兽医生物制品学讲义第十讲

兽医生物制品学讲义第十讲第1页，课件共51页，创作于2023年2月什么是免疫血清?动物在接受抗原刺激或自然感染康复后，其血清中通常含有针对特定抗原的高效价特异性抗体，该动物的血清即称为免疫血清。又称为高免血清、抗病血清。第十章免疫血清制备技术第2页，课件共51页，创作于2023年2月抗细菌血清主要包括抗病毒血清抗毒素血清第十章免疫血清制备技术第3页，课件共51页，创作于2023年2月是用于人工被动免疫的制剂1.动物感染病原后，使用免疫血清，就等于直接给动物输入抗体，可以迅速中和病原或毒素，发挥良好的治疗作用。第十章免疫血清制备技术第4页，课件共51页，创作于2023年2月2.免疫血清也可用于疾病的预防，提供短期的被动免疫。3.特异性免疫血清还可用于疫病诊断和微生物鉴定。第十章免疫血清制备技术第5页，课件共51页，创作于2023年2月一、免疫血清的制备过程通常是给适当动物以多次注射特定病原微生物或其代谢产物等抗原物质，刺激动物发生免疫应答，在血清中产生大量的特异性抗体。第十章免疫血清制备技术第6页，课件共51页，创作于2023年2月1、动物的选择既可用同种动物，也可用异种动物！以抗病毒血清居多用同种动物制造的血清同源抗病血清抗菌性和用异种动物制造的血清异源抗病血清抗毒素血清为主常选择大动物→主要是考虑出血量问题。第十章免疫血清制备技术第7页，课件共51页，创作于2023年2月（1）许多免疫血清是用马制备的！优点不受接种途径、抗原量限制；饲养管理也比较方便；采血便利；产血清量多。第十章免疫血清制备技术第8页，课件共51页，创作于2023年2月马匹的选择①年轻：3~8岁②健康：来自非疫区

1、就地进行常规检疫后运回隔离饲养、观察

2、然后根据不同生产目的进行系统检疫(马鼻疽、马传染性贫血、马流产等)，优选出的马匹经消毒后转入专用饲养舍饲养、生产。第十章免疫血清制备技术第9页，课件共51页，创作于2023年2月（2）也可用健壮阉牛制造1、饲养管理简便；2、多选择3～10岁的黄牛，并应隔离观察检疫(结核、牛肺疫、布病等)，证明完全健康后方可用于生产；3、但血清渗出率偏低。多用于抗气肿疽、抗猪丹毒、抗猪牛出败、抗牛瘟等血清的制备。第十章免疫血清制备技术第10页，课件共51页，创作于2023年2月（3）猪1、应选择体壮、健康者；2、放血提取血清，不作循环采取血清方法；3、主要用于抗猪瘟血清生产。第十章免疫血清制备技术第11页，课件共51页，创作于2023年2月（4）羊、兔、鸡等1、常用于制备诊断用高免血清；2、较少用于抗病血清生产。第十章免疫血清制备技术第12页，课件共51页，创作于2023年2月2、抗原的准备抗原是制备免疫血清的基础优良的菌/毒种则是制备优良抗原的关键第十章免疫血清制备技术第13页，课件共51页，创作于2023年2月优良菌/毒种的生物学特征应十分典型（形态、培养、生化和血清学等）强毒弱毒常用的菌/毒种有：灭活毒可单独使用，可共同使用，也可交互使用，其目的是尽可能提高抗体效价。第十章免疫血清制备技术第14页，课件共51页，创作于2023年2月按照制备方法的不同免疫用抗原分为第十章免疫血清制备技术第15页，课件共51页，创作于2023年2月（1）组织毒抗原用健康、易感的本种动物人工感染增殖病原;根据微生物增殖规律，采集含毒高的组织制成活的或灭活的抗原液。如血液、肝、脾、肺、肾、淋巴结和脑组织等第十章免疫血清制备技术第16页，课件共51页，创作于2023年2月细菌和病毒等微生物都可利用动物增殖！第十章免疫血清制备技术第17页，课件共51页，创作于2023年2月例如：抗猪瘟血清抗原制备①给健康、敏感、40~80kg猪注射猪瘟强毒1mL②于6~8d发病典型时(高温、症状明显)颈动脉放血③采血液、脾和淋巴结等，分别制成血液毒抗原和组织毒悬液抗原。第十章免疫血清制备技术第18页，课件共51页，创作于2023年2月（2）鸡胚毒抗原①可在鸡胚增殖的微生物均适用②将种毒接种鸡胚，收获后经检验合格即可作为免疫原。第十章免疫血清制备技术第19页，课件共51页，创作于2023年2月（3）细胞毒抗原①多种病毒均可通过细胞增殖；②将种毒接种细胞后培养增殖，然后根据不同病毒的增殖盛期收获，经检验合格后即可作为免疫原。③必要时可浓缩、提纯，也可制成佐剂抗原。第十章免疫血清制备技术第20页，课件共51页，创作于2023年2月（4）培养物抗原细菌抗原几乎都用培养物制造。①将菌种接种于规定的培养基，37℃培养，收获后经检验合格制成抗原。②也可于培养物内加入佐剂制成佐剂抗原。第十章免疫血清制备技术第21页，课件共51页，创作于2023年2月3、免疫程序由于病原微生物的性质、免疫机制的不同，各有其最佳的免疫程序。第十章免疫血清制备技术第22页，课件共51页，创作于2023年2月1、一般的免疫程序（1）如以强毒抗原为抗原基础免疫时以灭活疫苗为抗原，然后以递增量强毒抗原进行高度免疫。这种免疫程序通常可获得高效价的抗血清如：抗气肿疽血清、抗猪牛出败血清等第十章免疫血清制备技术第23页，课件共51页，创作于2023年2月（2）如以灭活佐剂抗原免疫只需以递增量抗原进行免疫，即可获得高效价的抗血清。如：破伤风抗毒素血清等第十章免疫血清制备技术第24页，课件共51页，创作于2023年2月2、免疫间隔和次数不同的免疫原，差异较大！如:抗猪丹毒血清全程免疫要注射抗原20次、100d左右抗猪瘟血清全程须注射抗原6次以上、50d左右第十章免疫血清制备技术第25页，课件共51页，创作于2023年2月3、抗体效价测定1、常在免疫程序完成后采血进行抗体效价测定2、合格后方可采血提取血清然后按后期程序注射、采血，持续生产抗血清第十章免疫血清制备技术第26页，课件共51页，创作于2023年2月4、血清提取包括：采血和血清分离第十章免疫血清制备技术第27页，课件共51页，创作于2023年2月（1）采血①采血时间1、通常在最后一次免疫8~10d后测定抗体效价,合格后开始第1次采血。2、第1次采血后3~5d可进行第2次采血3、第2次采血后，经3~5d天可再次注射抗原，如此循环进行。第十章免疫血清制备技术第28页，课件共51页，创作于2023年2月②采血量按动物每kg体重采取10mL左右注意：采血常在上午空腹时进行，前一晚上不喂精料，而仅给草料和水，避免血中出现乳糜第十章免疫血清制备技术第29页，课件共51页，创作于2023年2月（2）血清分离①自然凝结加压法无菌操作采血后室温静置凝固；然后于血凝块上加上灭菌的不锈钢铭，将血块压下以析出血清。第十章免疫血清制备技术第30页，课件共51页，创作于2023年2月②枸橼酸盐血浆分离血清法以10％枸橼酸钠液为抗凝剂（3.5%）采血；静置分层；按1000mL血浆加入30%CaCl21.3mL，混匀后静置48h，去除纤维制成血清。第十章免疫血清制备技术第31页，课件共51页，创作于2023年2月5、质量检验①物理性状检验按成品检验的有关规定进行②无菌检验按各种抗血清规定方法、标准进行③效力检验④安全检验常用：18-22g健康小鼠2只,各皮下注射血清0.5mL250-450g健康豚鼠2只,各皮下注射血清10mL观察10d均应健活第十章免疫血清制备技术第32页，课件共51页，创作于2023年2月二、类毒素及抗毒素的制备某些病原微生物能产生强有力的特殊毒性物质，从而大大增强病原的毒害作用，这种毒性物质就称为毒素。第十章免疫血清制备技术第33页，课件共51页，创作于2023年2月是微生物在生命活动过程外毒素中产生并释放或分泌到周围环境中的毒素。毒素只有在微生物死亡后细胞内毒素破裂时，才能释放出来的毒素。第十章免疫血清制备技术第34页，课件共51页，创作于2023年2月类毒素外毒素经适量浓度的甲醛处理后，可去除其毒性，保持其抗原性；这种丧失了毒性而仍具有抗原性的外毒素，称为类毒素。也称为“

变性毒素

”

第十章免疫血清制备技术第35页，课件共51页，创作于2023年2月抗毒素以类毒素作为抗原免疫动物，刺激机体相应的B细胞活化增殖为浆细胞后，产生的特异性抗体，称为抗毒素。抗毒素可特异性识别侵入机体的外毒素并中和其毒性，以保护机体免受毒害第十章免疫血清制备技术第36页，课件共51页，创作于2023年2月1、类毒素的生产和检定产毒素菌种产毒培养基培养毒素4~7d毒素脱毒毒素的检定0.3~0.4％甲醛，37℃，20~30d如破伤风MLD应>2×106除去类毒素精制类毒素非特异性物质适当佐剂吸附精制类毒素类毒素的检定：安全试验等;类毒素及吸附类毒素的检定:吸附度试验,安全试验,效力试验吸附类毒素的检定第十章免疫血清制备技术第37页，课件共51页，创作于2023年2月2、抗毒素血清的制备1、马、骡、驴是比较适用的动物毒素或类毒素免疫动物2、基础免疫和加强免疫抗毒素血清提纯精制抗毒素抗毒素的质量检定[安全性试验、热原质试验、效价测定]第十章免疫血清制备技术第38页，课件共51页，创作于2023年2月三、卵黄抗体的制备卵黄抗体，不能理解为抗卵黄的抗体，而是在卵黄中含有针对某种病原微生物的特异性抗体。第十章免疫血清制备技术第39页，课件共51页，创作于2023年2月目前，家禽病毒病是没有特效药物使用血清是一种很好的方法，但血清的价格比较高！第十章免疫血清制备技术第40页，课件共51页，创作于2023年2月人们又寻求了另外一条途径制备

高免卵黄抗体，并收到了良好的防治效果。第十章免疫血清制备技术第41页，课件共51页，创作于2023年2月卵黄抗体液的制备过程以抗IBD的卵黄抗体液为例第十章免疫血清制备技术第42页，课件共51页，创作于2023年2月1、动物的选择同制备抗血清的要求一样必须选择健康无病的产前或开产鸡群第十章免疫血清制备技术第43页，课件共51页，创作于2023年2月2、疫苗的选择很重要→获得高效价抗体的关键通常选择免疫原性优良的油乳剂疫苗第十章免疫血清制备技术第44页，课件共51页，创作于2023年2月3、免疫程序①第1次免疫：肌肉注射免疫，每只2mL，分点注射②第2次免疫：第1次免疫后10~14d，重复免疫1次③第3次免疫：第2次免疫后10~14d，再重复免疫1次第十章免疫血清制备技术第45页，课件共51页，创作于2023年2月4、抗体监测与高免蛋的收集1、第3次免疫后，以琼脂扩散法测定卵黄中的抗体水平；2、在抗体效价达到1:128时，开始收集高免蛋,一般高免蛋合格时间大约可持续1个月。3、抗体效价降低到1:64时停止收蛋，并根据情况再进行1次加强免疫。第十章