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文档简介

实验八溴甲酚绿法测定血清白蛋白

【目的要求】

1.溴甲酚绿法测定血清白蛋白含量的实验原理、关键技术和特点意义。

2.熟悉稳定性试验的基本操作及意义【实验原理】血清白蛋白在PH4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料溴甲酚绿（BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长630纳米处有光吸收峰，其颜色的深浅与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清白蛋白含量。实验试剂1.溴甲酚绿（BCG）贮存液取BCG419mg，用10ml0.1mol/LNaOH溶解，加NaN3100mg，定容至1000mL。贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水溶解。2.0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH4.2）分别配制0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按12.3：7.7的体积比例混合。每1000ml混合液加入NaN3100mg。3.30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液取Brij-3530g,加少量水，60℃水浴溶解，加水至100ml（此可用Tween-20或Tween-80代替)。4.BCG应用液BCG贮存液250ml，0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH4.2)750ml,30%Brij-358ml(也可以用Tween-208ml或Tween-8010ml代替）混合而成。5.标准蛋白溶液（10mg/ml)称取人白蛋白1.00g，用生理盐水实验操作1.白蛋白标准曲线绘制取4支试管，按下表稀释标准液：1234白蛋白标准液（ml)0.100.200.400.60生理盐水(ml)0.900.800.600.40稀释后白蛋白含量（mg/ml)1.02.04.06.0各管混匀后，另取5支试管，按下表操作：混合后以空白管校零，立即比色，比色波长为620nm，以光密度为纵坐标，相应管中的白蛋白浓度为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。01234生理盐水(ml)0.20————————上述1~4管标准稀释液（ml)——0.200.200.200.20BCG应用液（ml)5.05.05.05.05.02.血清白蛋白测定用生理盐水按1：10的比例稀释血清，取稀释后的血清0.2ml加入BCG应用液5.0ml混匀后立即同上比色，读取光密度，并从标注曲线上查出相应的白蛋白浓度。3.白蛋白/球蛋白比值（A/G比值）用双缩脲法测定血清标本中的总蛋白浓度，用总蛋白浓度减去白蛋白浓度即得球蛋白浓度，并可求的A/G比值：A/G比值=—————————————白蛋白含量总蛋白含量---白蛋白含量参考值：35~50g/L【方法评价】1．本法操作简便、快速、胆红素、溶血和中度脂血无干扰，既可手工操作，也能自动化分析，是目前国内测定血清白蛋白的最常用方法。2．本法线性范围10-60g/L，RCV＜4%。但该法与溴甲酚紫法比较，对血清白蛋白特异性稍差。3．血清白蛋白测定法主要有色氨酸含量法、染料结合法、电

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