秦病毒感染的检测方法与防治原则

秦病毒感染的检测方法与防治原则第1页，课件共29页，创作于2023年2月病毒感染的实验室检查方法

直接病毒诊断病毒的分离培养与鉴定病毒感染的血清学诊断第2页，课件共29页，创作于2023年2月直接病毒诊断：细胞病理学方法:光镜下检查病变组织或脱落细胞中的特异性病毒

包涵体，DNA病毒在核内装配产生核内包涵体，RNA病毒在胞浆装配产生胞浆包涵体电子显微镜法:负染法（重金属染液，电子光束通过低电子密度的病毒颗粒但不能通过金属背景，病毒颗粒明亮清晰，负反差）、超薄切片法、immuneelectronmicroscope（抗体处理病毒颗粒形成病毒抗体复合物凝聚成团，高速离心负染后观察）

病毒抗原检测:胞内病毒抗原的检测：免疫荧光技术、免疫酶技术

胞外（游离）病毒抗原的检测：ELISA病毒核酸检测：核酸杂交技术

斑点分子杂交法、Southern印迹法、原位分子杂交法、Northern印迹法聚合酶链反应技术（PCR）第3页，课件共29页，创作于2023年2月（1）标本处理：

组织、细胞：粗提将沉渣、细菌、真菌等去除，释

放病毒，有的还需要提纯浓缩

体液：脑脊液、胸腔液、水泡液、尿液等直接接种培

养管

拭子：咽、眼、鼻拭子直接放入含有抗生素的培养管

病毒的分离培养与鉴定第4页，课件共29页，创作于2023年2月1动物接种2鸡胚接种鸡胚对多种病毒敏感，羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊、绒毛尿囊膜3组织培养原代细胞培养传1～10代二倍体细胞培养传50～100代传代细胞培养三大培养方法（2）分离培养方法器官培养组织培养

细胞培养

第5页，课件共29页，创作于2023年2月第6页，课件共29页，创作于2023年2月常用的细胞培养第7页，课件共29页，创作于2023年2月1CPE2hemadsorption病毒在细胞内增殖的指标正常细胞病变细胞（3）病毒的鉴定流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后24～48小时，在细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附动物及人的红细胞第8页，课件共29页，创作于2023年2月2、50%感染量ID50

或50%组织细胞感染量TCID50（

tissuecultureinfectivedose50）估计病毒感染性的强弱及含量，不能准确地测定感染性病毒颗粒的数量

病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起50%发生死亡或病变的最小病毒量病毒样本作10倍连续稀释

病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶（琼脂限制病毒的扩散），称蚀斑。一个蚀斑是由一个感染性病毒体复制增殖后形成的，称蚀斑形成单位（plaqueformingunit，PFU），病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位来表示（4）病毒数量与感染性的测定1、蚀斑测定比较准确地测定感染性病毒颗粒的多少第9页，课件共29页，创作于2023年2月第10页，课件共29页，创作于2023年2月

病毒的血清学诊断最有特异性中和试验补体结合试验血凝抑制试验免疫扩散等免疫标记技术流感病毒与患者血清中抗HA抗体（中和抗体）结合后，红细胞表面的糖蛋白受体就不能与HA结合，血凝现象被抑制。双份血清同时做血凝抑制试验，恢复期抗体效价比急性期高4倍或以上可确诊第11页，课件共29页，创作于2023年2月DiagnosisStrategyforViralInfection

第12页，课件共29页，创作于2023年2月ELISAforHIVantibody

第13页，课件共29页，创作于2023年2月第14页，课件共29页，创作于2023年2月

免疫预防1、人工被动免疫（1）天然被动免疫：通过胎盘的IgG和初乳中的IgA；（2）人工被动免疫：1）人胎盘或人血中提取出的免疫球蛋（IgG）；2）康复期病人的血清或高效价免疫血清（SARS病人恢复期血清）病毒感染的防治第15页，课件共29页，创作于2023年2月人工主动免疫灭活疫苗：乙脑疫苗狂犬病疫苗流感灭活疫苗HAV，HBV疫苗等减毒活疫苗：脊髓灰质炎疫苗麻疹疫苗腮腺炎疫苗风疹疫苗HAV疫苗亚单位疫苗：流感疫苗、乙肝疫苗第16页，课件共29页，创作于2023年2月人工主动免疫－病毒疫苗

减毒活疫苗（attenuatedlivevaccine）灭活疫苗（inactivatedvaccine）亚单位疫苗（subunitvaccine）基因工程疫苗（geneengineeredvaccine）基因工程亚单位疫苗（geneengineeredsubunitvaccine）基因工程载体疫苗（geneengineeredvectoredvaccine）基因缺失活疫苗（genedeletedlivevaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）。合成肽疫苗（syntheticpeptidevaccine）抗独特型抗体疫苗（anti-idiotypevaccine）第17页，课件共29页，创作于2023年2月活疫苗（livevaccine）减毒活疫苗基于基因工程技术的新型活疫苗遗传重组活疫苗基因缺失活疫苗载体活疫苗第18页，课件共29页，创作于2023年2月减毒活疫苗(attenuatedlivevaccine)自然或人工选择法（如Ts株）所筛选的对人低毒或无毒的变异株，如脊灰、流感、麻疹的减毒株优点：模拟自然感染，免疫效果好，局部IgA。理论上的缺点，实际工作中少见变异株可能回复到有毒力的野生株如果机体免疫缺陷，减毒株仍可能引起感染或并发症可能激活机体内其它病毒的感染减毒活苗可能引起持续感染成功的范例：1961年我国应用脊灰疫苗，脊灰发病率大幅度下降。1980年天花病毒灭绝第19页，课件共29页，创作于2023年2月遗传重组活疫苗将野毒株表面抗原基因与弱毒株其他基因组合而获得减毒活病毒适用于基因组分节段双链RNA病毒，如流感病毒、轮状病毒等第20页，课件共29页，创作于2023年2月基因缺失活疫苗利用DNA重组技术，定向缺失病毒基因组的某一区段，使病毒丧失毒力而保留增殖能力和免疫原性优点：疫苗株的遗传背景清楚，不易突变回到野毒株第21页，课件共29页，创作于2023年2月载体活疫苗利用DNA重组技术，将编码病毒抗原的基因插入到另一无毒力的载体病毒，使之高效表达易建立多价疫苗载体病毒常用的有痘苗病毒、腺病毒、HSV-1第22页，课件共29页，创作于2023年2月灭活疫菌（inactivatedvaccine）灭活全病毒疫苗亚单位疫苗合成肽病毒疫苗基因工程疫苗独特型病毒疫苗核酸疫苗第23页，课件共29页，创作于2023年2月灭活全病毒疫苗物理或化学方法灭活病毒。适用烈性或易变异病毒如乙脑病毒、狂犬病病毒、流感病毒，常用甲醛液作为灭活剂优点：生产简单、易保存运输缺点需要大量培养病毒，成本高无局部抗体，不激活CTL，可激活TDTH甲醛灭活的麻疹病毒和RSV疫苗可加重疾病，机制不详第24页，课件共29页，创作于2023年2月亚单位疫苗（subunitvaccine）种类化学方法制备：如HBsAg和流感HA基因工程亚单位疫苗优点不含病毒核酸，仅有能诱导中和抗体的衣壳蛋白或包膜表面抗原。免除了回复突变和交叉复活的可能消除肿瘤病毒的潜在的致癌作用第25页，课件共29页，创作于2023年2月合成肽病毒疫苗人工合成病毒保护性抗原决定簇肽段优点制备容易，可大量生产，易保存，副作用少理论与实践上的缺点合成肽不具有高级结构，免疫原性弱，使用时需要加佐剂。不同肽免疫活性有差异。部分肽只激发B细胞表位，缺乏激发TH细胞的表位第26页，课件共29页，创作于2023年2月基因工程疫苗利用DNA重组技术制备的生物制品。如将编码病毒特异抗原的基因用适当的载体将此基因带入大肠杆菌或真核细胞，使之表达并纯化表达产物研发成本高，生产成本低，下游工程复杂第27页，课件共29页，创作于2023年2月核酸疫苗将病毒基因导入DNA载体（通常是带有真核表达调控基因的质粒或病毒），将重组DNA导入动物或人体，重组DNA可以在细胞的转录和翻译系统表达出目的蛋白优点：同时刺激产生体液和细胞免疫，能诱导CTL活性，易生产，易保存理论上缺点：安全性尚待考察目前仅在实验研究中，尚未投放市场第28页，课件共29页，创作于2023年2月独特型病毒疫苗（idiotypevaccine）基于Jerne的免疫网络学说，内影像组抗体中含有与抗原一致的表位序列，又称抗独特型抗体疫苗。将病毒抗原接种动物，产生Ab1；Ab1接种另一动物，产生Ab2；Ab2接种人产生Ab