致病菌的检验分支杆菌属及相似属

关于致病菌的检验分支杆菌属及相似属第1页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三第2页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

第1节分枝杆菌属(Mycobacterium)分支杆菌是一类细长或稍弯的杆菌，因有分枝生长趋势而得名。此菌属的最显著特性为其胞壁中含有大量类脂，可达菌体干重的40%，形成粗糙菌落，难用一般染料染色。第3页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

第1节分枝杆菌属(Mycobacterium)——若设法使之着色后，又不易以含3%HCI的酒精脱色。这种能抵抗盐酸酒精脱色的细菌称为抗酸杆菌。——本菌属种类颇多，其中可引起人类和动物疾病的有:（1）人型、牛型以及禽结核杆菌;（2）麻风杆菌。这些细菌多为慢性感染，因长期迁延而致组织病变。第4页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

第1节分枝杆菌属(Mycobacterium)分支杆菌属主要有3种：结核分支杆菌(M.tuberculosis)、牛分支杆菌(M.bovis)、禽分支杆菌(M.avium)，是引起人类以及畜禽结核病的病原体。这里只介绍结核分支杆菌。第5页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

一结核分支杆菌（M.tuberculosis）1、形态与染色特性——细长略弯,端钝园,0.4×1-4µm，单个或分枝状排列，无荚膜、无鞭毛、无芽胞。在陈旧的病灶和培养物中形态不典型，呈颗粒，串球，短棒，长丝形等。第6页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

一结核分支杆菌（M.tuberculosis）

——结核杆菌常用萎-钠氏(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法染色，菌染成红色，其他非抗酸细菌及细胞等呈蓝色。第7页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

2、培养特性——专性需氧。营养要求高，在含蛋黄、马铃薯、甘油和天门冬素等的固体培养基上才能生长。最适pH6.5-6.8，最适温度37℃，生长缓慢，接种后培养3-4周才出现肉眼可见菌落。第8页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

2、培养特性——菌落干燥、坚硬、表面颗粒状、乳酪色或黄色，形似菜花。液体培养呈粗糙皱纹状菌膜，加入水溶性脂肪酸Tween-80，可降低结核杆菌表面的疏水性，使其呈均匀分散生长，有利于药物敏感试验。第9页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

3、抵抗力结核杆菌对某些理化因子抵抗力较强。在干痰中存活6-8个月；粘附于尘埃上，保持传染性8-10d；在3%HCl或NaOH溶液中耐受30min，常以酸或碱处理污染的样品，以杀死杂菌，提高检出率；对湿热、紫外线、酒精抵抗力弱:液体加热62-63℃15min，日光直射2-3h，75%酒精数分钟即死亡。第10页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

4、变异性对链霉素、利福平、异烟肼等抗结核药物易产生耐药性。耐药菌株常伴随活力和毒力减弱，如异烟肼耐药菌株对豚鼠的毒力消失，但对人仍有一定致病性。卡介菌(BacilliCalmette-Giierin,BCG)：卡-介（Calmette-Gerine）二氏将牛型结核杆菌培养于胆汁、甘油、马铃薯培养基，经230次传代，历时13年，其毒力发生变异，成为对人无致病性，而仍保持良好免疫性的菌株，接种人体后可获得对该菌的免疫力。

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5、致病因子结核分支杆菌无内毒素、外毒素和侵袭性酶，其致病作用主要靠菌体成份，特别是胞壁中所含的大量脂质。脂质含量与结核杆菌的毒力相关，含量愈高毒力愈强。

1、脂质（Lipide）占菌体干重20-40%，胞壁干重的60%，主要是磷脂、脂肪酸和蜡质，大多与蛋白质或多糖结合成复合物。①磷脂：刺激单核细胞增生，抑制蛋白酶的分解作用，使病灶组织溶解不完全，形成干酪样坏死。第12页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三②脂肪酸：在脂质中比重较大，其中6,6-二分枝酰-a,a‘-海澡糖(6,6-Dimycocyl-a,a’-D-trehalose)能破坏细胞线粒体膜，毒害微粒体酶类，抑制中性粒细胞游走和吞噬，引起慢性肉芽肿。具有该物质的结核杆菌毒株，在液体培养基中能紧密粘成索状，称为索状因子(cordfactor)。③蜡质D：为胞壁主要成分，是一种肽糖脂(Piptidoglycolipids)与分枝菌酸(My-colicacid)的复合物，能引起迟发型变态反应，并具有佐剂作用。第13页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三④硫酸脑苷脂(salfatides)和硫酸多酰基化海澡糖(Multiasiylatedtrehalosesalfate)：存在于结核杆菌毒株胞壁，能抑制吞噬细胞中的吞噬小体与溶酶体融合，使结核杆菌在细胞内存活。这类糖脂能结合中性红染料。产生中性红反应，借此可鉴定结核杆菌的毒力。

2、蛋白质（Protein）结核杆菌菌体内含数种蛋白质，重要的是结核菌素(tuberculin)，其与蜡质D结合后，能引起较强的迟发型变态反应。蛋白质具免疫原性，但无保护作用。第14页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三3、多糖（Polysuccharides）多糖常与脂质结合存在于胞壁中，主要有半乳糖，甘露醇、阿拉拍糖等。多糖可使中性粒细胞增多，引起病灶局部细胞浸润。4、核酸(Nucleicacid)核糖体核糖核酸(Ribonucleieacidribosonic,rRNA)是本菌的免疫原，刺激机体产生特异性细胞免疫。

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6、致病性结核杆菌的致病作用可能是细菌在组织细胞内顽强增殖引起的炎症反应，以及诱导机体产生的迟发型变态反应有关。结核杆菌可通过呼吸道、消化道和破损的皮肤粘膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应器官的结核病，其中以肺结核最常见。动物则常见内脏（如肠道等）结核。

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6、致病性第17页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

7、免疫性

结核分支杆菌的免疫原rRNA和变应原结核菌素可诱发机体产生由T淋巴细胞介导的细胞免疫和迟发型变态反应。人类及动物对结核杆菌的感染率很高，但发病率却较低，这表明机体感染结核杆菌可获得一定免疫力，其持久性依赖于结核杆菌在机体内的活性，一旦体内结核杆菌消失，抗结核免疫力也随之消失，这种免疫称为有菌免疫或传染性免疫(Infectionimmunify)。第18页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

8、微生物诊断

肺炎结核最好取早晨第一次咯痰；肾或膀胱结核以无菌导尿；肠结核采粪便，结核性脑膜炎取脑脊液；胸膜炎、腹膜炎或骨髓结核等则穿刺取脓汁。

1、涂片染色咯痰可直接涂片。用抗酸染色法，若镜检找到抗酸性杆菌，可能是结核杆菌，单凭形态染色不能确定是结核杆菌，需进一步分离培养鉴定。标本中结核杆菌量少时应浓缩集菌后再涂片染色镜检，以提高阳性检出率。第19页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三无菌直接采取的脑脊液和导尿可直接离心集菌。咯痰和粪便标本需用4%NaOH或3%HCl或6%H2SO4处理，然后用离心沉淀集菌作抗酸染色检查、分离培养或动物试验。第20页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

2、分离培养结核分支杆菌生长缓慢，培养期长，当接种于固体培养基上（如青霉素血液琼脂），以蜡封口防止干燥。37℃培养4-6周后检查，该菌生长缓慢，菌落干燥、颗粒状、乳酪色，菜花状。

3、动物试验常用豚鼠或地鼠鉴别疑似结核杆菌的分离培养物和其毒力。取浓缩集菌标本1ml注射于豚鼠腹股沟皮下，经3-4周饲养观察，如出现局部淋巴结肿大，消瘦或结核菌素试验阳性，可及时剖检，注意观察淋巴结、肝、脾、肺等脏器有无结核病变。

4、变态反应我国常用皮内法和点眼法，皮内法4mm以上为阳性；2-4mm为可疑；2mm以下为阴性。可检出95~98%的结核病牛。第21页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

9、预防

1、预防接种卡介苗接种是预防结核病的有效措施之一，广泛接种卡介苗能大大地降低结核病的发病率。

2、治疗人类结核病的治疗在于控制疾病，促使病灶愈合，消除症状和防止复发。常用的药物有链霉素、对氨水杨酸钠、利福平、乙胺丁醇等。各种抗结核药物如合并应用，有协同作用，且能降低耐药性的产生，减少毒性。因耐药菌株出现较多，因此由病人体内人分离的结核菌株在治疗过程中应作药敏试验。

3、定期检测动物发病或检测阳性后一般不治疗，直接淘汰作无害化处理。第22页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三第23页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

第2节放线菌属（Actinomyces）

是处于细菌和真菌之间的一群单细胞微生物，具有分支的细丝状菌丝；广泛存在于自然界，特别是土壤；在自然界物质转化中起作用，许多抗生素都是由放线菌产生的（如链霉素、土霉素等）;已知的病原菌有牛放线菌和依氏放线菌。

第24页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三放线菌属1.形态与染色特性

G-，长短不一，多数为分支状细菌丝组成的菌丝体；菌丝横径约1~2μm，无隔膜，不具核膜；无运动性，无芽胞，非抗酸性。第25页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三2.

生理特性厌氧或微需氧(厌氧培养时需CO2)；最适生长温度为30~32℃，致病性放线菌在37~40℃也生长良好；中性偏碱pH环境适于生长；发酵葡萄糖、接触酶阴性、氧化酶阴性。第26页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三3.繁殖断裂繁殖——从菌丝断片形成新的菌丝体；孢子形成——主要繁殖方式第27页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三4.致病性及其他特性能致病的很少；已知的病原菌主要有牛放线菌和依氏放线菌，引起牛、猪的放线菌病（以颌骨多见）。对青霉素、链霉素、四环素、头孢霉素和林肯霉素敏感，可用于治疗。第28页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三

第3节棒状杆菌属（Corynebacterium）

白喉杆菌(C.diphtheria):引起人类白喉的病原菌。1、形态染色：G+细长杆菌，美兰染色两端有异染颗粒(极体)。第29页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三白喉杆菌2、培养特性：需血清或血液，生长快，亚碲酸钾琼脂上长成黑色菌落。3、抵抗力：对干燥、寒冷和日光的抵抗力较其他无芽胞菌强；对热和消毒剂抵抗力较弱。4、致病与免疫（1）致病性①致病物质：侵袭力（白喉索状因子）、外毒素毒性强，由A和B两个片段组成，A片段有毒，B片段无毒，起辅助作用。第30页，讲稿共33页，2023年5月2日，星期三4、致病与免疫