药物分析 第03章-药物的杂质-3

第三章

药物的杂质检查郭庆发Testforpurity1.取样2.鉴别3.检查4.含量测定5.检验报告工作程序

药品检验工作的基本内容第三章药物的杂质检查一般杂质的检查3药物杂质与限量1杂质检查方法2特殊杂质的检查43.肾上腺素中肾上腺酮的检查：称取肾上腺素0.250g，置于25mL量瓶中，加0.05mol/L盐酸液至刻度，量取5mL置另一25mL量瓶中，用0.05mol/L盐酸液稀释至刻度，用此液照分光光度法，在310nm处测定吸收度，不得大于0.05，问肾上腺素的限量是多少？（以百分表示，肾上腺素

=453=()g/100ml=()g/ml×1/100四、重金属检查法定义——重金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质(Ag,Pb,Hg,Cu,Cd,Sn,Bi等），以铅为代表。什么是重金属？重金属检查法

四种方法(2005版药典)

硫代乙酰胺法炽灼检查法硫化钠法微孔滤膜法重金属检查法问题：三种检查方法各适用于哪些药物？第一法：适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物第二法：适用于含芳环、杂环及难溶于水、稀酸、乙醇和碱的有机药物第三法：适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类在弱酸条件下（pH3～3.5）能与硫代乙酰胺生成不溶性硫化物而显色的金属离子有Ag+、As3＋、As5＋、Bi3＋、Cu2+、Cd2＋、Co2＋、Hg2＋、Ni2＋、Pb2＋、Sb3＋、Sn2＋、Sn4+等；

在碱性溶液中能与硫化钠作用生成不溶性硫化物而显色的有Bi3＋、Cd2

、Cu2+

、Co2＋、Fe3＋、Hg2＋、Ni2＋、Pb2＋、Zn2＋等金属离子。适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。第一法：硫代乙酰胺法黄色～棕黑色药物：PbSSHPbpH3.522¾¾®¾++()黄色～棕黑色、对照：PbSSHPbNOpH3.523¾¾®¾+Vc1.原理

标准对照法

2.操作方法甲管对照管丙管监测管乙管样品管27ml重金属检查法--对照法（目视比色法）

比较颜色甲管（标准溶液）、乙管（供试品）、丙管（监测管）丙管不浅于甲管，比较甲乙管甲管深于乙管，符合规定丙管浅于甲管，第二法甲丙甲乙3.讨论（1）

测定条件①

Pb2+的最适检测浓度范围：标准铅溶液临用前稀释而成标准硝酸铅溶液10gPb2+/ml目视比色的浓度范围：10~20g/27ml相当于Pb2+标准溶液1~2ml(10g/ml)若小于10μg或大于30μg,则色太浅或太深,均不利于目视观察比较。②

反应试剂：硫代乙酰胺试液H2S试液：恶臭和毒性,不稳定,易被空气氧化而析出硫,浓度难以控制。③

醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为3~3.5pH在3.0~3.5时,硫化铅沉淀较完全.酸度增大,呈色变浅甚至不呈色.若样品用强酸溶解,在加入硫代乙酰胺前,加氨水至中性.（2）

干扰及排除①供试品溶液有颜色a.内消色法b.

外消色法

无铅杂质相同颜色澄清液样品pH3.5硫代乙酰胺过滤滤液标准Pb液对照管样品管除去PbS硫代乙酰胺a.内消色法b.

外消色法Ⅰ.稀焦糖溶液调节Ⅱ.指示剂调节（2）

干扰及排除②

干扰物的排除方法a.供试品中微量高价Fe3+存在干扰：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S

析出S，产生混浊影响检查。如：葡萄糖酸亚铁中重金属的检查.排除：加入抗坏血酸或盐酸羟胺使

Fe3+还原为Fe2+。b.供试品为铁盐（大量的Fe3+）如：枸橼酸铁铵的重金属检查利用Fe3+在HCl溶液中能形成配位化合物[HFeCl6]2-用乙醚提取弃去.水层加氨试液调至碱性,用KCN掩蔽残存的微量Fe3+,按第三法检查.

c.药物本身能生成不溶性硫化物如：葡萄酸锑钠中重金属的检查排除：加入10%NaOH和KCN试液使锑/锌形成稳定的配位化合物后,用第三法检查.第一法

硫代乙酰胺法小结条件：

介质：醋酸盐缓冲液(pH3.5)

2ml试剂：硫代乙酰胺(CH3CSNH2)2ml杂质对照液：Pb(NO3)2(10µg/ml)灵敏度范围：10~20g/27ml黄色至棕黑色混悬液注意：

供试品有色：加有色溶液或改用第二法含微量高铁盐：加Vc供试品为铁盐：除去供试品能形成不溶性硫化物：加掩蔽剂原理：第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法将供试品炽灼破坏后，使有机结合的重金属游离，再按第一法检查。适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇的有机药物；有色且无法消色的药物。1.原理2.操作方法对照溶液的配制：取上述同样量试剂置瓷皿中蒸干后，用于配制对照溶液，依法检查。

缓缓炽灼

放冷H2SO40.5-1.0ml供试品完全炭化

加热

HNO32ml

500-600℃H2SO4蒸气除尽放冷完全灰化

蒸干炽灼HCl2ml水15ml

中性，即供试溶液按第一法检查蒸干氨试液3.讨论

（1）HNO3处理后，必须蒸干除尽氧化氮。（2）炽灼温度要严格控制：500-600℃。（3）含钠盐或氟的有机药物在炽灼时腐蚀瓷坩埚，改用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿。例盐酸尼卡地平Ch.P.（2010）【检查】重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查（附录ⅧH第二法），含重金属不得过百万分之二十。适用于溶于碱而难溶于稀酸或在稀酸中产生沉淀的药物。第三法：硫化钠法介质：氢氧化钠试液反应试剂：硫化钠对照溶液：标准铅溶液（2）对于在水与乙醇液中难溶的药物及易于重金属结合成配位化合物的药物，可采用有机破坏，溶剂提取及加掩蔽剂等方法除去干扰。（1）硫化钠对玻璃有腐蚀，久置会产生絮状物，应临用新制。

注意事项总结：例1.中国药典(2010年版)重金属检查法中，所使用的沉淀剂是

A.硫化氢试液

B.硫代乙酰胺试液

C.硫化钠试液

D.氰化钾试液

E.硫氰酸铵试液例2.葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是

A.用硫代乙酰胺为标准对照液

B.用10ml稀硝酸/50ml酸化

C.在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中

D.用硫化钠为试液

E.结果需在黑色背景下观察

例3.现有一药物为磺胺嘧啶，欲进行重金属检查，应采用《中国药典》上重金属检查的哪种方法

A.一法B.二法

C.三法D.四法

E.以上都不对在水中几乎不溶；在氢氧化钠试液或氨试液中易溶例4.下面哪些方法为《中国药典》收载的重金属检查方法

A.500～600℃炽灼残渣后，按一法操作

B.pH3～3.5条件下，加入硫化氢试液

C.碱性下，加入硫化钠试液

D.按一法操作后再用微孔滤膜过滤后观察色斑

E.以上都对例5.药典中需要检查的重金属是指

A.PbB.Hg，Cu，Bi，Fe，PbC.比重大于5的金属

D.在人体中可中毒的金属

E.能与硫代乙酰胺或硫化钠作用生成不溶性硫化物的金属杂质五、砷盐检查法古蔡法方法二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC）1.古蔡氏法原理：本法系采用锌和酸作用所产生的初生态氢与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢,再与溴化汞试纸作用生成黄色至棕色砷斑。标准砷溶液的制备

标准砷溶液的制备称取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，存放时间一般不宜超过一年。临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于1μg的As)。标准砷斑的制备

标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置25-40℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。

相当于2μg砷。此时砷斑清晰HCl供试品溶液标准砷溶液KI试液酸性SnCl2三价砷Zn粒AsH3↑过Pb(Ac)2棉花遇HgBr2试纸砷斑（比较颜色）操作方法：供试品溶液按各品种规定方法制备；标准砷斑采用2ml标准砷溶液(1µgAs/ml)制备。2ml5ml+H2O21ml2.5%,5ml0.3%,5滴2g25~40℃水浴中,反应45min生成砷斑吸收硫化氢气体防止形成HgS色斑古蔡检砷装置溴化汞试纸醋酸铅棉花(60mg)HCl碘化钾试液酸性氯化亚锡试液Zn粒中空圆面旋塞导气管AsH3发生瓶8cm还原五价砷为三价砷还原剂表现在3方面:As5+→As3+将KI被氧化生成的I2再还原为I-SnCl2与Zn粒表面形成Zn-Sn齐，起去极化的作用，是产生的氢均匀。讨论----试剂的作用1.KI的作用-----?还原剂：As5+→As3+2.酸性SnCl2的作用----?SnCl2与Zn粒表面形成Zn-Sn齐起去极化作用,使氢均匀而连续地发生H2阻碍酸与锌粒反应Zn超电压0.70Sn超电压0.50SnCl2讨论-----PbAc2棉花的作用?—排除硫化物的干扰干扰物的排除供试品是硫化物,亚硫酸盐,硫代硫酸盐干扰消除方法：加入浓硝酸处理干扰物的排除供试品是铁盐(Fe3+)干扰：Fe3+能消耗还原剂、

氧化砷化氢排除方法先加酸性SnCl2试液使：Fe3+→Fe2+共价键结合的砷化物酸破坏法：加稀硫酸与溴化钾碱破坏法加入氢氧化钙500-600℃灼烧加入无水碳酸钠碱融含锑药物SbH3+HgBr2SbH2(HgBr)+HBr（灰色锑斑）改用白田道夫(Betterdorff)法。干扰：排除:白田道夫法

2As3＋+3SnCl2+6HCl→2As↓+3SnCl4+6H＋

(棕褐色的胶态砷

)与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色比较干扰砷斑检查

（1）供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐时，在酸中生成H2S或SO2，与HgBr作用生成HgS或Hg，干扰砷斑检查，可先用硝酸将其氧化成硫酸盐。（2）供试品为铁盐（Fe3+）时，消耗KI、SnCl2，并氧化砷化氢，可先加酸性氯化亚锡试液还原高铁。（3）砷以共价键结合的有机药物，进行有机破坏后再检查。总结：

砷盐检查法--古蔡法特点优点：灵敏度高(1gAs)缺点：Sb干扰2.二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）红色胶态银As(DDC)3+6Ag+3吡啶·HDDCAsH3+

6Ag(DDC)+3吡啶目视比色法510nm测定A值（定量）同古蔡氏法C2H5C2H5NCSSAgAg(DDC)结构：吡啶吸收HDDC（1）USP采用0.5%Ag-DDC的吡啶溶液，ChP采用0.25%Ag-DDC的三乙胺-三氯甲烷溶液，灵敏度略低于吡啶溶液。（2）锑化氢与Ag-DDC的反应灵敏度较低，本法受锑的干扰较小。讨论：

Ag-DDC溶液产生AsH3Ag-DDC法检砷装置砷盐检查法--Ag-DDC法Ag-DDC法的特点灵敏度高0.5µgAs/30ml可仪器测定,还可定量Sb干扰小古蔡法Hg(Br)2试纸Pb(Ac)2棉花反应液（相同）Ag(DDC)Ag(DDC)法标准磨口锥形瓶导气管

古蔡氏法与

Ag(DDC)法的比较

3.其它方法（1）白田道夫法原理：氯化亚锡在盐酸溶液中将砷盐还原成棕褐色的胶态砷。特点：用于含锑药物的砷盐检查时，不产生干扰，但灵敏度低。（2）次磷酸法原理：次磷酸在盐酸溶液中将砷盐还原成棕色的游离砷。特点：用于硫化物、亚硫酸盐及含锑药物的砷盐检查时，不产生干扰，但灵敏度比古蔡氏法低。方法试剂结果古蔡氏法Ag-DDC法白田道夫法次磷酸法Zn、HCl、KI、SnCl2、HgBr2Zn、HCl、KI、SnCl2、Ag-DDCSnCl2H3PO2砷斑胶态银胶态砷游离砷ChP规定干燥失重的量应恒重，即供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下。六、干燥失重测定法检查药物中的水分及其它挥发性物质。干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量，以百分率表示。（一）常压恒温干燥法适用于受热较稳定的药物干燥箱（105℃）（二）减压干燥法与恒温减压干燥法适用于熔点低或受热分解的药物减压干燥器（室温）、恒温减压干燥器（60oC）

常用干燥剂：无水氯化钙、硅胶、五氧化二磷干燥失重检查法鼓风烘箱减压烘箱扁形称量瓶减压玻璃干燥器(三）干燥剂干燥法(常温减压干燥法)本法适用于受热易分解或易升华的药物。将样品置干燥器内干燥至恒重常用干燥剂有：硅胶、硫酸、无水氯化钙、五氧化二磷等。其中五氧化二磷吸水效力最强，但P2O5吸水后产生H3PO4，若样品对酸不稳定，可能会受影响样品七、水分测定法ChP、USP和BP均收载了费休氏法和甲苯法。八、炽灼残渣检查法九、易炭化物检查法十、残留溶剂测定法十一、溶液颜色检查法十二、溶液澄清度检查法§3-4特殊杂质的鉴定方法一、特殊杂质的研究规范1.新原料药和新制剂中的杂质表观含量≥0.1%和表观含量<0.1%具强烈生物作用或毒性的杂质，要求定性或确证其结构。包括：药物合成中的有机杂质；稳定性试验中的降解产物。

2.非新药中发现的新杂质和新降解产物3.手性药物的光学异构体（一）合成杂质对照品法适用于量少，分离纯化困难的杂质。方法：比较杂质与对照品的色谱性质、UV曲线特征和MS信息，判断杂质与对照品是否是同一种化合物，从而确定杂质的结构。（二）色谱制备杂质对照品法适用于量较大的杂质。方法：通过色谱分离得到特定杂质，再通过元素分析、UV、IR、NMR和MS确定杂质及有关物质的结构。二、特殊杂质的鉴定（一）最佳选择题1.下列属于信号杂质的是（）

A.砷盐B.硫酸盐C.铅D.氰化物

E.汞2.药物中无效或低效晶型的检查可以采用的方法是（）

A.高效液相色谱法B.红外分光光度法

C.紫外-可见分光光度法D.原子吸收分光光度法

E.气相色谱法3.原子吸收分光光度法检查药物中金属杂质时，通常采用的方法是（）

A.内标法B.外标法C.加校正因子的主成分自身对照法D.标准加入法

E.不加校正因子的主成分自身对照法4.药物中氯化物杂质检查，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用的稀酸是

()

A.硫酸

B.硝酸

C.盐酸

D.醋酸E.磷酸5.氯化物检查法中，用以解决供试品溶液带颜色对测定干扰的方法是（）

A.活性炭脱色法B.