减部野位，康有伙了肢它跳才备能驱楚动植基辛因略转乖录告出m蠢R截N俗A，最挥终机获榴得化蛋侵白讯质终青止址子亭：位寻于辈基语因题的默尾勇端箩的朗一口段胸特贯殊腥的D窃N汁A片粘断逝，能绢终雾止m短R腔N局A的召转绢录标槽记矛基愧因的迟作骡用岭是为事了鉴绿别受霜体膝细帮胞兰中界是裙否滴含望有绘目孝的合基规因前，苍从柱而歉将翼有腔目棒的舱基期因押的剃细拳胞像筛商选穷出隆来基问因彼表砌达肿载辈体荣的膜构煮建舱过限程质索粒D盏N签A分叛子限添制纷酶重处著理两财个鞠切芦口获转得薯目透的尝基揭因D什N苦A连举接药酶重窑组D签N匠A分截子臣（勇重旱组珍质康粒景）同菌一芹种一消个友切切口两乡丰个扁黏港性旅末伍端注渗意逼：①载狼体与表暗达胸载耻体的勺区抽别动：乒二杏者闲都炒有估标相记阀基练因造和积复谈制恶原省点今两羡部明分D孝N按A片愁段兆。朵表谦达腊载外体愿在修载弓体己基殿础芽上竿增封加荒了目覆的舌基谣因草、遇启忆动该子处、功终需止尽子三脚部帖分滔结脊构②用娇到蚕的烦工甩具叉酶因：既庸用行到弟限宋制秆酶绣切永割觉载皇体民，脖又脾用贵到D追N课A连宣接姨酶疮将手目气的浸基菊因颠和余载筐体导拼碧接者，穷两队种饲酶沸作治用感的米化税学戚键岩都尼是传磷花酸伍二展酯田键③启握动膨子盏、菜终恐止包子对马于廉目喉的覆基通因毁表衫达渡必艺不岔可眨少④目阔的岔基建因夕不忌能低单主独斥进则入摆受娃体普细投胞榜，必迫需各以卷表脉达冶载疼体冤的追方桑式阿携手带严进残去乐。三闲、窗将混目贱的绒基枣因测导挖入绣受骂体劲细应胞1转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。3目的基因导入受体细胞的原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。1、米目财的科基慕因捆导派入甘植远物蒙细柿胞摔的娘方朵法（1）夜农岁杆磨菌毛转援化伍法①遣农雨杆末菌岭特山点器：钉易掩感旅染仙双拨子删叶假植烛物蓝和谅裸蜻子张植地物姑，逮对役大卡多遣数证单森子傲叶斯植矿物必没粥有什感君染法能导力畜。②千原积理丢：T研i质呜粒子上逐的T天-愧-售-窃D虽N伶A可歇以滋转醋移遭到淡受遮体茧细肿胞窃，问并桨整螺合蛇到驻受嫂体丝式细鞭胞腾染泼色乓体歌的D若N承A上悠。三爸、授目菠的酸基兴因码导英入世受量体倒细逃胞构跑建裂基择因怠表花达晶载匪体转亦入农酸杆数菌植库物竖细幻玉胞导熔入稳沿定晚维老持没和荷表拴达③过籍程少：1、波目臂的像基倘因短导找入姜植移物跨细益胞煤的领方衡法（2）判基休因态枪章法支：目梅的熊基箩因乒导掌入令单郑子卸叶糊植怕物沃细杰胞①属操搬作谊方屯法阔：右利雨用扰压跨缩篇气钓体锦产谁生质的拉动望力俊，筐将驰包认裹屋在急金怀属帽粒污表兔面淹的庸表你达刺载歉体D屑N秃A打世入碧受观体剖细亚胞创中编，林使历目解的边基冲因忆与硬其繁整情合厚并思表鹿达陷的忙方叠法。②钨缠粉渐粒物子牧和美金阀粉英粒叫子伯，向粒耻子遭的赶直郑径坑一霞般哄在0嫩.甚6～4府u包m。③适璃用思：贸通阀常益是单摊子酸叶愚植炸物1、墨目秘的济基奖因毕导都入去植削物涌细欠胞向的霉方卵法（3）液花岗粉吸管啦通峰道义法捷：将半目预的折基锅因绢导拿入斜植先物砌细谷胞①哈操鹊作炮方快法忌：骆在誓植敬物置花妇受棍粉浇后挑，竖花电粉罩形蓄成坑花艘粉驻管脱还盛末嘴愈朝合塞前渗期茂，厅剪赤去绣柱驴头庭，夕然栗后阵，趁滴阵入D狮N扯A（冬含学的锦基某因品）铅使显目筝的绑基训因倒借雷助暖花域粉猾管勉通辜道制进饶入遮受凶体稠细狐胞②特邻点:十粥分未简因便夸经溉济它。③例扔：爬转嫂基父因钻抗持虫笑棉2、俗将爬目有的丝式基烛因膏导错入童动昆物测细长胞①船方拼法高：治显棕微腊注趴射祖法①私程崖序目抓的引基搜因胀表优达贫载偿体执提财纯败取大卵涛（醒受塌精盟卵涛）谁显竖微廉注茂射若受中精转卵事新爬性临状廊动楼物3、捏将横目绿的绍基烤因稠导奔入槐微垄生铅物炉细爆胞①微撞生范物乎作砍受杂体遥细辫胞劲原雅因：繁鞠殖禁快静、鼓多棕为食单醉细通胞雀、瘦遗年传暖物过质习相谱对航少②烧常戴用所菌闪：谁大撒肠衬杆虹菌③苗常费用淹法蓬：C汪a2遍+处震理获抽得奏感高受呈态搁细拨胞④望过爪程读：C掏a2代+处奸理大郊肠粱杆莫菌感枯受找态细丘胞感锋受婶态犹细偷胞吸狐收D糠N封A表懒达剃载松体与暗感胜受杂态细康胞扮混剖合小既结深：将宴目灵的鄙基弟因哪导谷入技受奔体磁细颂胞生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术Ca2+处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子四蝴、承目作的专基侍因普的去检新测株与栏鉴封定导完入蛇过倘程伞完午成兄后呢，叛全裕部横受顶体费细晶胞拐都穗能粪摄浅入固重联组D脾N路A分览子绕吗汁？1真瞎正迹能吼摄迟入俗重拣组D员N倘A分倍子杯的垒受罚体你细疗胞封很制少防。2目旋的窃基梳因慈进初入寄受钱体促细叼胞菠后剂，昂是械否佛都均能刮稳产定紧维肠持尿和堪表爸达唯？不蠢一额定侦，糠需昂要道检掠测1、洲鉴沃定—量—分雷子恭水谨平蒸的际鉴馋定转已基标因右生物种的轧D翠N扭A探疤针1魔5N1踪蝶5N14N14N（1亦）的检减测葵转膀基翁因商生脂物嫩染态色让体分的别D鼓N服A孟上讯是先否屿插核入蠢了目阻的殊基揭因基抚因兼探赖针哪：放胡射伤性辞同热位骂素逼等冰标巨记教的弱D雕N庭A朵分院子方穗法—嫩—D轰N筋A分找子唉杂昆交昌技乓术变予性变拾性1、躁鉴我定—写—分稠子鞠水床平随的疤鉴眉定变械性方蓝法—捧—分谜子耗杂陕交柳技敲术（2）毫检爆测删目驰的阳基越因寇是魂否凯转某录谎出扭了m溉R理N用A探巧针1挎5N1糊5N转割基歪因呈生惯物的m视R悠N温A14N14N1、立鉴摄定—晨—分瓣子狠水才平黄的启鉴决定提狱取（3）绩检吵测闻目吩的氏基愿因牌是斧否浅翻资译阻成度蛋袭白吹质方牢法拘—行—万抗句原-抗皇体懂杂沫交苏云金杆菌B稳t毒嗓素扫蛋轮白将B苏t毒叹蛋泄白斤注贝射中小女鼠津体仪内从个小晌鼠膨血婶管暂抽缴出痒血顺液周分乓离棒出铜抗B耕t毒打素饮的里抗日体抗捐体蛋图白顺质出战现助杂井交魄带脱效分疑化组匪织捷培象养2、吼鉴道定—量—个币体尤水陪平丧的戏鉴夕定抗碰虫宝、治抗新病旦接刘种巨实畅验痛，祝活捉性宪比管较司实泳验例毯：垒用倦棉篇铃编饲羞喂激棉版铃耍虫骨，便如惜虫探吃蔽后摇不未出饿现沙中谱毒纵症附状壮，脊说银明权未患摄筒入贿目脉的呀基芽因由或借摄葱入晒目自的韵基阁因环未门表津达寻。斯如快虫接吃羽后敬中层毒触死估亡调，示则度说土明厅摄高入磁了嫌抗滑虫尘基善因迫并想得坊到你表怪达而。思习考布？不箱能零，促受做体嘉细貌胞孟必眉须您表翁现婆出缝特夺定牢的慌性倚状页，享才针能机说乌明丢目葬的岂基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