病原生物学第七次课逆转录

病原生物学第七次课逆转录第1页，课件共42页，创作于2023年2月案例分析

患者，女，40岁。因“畏寒、发热1周，排尿刺激、腰痛、血尿2天”就诊。1周前患者受凉后出现畏寒、地热、乏力、头痛，自行服用感冒药后症状有所缓解。2天前出现尿频、尿急。1天前开始出现畏寒、发热、乏力、头痛、食欲减退，并伴有腰痛、向下阴部下传的腹痛，尿频、尿急加重，且出现尿痛。体格检查：急性病容，体温39℃。皮肤无红疹或红斑，浅表淋巴结未扪及，眼睑及双下肢无明显水肿，心、肺无异常双肾去叩痛，膀胱区压痛。实验室检查：尿常规蛋白（++）、脓细胞（+++）、红细胞（+++）、白细胞（++）。要求：设计实验方案，检测出尿液中的优势细菌数，并进行鉴定，以明确诊断。同时，测定感染菌对常用抗生素的敏感程度，以指导临床用药。第2页，课件共42页，创作于2023年2月常用尿液标本细菌计数法1、直接计数法：取中段尿液一滴于载玻片上，盖上盖玻片，相差显微镜观察。G-菌数/视野≥100个，尿液中细菌数为1010——感染菌菌数/视野≥10个，尿液中细菌数为108——感染菌菌数/视野≥1个，尿液中细菌数为107——污染菌2、定量计数法：定量接种环或1:100稀释的尿液0.1ml，在血琼脂平板上连续划线接种，置37℃培养18-24h，计数平板上的菌落3、倾注培养法

：1:100稀释尿液1ml加入无菌平皿内，倒入50℃的普通琼脂培养基，立即混匀，凝固后置37℃培养18-24h，计数平板上的菌落，乘以100，即得每毫升尿液的细菌数。第3页，课件共42页，创作于2023年2月逆转录病毒逆转录病毒含有逆转录酶的RNA病毒RNA肿瘤病毒亚科（白血病、HTLV）慢病毒亚科（HIV）泡沫病毒亚科（FV）第4页，课件共42页，创作于2023年2月特点：有包膜，球形，80-120nm基因组由两个相同的正链RNA组成

病毒核心中含有逆转录酶

具有gag、pol和env三个结构基因

基因复制形成DNA中间体，与宿主染色体整合逆转录病毒第5页，课件共42页，创作于2023年2月人免疫缺陷病毒（HIV）艾滋病(AcquiredImmuneDeficiencySyndrome,AIDS),获得性免疫缺陷综合征

。是由人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus，HIV)引起的慢性致死性传染病。1981年首度证实世界第一例艾滋病。HIV感染后导致人体免疫机能缺陷，从而发生机会性感染等一系列临床综合征，病死率几乎达100%。第6页，课件共42页，创作于2023年2月HIV生物学特性HIV-1（全球，人类）HIV-2（西非，非人灵长类）1、形态与结构球形，100-120nm，病毒内部有致密的圆锥状核心。核心包膜RNA逆转录酶整合酶蛋白酶gp120：表面刺突gp41：跨膜蛋白第7页，课件共42页，创作于2023年2月基因组结构逆转录酶RNA依赖的DNA聚合酶RNA酶H(内切核酸酶)DNA聚合酶含有两条相同的正链RNA裂解第8页，课件共42页，创作于2023年2月复制与变异env基因变异率最高第9页，课件共42页，创作于2023年2月培养特性及抵抗力培养只感染CD4+的T细胞和巨噬细胞；可感染恒河猴或黑猩猩，但感染过程和症状与人不同。抵抗力较弱，在体液或血清中，56℃加热10min灭活，0.1%漂白粉、70%乙醇等均可灭活。20-22℃可存活7天，在冷冻血制品中，需68℃加热72h才能保证灭活第10页，课件共42页，创作于2023年2月艾滋病的传播途径性行为体液传播共用针具母婴传播血液传播输血血液制品怀孕分娩哺乳无保护性行为精液血液乳汁阴道分泌物静脉吸毒者医院未消毒日常接触不会传染艾滋病第11页，课件共42页，创作于2023年2月艾滋病的传播途径性行为、体液传播体液主要有：精液，血液，阴道分泌物，乳汁，脑脊液和有神经症状者的脑组织中。其他体液中，如眼泪、唾液和汗液，存在HIV的数量很少，一般不会导致艾滋病的传播。一般的接触不会传染艾滋病。

第12页，课件共42页，创作于2023年2月艾滋病的传播途径2.血液传播输血传播：血液中含有艾滋病病毒，输入者将会被感染；血液制品传播：有些病人（例如血友病）需要注射由血液中提起的某些成份制成的生物制品，而有可能感染上HIV；在1980年代及1990年代，因为验血的时候还没有包括对艾滋病的检验，所以有很多普通的病人因为接受输血，而被感染艾滋病病毒。第13页，课件共42页，创作于2023年2月艾滋病的传播途径3.共用针具传播静脉吸毒者共用针具；医院里重复使用针具；使用被血液污染而又未经严格消毒的注射器、针灸针、拔牙工具。4.母婴传播如果母亲是艾滋病感染者，那么她很有可能会在怀孕、分娩过程或是通过母乳喂养使她的孩子受到感染。第14页，课件共42页，创作于2023年2月易感人群70%高危人群经过研究分析，把易患艾滋病的这个人群统称为艾滋病易感高危人群，又称之为易感人群。艾滋病的易感人群主要是指男性同性恋者、静脉吸毒成瘾者、血友病患者，接受输血及其它血制品者、与以上高危人群有性关系者等。

男同性恋者静脉吸毒者接受输血或血液制品者异性性行为者血友病患者母婴传播者第15页，课件共42页，创作于2023年2月艾滋病的危害AIDS已夺取超过2500万人的性命，使它成为史上最具破坏力的流行病之一，截至2005年底世界上约有3860万人正受到艾滋病的侵扰，仅该年便造成约3百万人死亡，当中约57万是儿童。根据统计，每天有1800名新生儿一出生就感染上艾滋病毒，45%的感染儿童在2岁前死亡。第16页，课件共42页，创作于2023年2月艾滋病病程1、急性感染期：HIV进入机体大量增殖和释放，形成病毒血症。无症状或流感样症状，发热、咽炎、淋巴结肿大、丘疹、黏膜溃烂，持续2周，自行消退。2、潜伏期：无症状HIV感染期，血中病毒量明显下降，在淋巴结中继续低水平增殖，抗体阳性，潜伏2-10年或以上。3、相关综合症：病毒大量繁殖、机体免疫力被严重破坏，出现艾滋病相关症候群。持续发热、疲乏、体重下降、慢性腹泻及全身淋巴结肿大等全身症状。4、AIDS期：严重的细胞免疫缺陷；严重的机会性感染；恶性肿瘤、神经系统异常第17页，课件共42页，创作于2023年2月致病机制机体免疫摧毁直接杀伤直接杀伤诱导凋亡gp120CD4+第18页，课件共42页，创作于2023年2月免疫应答体液免疫细胞免疫刺激CD8+、CD4+T细胞、NK细胞产生细胞免疫应答CTL杀伤HIV感染细胞，但不能清除体内潜伏感染的细胞。HIV在感染过程中，机体可产生抗HIV抗体抗gp120中和抗体抗核蛋白（P24）抗体在急性期降低血清中的病毒量，但不能清除体内的病毒突变株可以逃逸体液免疫和细胞免疫的杀伤作用。第19页，课件共42页，创作于2023年2月ELISA（初筛）IFA免疫印迹（Westernblot）血清学检查：病毒分离检查：细胞培养PCR法微生物学检查淋巴细胞、T淋巴细胞株P24、gp41gp160/120测定抗原（P24）第20页，课件共42页，创作于2023年2月防治1、切断传染源2、疫苗研究3、抗病毒治疗

基因工程亚单位疫苗（gp160、gp120、gp41）合成寡肽疫苗（gp120中和表位与CD4结合区及T细胞）重组病毒载体活疫苗（gp160、gp120的痘病毒疫苗）核苷类逆转录酶抑制剂非核苷类逆转录酶抑制剂蛋白酶抑制剂干扰HIV的DNA合成抑制HIV蛋白酶，使病毒大分子多聚蛋白不被裂解而影响病毒的成熟与装配鸡尾酒疗法第21页，课件共42页，创作于2023年2月预防与治疗预防：艾滋病主要通过体液传播安全性行为不要共用针头疫苗仍在研制中……2010年，美国在艾滋病患身上发现两种强力抗体：VRC01和VRC02的抗体。这两种抗体能够中和90%以上的艾滋病毒，防止病毒感染人类细胞。2010年7月19日，南非实验表明，一种杀菌胶能够让女性感染艾滋病的几率下降一半。第22页，课件共42页，创作于2023年2月预防与治疗治疗：目前尚无有效的治疗方法可以治愈艾滋病，每年有大量的病患死于艾滋病，特别是在缺乏有效疗法和药物的第三世界的患者。治疗方法主要针对HIV病毒，目前仍未证实有任何方式有效。鸡尾酒疗法可以延缓了感染者的发病时间，也使感染者体内的病毒数可以降低至无法验出的状况，不过鸡尾酒疗法有强烈的副作用，尚不能称之为可以治愈的疾病。第23页，课件共42页，创作于2023年2月第24页，课件共42页，创作于2023年2月2009

HIV每24小时，全球就有15000例新的艾滋病病毒感染者，同时有8000人因艾滋病而死亡。在非洲，已经有7个国家的成人感染率超过了20%——5个成年人中有一个艾滋病病毒感染者！第25页，课件共42页，创作于2023年2月2014

HIV每24小时，全球就有6000例新的艾滋病病毒感染者。截止至3013年底，HIV存活3500万人，死亡2500万人。“GettingtoZero”第26页，课件共42页，创作于2023年2月AIDS1981年美国首次发现1985年6月，从一名阿根廷游客身上发现，最后这位病人在协和医院因并发症死亡。截止到1989年底，已经发现艾滋病感染者172名，大部分是吸毒人士。当年在云南吸毒人群中发现艾滋病标志着中国艾滋病开始流行。90年代初期，非法血站氾滥导致艾滋病广泛蔓延。至90年代末卖血已经基本得到控制，但艾滋病疫情仍呈快速上升趋势。我国艾滋病感染人数以每年30%的速度增长，已经进入了艾滋病感染的快速增长期。第27页，课件共42页，创作于2023年2月AIDSinChina至1999年底，全国所有省份都有艾滋病案例报告。艾滋病感染人群也已经从高危人群开始扩散到社会各个阶层，艾滋病感染者50万人。至2005年底中国艾滋病感染者65万人。至2007年底我国现存艾滋病病毒感染者和病人约70万。至2009年底我国现存艾滋病病毒感染者和病人约74万。第28页，课件共42页，创作于2023年2月世界艾滋病日WHO以1988年1月在英国伦敦召开有100多个国家卫生部长参加的高级会议，会议确定每年12月1日为世界艾滋病日(WorldAidsDay)，号召世界各国在这一天举办各种活动，宣传和普及预防艾滋病的知识。1988年：全球共讨，征服有期1996年：同一世界，同一希望2002年：相互关爱，共享生命2003年：耻辱与歧视2005~2006年：遏制艾滋、履行承诺2009~2010年：普遍可及和人权2011-2015年：零艾滋第29页，课件共42页，创作于2023年2月第二节人类嗜T细胞病毒（HTLV）从白血病患者外周血淋巴细胞中分离出来的人类逆转录病毒，分为HTLV1和HTLV2型。圆形，100-120nm，有包膜，表面刺突为gp120，能与细胞表面的CD4受体结合。基因组结构与HIV相似第30页，课件共42页，创作于2023年2月HTLVHTLV仅感染CD4+T淋巴细胞，并在其中增殖，使受感染的T细胞转化，发展成为T淋巴细胞白血病。HTLV可通过输血、共用注射器、性接触或母婴等方式传播。症状：成人T细胞白血病，热带下肢痉挛性瘫痪和B细胞淋巴瘤诊断：病毒分离培养、抗体检测、免疫印迹第31页，课件共42页，创作于2023年2月作业1、逆转录病毒的复制特征2、HIV的感染过程3、案例分析：某男性患者，31岁，因“反复畏寒、发热、乏力2个多月，伴皮疹2周”就诊。2个多月前，患者受凉后出现畏寒、乏力，并伴有反复发热，体温波动在38℃左右，自行服用中药无效。2周前，患者头面部、胸、背及大腿等处皮肤相继出现红色丘疹，无压痛及瘙痒。外院给予氨苄西林、环丙沙星等治疗无效。自患病以来，食欲下降，体重明显减轻。5年前在沿海打工，有淋病感染史。体格检查：重度贫血，巩膜黄染，全身皮肤可见散在分布的红斑、结节，以面部、胸部为甚。双颌可触及肿大淋巴结。要求：通过微生物学检查，明确患者感染的病原体。第32页，课件共42页，创作于2023年2月实验一、食品的细菌学检测一、目的和要求：1、掌握食品微生物检验中细菌总数检测的基本操作技术；2、熟悉不同食品中细菌的分离和鉴定方法；3、了解菌落总数测定的意义。二、实验材料：饮料：乳饮料、可乐

、牛奶、酸奶食物：凉菜类、卤菜、冰激凌、罐头水源：自来水、生活用水、河道水第33页，课件共42页，创作于2023年2月三、实验方法：无菌采样→预处理→涂布平板→37℃培养→菌落计数→报告结果1、液体（无残渣）4000rpm离心20min，弃上清，沉淀溶于1ml无菌生理盐水，取250ul直接涂板；2、液体（有残渣）2000rpm离心5min，取上清；4000rpm离心20min，弃上清，沉淀溶于1ml无菌生理盐水，取250ul直接涂板；3、酸奶/冰激凌，取100ul溶于900ul无菌水（10%），取250ul直接涂板。第34页，课件共42页，创作于2023年2月结果分析样品菌落总数大肠杆菌数大肠菌群数金黄色葡萄球菌数李斯特菌

灰白色

黄色或无色

蓝绿色

蓝绿色

紫色

1、平板计数琼脂（PAC）2、大肠杆菌／大肠菌群显色培养基3、金黄色葡萄球菌显色培养基灰白色大肠菌群显蓝绿色，其它菌显黄色或无色，革兰氏阳性菌被抑制。金黄色葡萄球菌显蓝绿色菌落，李斯特氏菌显紫色，绝大多数革兰氏阴性菌被抑制。大肠菌群是指37℃生长时能发酵乳糖,在24h内产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌,除包括大肠埃希氏杆菌属外,还包括肠杆菌科的肠杆菌属、枸椽酸菌属、克雷伯菌属第35页，课件共42页，创作于2023年2月生物安全等级第36页，课件共42页，创作于2023年2月生物安全等级BSL1,P1,安全一级（轻度传染病）肺炎球菌，沙门氏菌属进行试验研究用的物质都是已知的，所有特性都已清楚并且已证明不会导致疾病的多种微生物物质。研究通过日常的程序在公开的实验台面上进行。不需要有特殊需求的安全保护措施。操作人员只需经过基本的实验室实验程序培训并且通常由科研人员指导，在这样的环境下并不需要生物安全柜的存在。第37页，课件共42页，创作于2023年2月生物安全等级BSL2,P2,安全二级（中度传染病）淋巴疾病，流行性感冒是一些已知的中等程度危险性的并且与人类某些常见疾病相关的物质。操作者必须经过相关研究的操作培训并且由专业科研人员指导。对于易于污染的物质或者可能产生污染的情况进行预先的处理准备。一些可能涉及或者产生有害生物物质的操作过程都应该在生物安全