河北农业大学免疫学课件第二十二章免疫学检测原理及临床应用

本章要求掌握ELISA、带现象、前带现象、后带现象的概念。了解血清学反应的原理、分类及应用。了解常用细胞免疫检测技术的种类及原理。尝试利用所学免疫学技术设计新型免疫学检测技术。本文档共45页；当前第1页；编辑于星期六\7点23分目录基于抗原-抗体反应的检测方法免疫细胞检测免疫分子检测免疫学诊断与监测本文档共45页；当前第2页；编辑于星期六\7点23分第一节基于抗原-抗体反应的检测方法抗原与抗体在体内体外均能发生特异性结合反应，因抗体主要来自血清，因此在体外进行的抗原抗体反应又称为血清学反应或免疫血清学技术。本文档共45页；当前第3页；编辑于星期六\7点23分一、抗原-抗体反应的特点1.特异性与交叉性交叉反应是区分血清型和亚型的重要依据！！本文档共45页；当前第4页；编辑于星期六\7点23分2.抗原-抗体结合的带现象与可见性本文档共45页；当前第5页；编辑于星期六\7点23分3.可逆性本文档共45页；当前第6页；编辑于星期六\7点23分4.反应阶段性第一阶段：特异性结合阶段

特点：反应快（数秒至数分钟）、无可见反应第二阶段：反应的可见阶段

特点：反应慢（数分钟至数小时）、表现为凝集、沉淀、补体结合等反应，所受影响因素较多。本文档共45页；当前第7页；编辑于星期六\7点23分二、影响抗原抗体结合的因素电解质：生理盐水、缓冲液温度：37或4摄氏度酸碱度：pH值在6~8抗原和抗体的性质（抗体特异性和亲和力）振荡：适当杂物和异物本文档共45页；当前第8页；编辑于星期六\7点23分三、抗原-抗体反应检测方法反应类型及试验名称反应类型及试验名称凝集试验直接凝集试验标记抗体技术免疫荧光抗体技术间接凝集试验免疫酶标记技术乳胶凝集试验放射免疫测定技术沉淀试验絮状沉淀试验化学发光标记技术琼脂免疫扩散试验免疫复合物散射反应免疫电泳血清学新技术免疫传感技术火箭免疫电泳免疫印记技术补体参与的试验补体结合试验、补体依赖性细胞毒试验、免疫黏附血凝试验免疫胶体金技术免疫沉淀技术免疫核酸探针技术中和试验病毒中和试验免疫电镜技术毒素中和试验免疫蛋白芯片技术本文档共45页；当前第9页；编辑于星期六\7点23分1.凝集反应

直接凝集

本文档共45页；当前第10页；编辑于星期六\7点23分间接凝集本文档共45页；当前第11页；编辑于星期六\7点23分间接凝集抑制试验本文档共45页；当前第12页；编辑于星期六\7点23分

协同凝集试验

人血清IgG可与葡萄球菌A蛋白（SPA）结合，将已知特异性抗体IgG结合至SPA,IgGFab暴露在金黄色葡萄球菌菌体表面，其与相应抗原特异性结合，导致金黄色葡萄球菌凝集。

本文档共45页；当前第13页；编辑于星期六\7点23分2.沉淀反应单向免疫扩散双向免疫扩散本文档共45页；当前第14页；编辑于星期六\7点23分

双向双扩散沉淀线与抗原成分的关系本文档共45页；当前第15页；编辑于星期六\7点23分免疫电泳本文档共45页；当前第16页；编辑于星期六\7点23分3.补体参与的反应溶血空斑试验本文档共45页；当前第17页；编辑于星期六\7点23分4.免疫标记技术（1）免疫荧光法本文档共45页；当前第18页；编辑于星期六\7点23分唾液腺中的狂犬病毒单纯疱疹病毒

本文档共45页；当前第19页；编辑于星期六\7点23分（2）酶免疫测定用酶标记的抗体进行抗原抗体反应。一般用酶标仪测定光密度值（OD值）以反应抗原或抗体含量。灵敏度可达ng~pg/ml水平。常用标记的酶为辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。本文档共45页；当前第20页；编辑于星期六\7点23分酶联免疫吸附试验（enzymelinked-immunosorbentassay,ELISA）:将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，在固相表面经行抗原抗体反应，通过洗涤固相表面抗原抗体复合物与液相中游离成分分离。本文档共45页；当前第21页；编辑于星期六\7点23分酶标仪本文档共45页；当前第22页；编辑于星期六\7点23分本文档共45页；当前第23页；编辑于星期六\7点23分本文档共45页；当前第24页；编辑于星期六\7点23分酶联免疫斑点试验（enzymelinkedimmunospotassay,ELISPOT）本文档共45页；当前第25页；编辑于星期六\7点23分BAS-ELISA（生物素-亲和素系统ELISA）本文档共45页；当前第26页；编辑于星期六\7点23分免疫组化技术本文档共45页；当前第27页；编辑于星期六\7点23分免疫胶体金技术本文档共45页；当前第28页；编辑于星期六\7点23分本文档共45页；当前第29页；编辑于星期六\7点23分免疫胶体金检测技术用于怀孕诊断（怀孕）（未怀孕）本文档共45页；当前第30页；编辑于星期六\7点23分本文档共45页；当前第31页；编辑于星期六\7点23分免疫印迹本文档共45页；当前第32页；编辑于星期六\7点23分本文档共45页；当前第33页；编辑于星期六\7点23分5.血凝抑制试验血凝试验：检测抗原（新城疫、流感病毒等）血凝抑制试验：检测抗体本文档共45页；当前第34页；编辑于星期六\7点23分第二节免疫细胞检测外周血单个核细胞的分离：

用淋巴细胞分离液（葡聚糖-泛影葡酸）密度梯度离心法。淋巴细胞亚群分离或计数：

流式细胞术、磁分离技术、花环试验等。树突状细胞诱生和分离：

诱生：IL-4、GM-CSF鉴定：CD1a和CD83一、免疫细胞及其亚类计数本文档共45页；当前第35页；编辑于星期六\7点23分流式细胞技术的一般过程本文档共45页；当前第36页；编辑于星期六\7点23分E玫瑰花环试验本文档共45页；当前第37页；编辑于星期六\7点23分二、淋巴细胞功能测定1.T细胞转化试验（T细胞增殖试验）

本文档共45页；当前第38页；编辑于星期六\7点23分2.溶血空斑形成试验本文档共45页；当前第39页；编辑于星期六\7点23分3.巨噬细胞吞噬功能的检测1234本文档共45页；当前第40页；编辑于星期六\7点23分5本文档共45页；当前第41页；编辑于星期六\7点23分4.测定淋巴细胞功能的体内试验机体对特定抗原产生初次细胞免疫应答，再用相同抗原做皮肤试验，出现以局部红肿为特征的迟发型超敏反应。结核杆菌、免疫缺陷病等本文档共45页；当前第42页；编辑于星期六\7点23分第三节免疫分子检测免疫球蛋白测定补体测定

血清总补体采用50%补体溶血法。细胞因子检测

免疫学测定法分泌性细胞因子检测：ELISA、免疫印迹胞内细胞因子检测：FCM、免疫斑点本文档共45页；当前第43页；编辑于星期六\7点23分CD分子、表面受体和粘附分子的检测

相应抗体检测方法有：FCM、间接免疫荧光等。HLA分型