.-复习-微生物的实验室培养+

专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养㈠.微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、衣原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒◆微生物的共同特点：一.微生物基础知识1.细菌的形态拟核，大型环状DNA质粒(小型环状DNA，含抗生素，抗药性，固氮基因)其成分为肽聚糖2.细菌的结构特殊结构（有时包括芽孢）芽孢

有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。（抗逆性极强）注：不是繁殖体例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）3.细菌的繁殖4.细菌的菌落⑴.定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。⑵.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶.功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。几种菌落及其形态几种菌落及其形态5.病毒舱的结歌构:由核萌酸和妖蛋白桐质构雨成。病毒废的结秋构吸附注入合成释放组装6.病毒副的繁误殖病毒俗的增压殖一潮般可烈分五花个阶久段，每即：吸附→注入咱核酸→合成旷核酸扩和蛋鹅白质→组装→释放6.病毒浪的营祸养方倦式：寄淡生微生武物需芽要的取五大压类营佳养要鹅素物登质是做：㈡.微生编物需异要的障营养居物质搭及功即能1.水2.碳源3.氮源4.无机再盐5.生长淡因子1.碳源舰：为微眨生物侍提供抵碳元姜素。无机碳化合物——CO2、NaHCO3等有机碳化合物糖类（最常用的碳源，尤其是葡萄糖）烃类、醇类、脂肪酸蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）2.氮源:N2NH3等有机罢物中叹的氮忍（还有且尿素役）无机轮氮牛肉摊膏、纸蛋白浮胨为微耽生物业提供以氮元锻素。圆褐固氮菌、硝化细菌和大肠杆菌氨盐沉、硝梅酸盐挡等是后常用挂的氮汗源氮源瞒主要丛用于通合成院蛋白塔质、件核酸蛋以及江含氮捷的代追谢产公物自养难型微象生物暴与异林养型恩微生堪物的租培养谊基的不主要舍差别悬是(光)A．碳宫源B．氮凤源C．无车机盐D．特穷殊营钻养物间质A3.生长班因子⑶.常见剑的生驼长因弦子：⑴.概念复：⑵.作用漠：微生钢物生叶长不堆可缺悼少的室微量陕有机围物。酶和敌核酸别的组柴成成乞分。维生团素、好氨基圈酸、亲嘌呤童、嘧曲啶等惹。一些折天然粪物质圾如酵山母膏凳、蛋染白胨陈、动阻植物悬组织胳提取渴液等永可为南微生鼓物提吧供生棋长因礼子（4）来亭源：注意岭：最常汗用的时碳源鸦是糖疮类，床尤其首是葡摆萄糖最常却用的响氮源藏是铵珠盐、野硝酸保盐对异志养生梯物而闯言，翁含C、H、O、N的化惊合物沟既是器碳源牺，也面是氮慕源，族如蛋护白质之所叶以补旺充生盾长因虹子，容是由角于缺薯少合纹成这活些物蓬质的房诚酶或柳合成薯能力竭有限思考淋：C（三液）培划养基培养敲基（跪培养快液）狂是由人睬工方糖法配记制而堆成的缸，专贼供微节生物续生长讽繁殖北使用锐的混窝合营撞养液。1.培养参基的吴类型京及用犯途种类是否含凝固剂用途固体培养基液体培养基按物仁理性下质分是否分离袜、计尚数等工业小生产固体症培养兔基：越菌落半固滚体培盾养基非：无动最力匀有法动力(弥散)观察鸽微生兰物的漠运动益、鉴锄定菌弦种等液体适培养摧基：表面万生长均匀亭混浊拨生长沉淀文生长按化份学成免分分种类化学成分是否明确用途天然培养基合成培养基否是主要帆用于工业航生产分类梁、鉴答定按培倒养基歉的功厉能（疮用途顷）分种类制备方法原理用途举例选择培养基鉴别培养基加入足某种化学优物质加入崖某种试剂乏或化学药光品依据露某些虚微生物瞎对某美些物质摊的抗尤性依据蛙微生坛物的代谢英产物别与特定试远剂或侵化学药品奏反应域，产生明政显的丝式特征变化从众块多微朝生物中分离悄所需的财微生贱物鉴别不同访种类的死微生董物加入厌青霉恒素分离先得到运酵母菌延和霉具菌伊红匠和美闲蓝培养妄基可螺鉴别大疑肠杆羡菌选择年培养液基加入歉青霉餐素的呈培养易基加入远高浓趁度食远盐的叠培养膛基不加胜氮源析的无圈氮培问养基不加欢含碳卖有机薯物的肤无碳阳培养道基分离删酵母瞎菌、翅霉菌区等真膜菌分离纯金黄锣色葡尽萄球达菌分离采固氮典菌分离约自养秆型微督生物（三驱）培月养基（1坛）按禁物理部状态裁分：（2仅）按饰功能盯分：（3烛）按折成分她分：总结丽：1.培养厚基的盘类型固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基天然培养基合成培养基2.不同惩的微齐生物替往往雾需要惊采用册不同朋的培志养基配方不管资哪种缸培养挎基，室一般补都含遮有水、无机眯盐、碳源和氮源等营养碌物质绵，另洞外还锅需要芳满足症微生盏物生亡长对pH、特殊袄营养放物质以及氧气的要梁求．3.培养雄基的讯成分血清孤中含卡有：①多种页蛋白饶质（恳白蛋晴白、末球蛋菜白、恰铁蛋警白等闸）②多种眯金属老离子涉；③激素拢；④促贴任附物顾质，葡如纤添粘蛋痰白、厦冷析凳球蛋姓白、敌胶原疑等。⑤各种席生长印因子⑥转移疯蛋白⑦不明挎成分人工资合成旅培养妇基只梁能维隶持细岩胞生苗存，谅要想熟使细泻胞生散长和乓繁殖犯，还历需补务充一掀定量呀的天询然培遥养基悟（如血基清）。（四选）无棕菌技肌术1.无菌意技术吓的概馒念无菌摧操作锁泛指茶在培谷养微齿生物什的操董作中竖，所听有防止从杂菌凉污染跨的方拖法。成功鲜地培景养微竭生物扁的关炕键。2.消毒谨与灭絮菌的榆概念植及两呀者的冠区别3.常用亡的消是毒与寒灭菌纪的方爽法比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的程度芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能①煮沸筐消毒座法：10判0℃煮沸5-拢6m敲in。②巴氏架消毒邪法：70螺-7膏5℃下煮30纤mi谅n或80掉℃下煮15裁mi害n。③化学惕药剂扎消毒悼法：摇用75坏%酒精钢、新诞洁尔贝灭等老进行烧皮肤移消毒油；氯老气消泛毒水派源。④紫外乌线消茎毒。消毒坛的方凑法：3.常用意的消赴毒与萝灭菌右的方团法（1）日石常生倦活经撞常用堤到的夕是煮沸消毒述法；（2）对娱一些矿不耐责高温赶的液逃体，乌则使味用巴氏消毒疮法（巨例如钢牛奶显）莫；（3）对项接种涉室、献接种暖箱或皱超净待工作颠台首钞先喷纱洒石炭洽酸或姑煤酚祖皂等溶液以增扁强消绕毒效冠果，貌然后维使用紫外钞线进行物理消毒笨。（4）实渡验操关作者井的双坛手使胃用酒精进行洽消毒指；（5）饮抄水水窃源用氯气进行陕消毒料。消毒际的方桑法1、灼烧疤灭菌灭菌说的方躬法：接种花环、杜接种浮针、喇试管秘口等的歇灭菌2、干热廊灭菌：16碗0-悬17辆0尖℃下加疏热1-谷2h。3、高压赌蒸气粪灭菌：10员0k篇Pa、12半1锻℃下维五持15遵-3执0m湖in疲.如玻璃沙器皿萍、金结属用犁具等的还灭菌如培养搜基、剩无菌召水等的银灭菌高压应蒸气零灭菌掩的原既理是震（偶）A．高奔压使浴细菌DN里A变性B．高误压使赢细菌滔蛋白驳质凝质固变敲性C．高袖温烫勇死细蔬菌D．高缝温使滥细菌DN天A变性B灭菌膊的方斑法：1、臭灼烧狮灭菌2、钳干热鬼灭菌3、校高压草蒸气动灭菌4、紫录外线源灭菌如表介面灭家菌和絮空气种灭菌庆等，冤所祖用愁器械米是紫外悟灯。关于晕灭菌祝和消晶毒的坟不正弦确的喉理解堆是A．消英毒和接灭菌句实质匹上是罩相同跃的B．灭帽菌是熄指杀坝死环谷境中托的一挺切微绪生物踩的细派胞、扇芽孢矩和孢沿子C．接速种环剖用烧些灼的丽方法馒灭菌D．常羊用灭孔菌方两法有笨加热威法、掀过滤固法、偷红外亏线法怖、化借学药竖品法A1.无菌萌技术但除了炉用来劝防止验实验掏室的储培养急物被吹其他秆外来哗微生棒物污米染外殖，还奶有什恩么目贪的？2.请你平判断挺以下塔材料扑或用抱具是报否需挠要消搞毒或鞠灭菌绞。如摩果需所要，慨请选笛择合仗适的轻方法效。（1）揪培养鉴细菌蔬用的院培养慢基与勺培养杠皿（2）置玻棒竭、试弯管、叶烧瓶线和吸卡管（3）免实验冶操作处者的谣双手答：剩无菌昏技术隙还能晴有效冤避免公操作年者自翠身被予微生锤物感吵染。答：裕（1）、心（2）需绪要灭买菌；脆（3）需救要消肝毒。旁栏途思考二、锣微生芹物实番验室沸培养破的基泉本操李作程啦序1、器这具的匀灭菌2、培枝养基欧的配问制3、培这养基街的灭饺菌4、倒团平板5、微普生物楚接种6、恒汽温箱边中培秘养7、菌吸种的着保存涂布棉器接种宵环接种神针a.制备手牛肉恋膏蛋然白胨稳培养牵基（用于新培养数细菌）配方催：1．计畅算、称量2．溶烘化3．调pH：pH段7．64．过画滤：考这一素步可坐以省谜去。5．分支装：掩分装顶过程血中注浙意不处要使怎培养奶基沾解在管拆口或胀瓶口惩上，搬以免转沾污吸棉塞拍而引妥起污旷染。触分装千三角钥烧瓶狱的量丛以不冻超过凤三角浸烧瓶士容积郊的一钓半为存宜。6．加隔塞7．包骨扎操作蒸步骤8．灭度菌:将5券0ml培养姐基用柜玻棒叔转移家至三惑角锥皱瓶中状，塞赏上棉吓花塞货，包土上牛萝皮纸再，再按放入傅高压殿蒸气室灭菌弹锅，别在压躺力为卷10睛0kP绣a、温度与为1脖21怀℃，济灭菌著15踏～3纹0mi阔n。将培庭养基黑用旧奇报纸向包裹毛，放便入干退热灭哀菌箱拾内，馒在1带60答～1般70束℃低下灭竹菌2h。9．倒生平板:待培疾养基叙冷却台到5斥0湿℃左揉右时袖，在窗酒精质灯附斤近倒志平板理。（缓倒平勾板操旺作见百课本纹）2d后观崖察平炊板，识无杂醋菌污挺染才射可用皱来接瞎种.10．无设菌检帮查：将灭凡菌的湖培养剥基放情入37坚℃的温京室中者培养24丛—4觉8小时努，以稠检查幸灭菌慌是否悉彻底汉。倒平秤板操垃作1.无菌燥技术甩除了锣用来峡防止棵实验咽室的不培养容物被劈燕其他希外来田微生枯物污草染外葡，还盼有什仇么目菠的？2.请你亲判断肾以下愚材料穴或用挣具是路否需卫要消肚毒或榨灭菌区。如项果需氧要，钩请选熄择合舱适的懂方法晒。⑴培香养细勒菌用貌的培状养基防与培墓养皿⑵玻盛棒、蜘试管兄、烧武瓶和侍吸管⑶实碎验操循作者牛的双哗手答：属无菌篇技术装还能磁有效晃避免矿操作茶者自牺身被习微生连物感摄染。答：曾（1）、因（2）需警要灭内菌；璃（3）需侦要消鲁毒。答：烦可以蚊用手忌触摸出盛有雁培养针基的斤锥形贼瓶，虹感觉著锥形萍瓶的常温度寨下降责到刚歉刚不获烫手适时，巧就可梁以进名行倒迎平板处了。2.为什幻玉么需币要使塑锥形硬瓶的夕瓶口冤通过深火焰慰？答：幕通过免灼烧供灭菌油，防弟止瓶刺口的戚微生铅物污浊染培狗养基选。问题锹讨论1.培养袄基灭器菌后归，需脊要冷很却到50占℃左右蛮时，亡才能安用来男倒平四板。粮你用赏什么语办法编来估嚼计培变养基雕的温略度？3.平板兰冷凝括后，需为什柜么要题将平尾板倒往置？4.在倒严平板忽的过崖程中颂，如伏果不苍小心受将培假养基悬溅在唱皿盖伶与皿欧底之划间的仅部位木，这乡丰个平烂板还泳能用责来培截养微良生物趣吗？处为什星么？答：平板克冷凝辫后，粮皿盖屠上会最凝结逢水珠诊，凝掌固后传的培化养基俘表面慕的湿辨度也是比较荒高，愧将平婶板倒废置，卧既可先以使馋培养艳基表仍面的辅水分贩更好崭地挥舞发，牵又可旗以防止炸皿盖美上的镜水珠惯落入虹培养跟基，造填成污傅染。答：往空气令中的崖微生显物可足能在民皿盖座与皿尝底之命间的杜培养辞基上默滋生陷，因唐此最食好不哑要用训这个盟平板恨培养训微生财物。b.纯化纪大肠弯杆菌接种以方法都有：平板总划线扑法和稀释睡涂布谅平板忍法微生溜物的节接种杠技术德：接种是方法枣有：平板样划线嫂法和阴稀释马涂布刺平板规法平板殿划线鄙法:通过暖接种树环在寨琼脂熊固体脊培养捞基表毒面连平续画叶线的配操作,将聚睬集的芽菌钟舅逐步倾稀释遵分散句到培朴养基凯的表姑面.在数席次画滨线后,可以励分离膊到由沙一个敌细胞灵繁殖冬而来仔的肉撞眼可捡见的洋子细朽胞群赏体,这就萝是菌阶落.平板薯划线迁的操预作一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。1.接种本环只蘸熔一次运菌液,但要狂在培旗养基茅不同痛位置连续初划线据多次.2.划线首尾从不能疑相接3.划线彼后,培养裤皿倒置滨培养划线住分离浑法注悔意事伟项:其他字画线搜分离芳图：答：基操作崖的第努一步号灼烧波接种侵环是股为了慌避免丽接种境环上盐可能侦存在往的微旋生物熟污染漠培养娇物；每次极划线喂前灼豪烧接覆种环蚕是为滑了杀庭死上卸次划托线结母束后族，接樱种环债上残啦留的查菌种铅，使绪下一差次划涛线时漠，接闭种环以上的束菌种治直接塘来源立于上壮次划号线的兆末端府，从柱而通方过划坊线次绿数的诉增加袄，使醉每次竭划线健时菌傍种的案数目粒逐渐拥减少见，以职便得妹到菌收落。划线下结束械后灼欧烧接库种环蜻，能趟及时逮杀死兄接种制环上如残留杂的菌春种，季避免景细菌匙污染绝环境冲和感讽染操谎作者撇。问题殊讨论1.为什年么在启操作诵的第目一步摩以及下每次毅划线零之前死都要塌灼烧喷接种枣环？鸣在划笛线操晃作结拨束时配，仍箩然需先要灼勒烧接赠种环果吗？查为什胶么？2.在灼浑烧接助种环炸之后淹，为冠什么稿要等筹其冷弄却后妥再进贝行划晶线？答：舌以免皇接种希环温脂度太没高，际杀死递菌种怀。3.在作填第二兼次以场及其丸后的旁划线幻玉操作泡时，问为什津么总拦是从核上一姑次划争线的滴末端阅开始况划线悄？答：划线状后，哥线条脾末端秋细菌饿的数沙目比攀线条晴起始尿处要案少，黑每次碍从上谁一次末划线衫的末减端开车始，能使钉细菌涨的数府目随还着划钳线次弟数的修增加触而逐蒜步减赌少，匙最终摇能得闷到由俊单个继细菌衫繁殖企而来获的菌秀落。稀释武涂布新平板的操报作方块法答：应从黄操作仰的各心个细通节保乱证“材无菌攻”。能例如废，酒狸精灯用与培旁养皿匹的距趋离要贱合适地、吸部管头有不要竖接触仔任何糠其他甚物体述、吸循管要那在酒毅精灯赞火焰冒周围挖等等兄。问题柱讨论涂布分平板矛的所非有操雀作都聚应在筝火焰握附近拨进行援。结前合平红板划护线与功系列掩稀释蔽的无尚菌操鱼作要重求，端想一这想，萍第2步应晋如何煮进行莫无菌闸操作利？微生献物的句恒温碗培养微生彩物的泥恒温胸培养微生危物的仆恒温铁培养伊红—美蓝朴培养帽基是鉴狭别培炉养基义，可戏以用遍来检校测自飞来水挠中的溪大肠骑杆菌兵是否刮超标嗓，因铺为的代谢无产物支与伊扒红—美蓝幕结合，使遥菌落岂呈黑色粘并带喂有金蒜属光朝泽，使犹大肠忽杆菌治的菌胡落显谷示出咐来，述并没燥有促累进大渐肠杆萄菌的陶生长冲和抑口制其奔他微羽生物错的生愁长。例如必：鉴别手大肠仰杆菌喘培养该基大肠烦杆菌线呈黑观色中自心,有或斥无金虎属光树泽菌种滚的保呼存1、临时理保藏：接捆种到仓固体弦斜面册培养腾基，船菌落叫长成便后置更于4℃冰箱保存咽。2、长期福保存：甘温油冷璃冻管卷藏法结果风分析微与评辽价㈠.培养姑基的妇制作逆是否腔合格如果鲜未接奇种的亲培养场基在销恒温核箱中凉保温1～2d后无各菌落庆生长今，说回明培候养基秧的制筹备是隙成功惨的，度否则五需要晨重新娇制备扎。㈡.接种叉操作招是否言符合戚无菌猜要求如果害培养着基上岗生长率的菌嫌落的直颜色隙、形委状、坏大小蹄基本君一致晶，并阔符合殖大肠配杆菌叛菌落孔的特飞点，发则说想明接题种操燥作是蜜符合枕要求其的；动如果迈培养掩基上佣出现贿了其蔑他菌侵落，夏则说占明接乒种过破程中越，无根菌操物作还物未达错到要察求，裤需要慈分析夹原因世，再娃次练窑习。㈢.是否锋进行毙了及京时细挺致的球观察考与记能录培养12罚h与24江h后的胜大肠鹅杆菌铃菌落笑的大垦小会肆有明惨显不树同，语及时成观察耍记录针的同宅学会养发现却这一爆点，州并能伙观察续到其犹他一您些细进微的帆变化粗。本课碑题知剑识小须结:【典例财解析】例:关于泪微生妥物营摔养物俩质的闪叙述演中，驼正确狂的是(佛)A.是碳咳源的嫁物质滚不可盈能同赔时是甚氮源B.凡碳治源都膛提供论能量C.除水击以外半的无痛机物致只提其供无扎机盐D.无机悔氮源择也能季提供记能量解析图：不同明的微蚊生物纹，所杯需营争养物坟质有茶较大熔差别脱，要斗针对购微生李物的徒具体被情况守分析疗。对扩于A、B选项瓦，它拔的表揉达是谁不完胡整的舅。有佳的碳舟源只村能是杆碳源全，如另二氧授化碳齐；有聚的碳抖源可登同时蒜是氮政源，径如NH4HC事O3；有军的碳绿源同虽时是匹能源代，如月葡萄塔糖；挡有的壮碳源斜同时洲是氮凉源，示也是评能源面，如礼蛋白先胨