荧光分光光度计验收细则

岛津RF-5301PC荧光分光光度计的验收方案一、荧光分光光度计的方法原理某些物质由于受到光照耀而被激发之后，会放射出比照耀波长稍长的光〔荧光，荧光强度与该物质的浓度有如下关系：

FkI(1eLc)0式中：

F—荧光强度；k—仪器常数；—荧光量子效率I—激发光强度0—荧光物质的摩尔吸取系数L—荧光物质液层的厚度c—荧光物质的浓度Fkc二、试剂1、试剂及标准物质：2、标准溶液的配制：1〕0.05mol/L硫酸标准溶液将1000mL的容量瓶中参加适量的二次蒸馏水，用滴定管取浓硫酸2.7mL，注入容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，并混合均匀后放置备用。2〕500mL1×10-5g/mL的硫酸奎宁标准溶液24h5.00mg的硫酸奎宁标500mL0.05mol/L0.05mol/L硫酸标准溶液稀释至刻度，摇匀即可。注：用深色玻璃瓶储存高浓度的标准液。溶液应低温、避光、密封储存。稀标准溶液应当现配现用。浓溶液有效期为半年。3、设备及器材三、验收标准及验收方法〔仅对于色散型单色器〔光栅一、波长示值误差及重复性12.0n1.0n。2、验证方法：氙灯亮线法激发侧单色器波长示值误差和重复性〔或无荧光的白色滤纸条〕1.5n〔350~550nm〕的波长范围内进展扫描，在谱图上找到450.1nm处的光谱峰，并确定其峰值位置。连续测量三次，依据式〔1〕和式〔2〕分别计算波长示值误差和重复性。

133 i1

„„„(1)n—波长测量值〔nm〕i —参考波长测量值〔氙灯亮线参考波长测量值为：450.1nm〕n波长重复性：

i

133i1

〔nm〕„„„〔2〕i2〕放射侧单色器波长示值误差和重复性〔或无荧光的白色滤纸条〕1.5n〔350~550nm〕的波长范围内进展扫描，在谱图上找到450.1nm处的光谱峰，并确定其峰值位置。连续测量三次，依据式〔1〕和式〔2〕分别计算波长示值误差和重复性。二、检出极限1、标准：用硫酸奎宁标准溶液的检出极限为5×10-10g/mL。20.05mol/L1×10-9g/mL硫酸奎宁标准溶液，灵敏度至最高档，狭缝宽度为1.5nm，激发波长350nm，放射波长为450nm，对空白111次数据是由于外界干扰或是操作失误造成的误差，应当将此数据删除。Fi

F Fi1 i0Fi1

—标准溶液的荧光强度F —空白溶液的荧光强度i0F

111Fn i1

〔n—测量次数〕检测限是指二倍于标准偏差读数的物质的浓度。用符号DL表示；式中：

DL

c2sFni1 ni1 2FFin1s三、测量线性1、标准：仪器测量结果的线性值0.99。2、验收方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白样，将灵敏度至于高档，狭缝宽度为1.5nm，激350nm450nm4中各浓度硫酸奎宁标准溶液。4硫酸奎宁标准溶液(g/L)标准溶液号 1 2 3 41×10-74×10-78×10-71×10-6分别对4中质量浓度工作标准溶液与空白溶液连续交替3强度的平均值。用最小二乘法对4中标准溶液的质量浓度和荧光强度测量平均值进展处理，得到线性相关系数，几位测量线性的检定结果。最小二乘法的计算公式：

YabXbSxxSxyaYbXSS xx

xyS Sxx yyXS Sxx yyX2nS yy

Y2nS xy

XY

XY2n注：cj作为XF作为Y即可进展计算。四)荧光光谱峰值强度的重复性1、标准：仪器测量荧光光谱峰值强度的重复性≤1.5%。2、验证方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白样，将灵敏度至于高档，狭缝宽度为1.5nm，激350nm450nm1×10-7g/mL的硫酸奎宁标准溶液，见光3min后，对365~500nm重复扫描三次。光谱强度的重复性由下式计算：maxFi

133 i i1 FF—为光谱峰值强度的读数。i五〕稳定度

13F3 ii1110min中内基线漂移≤0.5%10min内的漂移≤1.5%。2、验证方法调整灵敏度为中等强度，关闭光闸门，记录10min内的漂移；至激发波长和放射波长为450nm10nm，漫反射板置入样品室，调整灵敏度，使90%3min10min中示值的变化。荧光分光光度计检定记录一、外观与初步检查：_