药物分析 第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析

第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析

药物分析主讲:戈振凯非甾体抗炎药（NosteroidalAntiinflammatoryDrugs，NSAIDs）是一类不含有甾体骨架的抗炎药，多数具有芳酸基本结构。分类：（芳基的取代位置及芳基上的取代基）水杨酸类（邻羟基苯甲酸）邻氨基苯甲酸邻氨基苯乙酸芳基丙酸吲哚乙酸苯骈噻嗪甲酸尼美舒利对乙酰氨基酚第一节典型芳酸类非甾体抗炎药物的结构与性质一、典型药物与结构特点3第一节:结构与性质酸性酸性光谱特性4第一节:结构与性质酸性酸性光谱特性基团特性5第一节:结构与性质酸性6第一节:结构与性质酸性光谱特性7第一节:结构与性质水解光谱特性8第一节:结构与性质其它非甾体类抗炎药水解光谱特性9第一节:结构与性质二、主要理化性质（一）酸性具游离羧基显酸性，酸性受苯环的取代位置及苯环上其他取代基的影响◆—CH3、—NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱◆—X、—NO2、—OH等吸电子基团存在酸性增强

◆邻位取代酸性>间位、对位取代酸性10（二）水解性具有酯键：阿司匹林、双水杨酯具有酰胺键：吲哚美辛、吡罗昔康、对乙酰氨基酚◆利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别◆利用酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，可用水解后剩余滴定法测定含量◆芳酸类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质第一节:结构与性质（三）具有紫外和红外吸收（四）基团或元素特性酚-OH显色二苯甲酮显色SPbS↓Fe3+苯肼D分解Pb2+苯环和特征取代基第一节:结构与性质特点：（1）反应适宜的pH值为4~6（2）反应极为灵敏（3）各反应的方法第二节:鉴别试验一、与三氯化铁反应显色具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物第二节:鉴别试验1、水杨酸反应

药物试验方法结果水杨酸水溶液紫堇色阿司匹林加热水解后反应紫堇色双水杨酯氢氧化钠试液中煮沸紫色二氟尼柳溶于乙醇深紫色14第二节:鉴别试验水杨酸反应15第二节:鉴别试验显玫瑰红色显淡紫红色酚羟基反应2、酚羟基反应（三氯甲烷溶液）16第二节:鉴别试验二、缩合反应显色二苯甲酮结构酸性条件下与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物17第二节:鉴别试验三、重氮化-偶合反应

分子结构中具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物临用新配注意：在鉴别时，首先要使溶液成酸性，然后才能滴加亚硝酸钠试液及碱性β一萘酚试剂。18第二节:鉴别试验水解反应产生芳伯胺芳伯胺重氮化偶合反应对乙酰氨基酚19重氮化-偶合反应贝诺酯橙红色第二节:鉴别试验四、氧化反应甲芬那酸＋H2SO4

深蓝色随即变为棕绿色第二节:鉴别试验吲哚美辛硫酸共存，与重铬酸钾共热，显紫色盐酸溶液中，与亚硝酸钠溶液反应显绿色，渐变黄色五、水解反应阿司匹林白色水杨酸醋酸臭气第二节:鉴别试验双水杨酯与氢氧化钠试液煮沸后，加稀盐酸，即生成白色水杨酸沉淀；沉淀在醋酸铵试液中可溶解。第二节:鉴别试验六、特征元素反应1、氯元素的鉴别含氯药物经过前处理，显氯化物的鉴别反应2、硫元素的鉴别美洛昔康中含有二价硫，分解产生硫化氢，遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀利用药物所具有的紫外和红外吸收特征进行鉴别紫外：1、最大吸收波长法：如双氯芬酸钠的水溶液在276nm有最大吸收2、最大与最小吸收波长法：布洛芬3、吸光度法：甲芬那酸4、吸收度比值法：二氟尼柳七、紫外吸收和红外吸收光谱法第二节:鉴别试验IR：阿司匹林-COOH-OH-COOHPh-C邻位取代Ph第二节:鉴别试验N-HO-HN-HPh:C=C芳胺酚第二节:鉴别试验第二节:鉴别试验供试品保留时间对照品保留时间薄层色谱法高效液相色谱法八、色谱法表6-3典型非甾体抗炎药物的主要有关物质药物名称有关物质结构式代码/名称药物名称有关物质结构式代码/名称阿司匹林双水杨酯游离水杨酸萘普生I．

6-甲氧基-2-萘乙酮甲芬那酸2,3-二甲基苯胺对乙酰氨基酚氨基酚对氯苯乙酰胺第三节:特殊杂质及其检查法一、阿司匹林和双水杨酯生产工艺ASA副产物水杨酸双水杨酯第三节:特殊杂质及其检查法酰化不完全+水解（精制、制剂、贮藏）易氧化成有色醌类化合物，有毒ChPbefore2010用水杨酸与Fe3+

生成紫堇色配离子的原理,用稀硫酸铁铵溶液显色法检查供试品溶液制备过程中阿司匹林水解ChP2010（HPLC）供试品溶液：1%冰醋酸甲醇溶液（防水解）外标法；不得超过0.1%原料、制剂限量不同第三节:特殊杂质及其检查法1.游离水杨酸第三节:特殊杂质及其检查法淡黄红棕深棕色HPLC法31

限量要求＊原料药：0.1%

＊阿司匹林片：0.3%

＊阿司匹林肠溶片：1.5%

＊阿司匹林肠溶胶囊：1.0%

＊阿司匹林泡腾片：3.0%

＊阿司匹林栓剂：3.0%第三节:特殊杂质及其检查法①未反应完全的酚类②水杨酸精制时温度过高产生脱羧副反应的苯酚③合成工艺过程中由副反应生成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等10版药典：反相色谱法，采用不加校正因子的主成分自身对照法，所有杂质峰（扣除水杨酸峰）之和不得大于对照液主成分峰面积05版药典：以“溶液澄清度”检查碳酸钠试液中不溶物（利用杂质和药物溶解行为的差异）第三节:特殊杂质及其检查法2.其它有关物质醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯HPLC法第三节:特殊杂质及其检查法34双水杨酯中游离水杨酸的检查：水杨酸与三价铁生成有色配位化合物，在530nm下测定原料限度：0.5%

片剂限度：1.5%第三节:特殊杂质及其检查法二、甲芬那酸中2,3二甲基苯胺的检查第三节:特殊杂质及其检查法甲芬那酸主要以邻-氯苯甲酸(o-chloroben-zoicacid)和2,3-二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)为原料,在铜的催化下缩合而成。(1)合成工艺(2)2,3-二甲基苯胺的检查ChP曾采用HPLC法检查有关物质:单一杂质的限量为0.1%杂质总量为0.5%第三节:特殊杂质及其检查法GC法ChP2010规定：

HPLC法检查:“有关物质”外，采用GC检查2，3-二甲基苯胺(0.01%)2,3-二甲基苯胺可引起高铁血红蛋白血症，并对中枢神经系统及肝脏有损害37第三节:特殊杂质及其检查法三、二氟尼柳中有关物质的检查(1)合成工艺38(2)有关物质A和B的检查：自身对照法1.有关物质A的检查——(): 极性较小的杂质 单一杂质的限量为0.5%2.有关物质B的检查——): 极性较大的杂质 各面积的和为0.5%TLC正相HPLC反相第三节:特殊杂质及其检查法39第三节:特殊杂质及其检查法四、萘普生中有关物质的检查(1)合成工艺色谱条件杂质限量(2)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有关物质五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺HPLC第三节:特殊杂质及其检查法(1)合成工艺(2)有关物质检查：酸碱滴定法

紫外-可见分光光度法

高效液相色谱法第四节:含量测定第四节:含量测定一、酸碱滴定法(Acid-basetitrationmethod)酸碱滴定法阿司匹林

非水溶液滴定法吡罗昔康剩余量滴定法直接滴定法水解后剩余量滴定法美洛昔康水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬等43(一)直接滴定法因此，可采取直接滴定法第四节:含量测定苯甲酸pKa4.20水杨酸pKa2.98酸性较强羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；分子内氢键，更增加了其极性44第四节:含量测定1.反应原理2.讨论乙醇：溶解Asp，防止Asp水解;中性乙醇：对酚酞指示剂显中性，消除滴定误差滴定在不断振摇下稍快进行,防止阿司匹林水解受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰45pKa3~6

的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定

pKa6~9

的药物要用非水溶液滴定法若SA不合格，不宜采用本法水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生及尼美舒利3.应用第四节:含量测定46本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几乎不溶，在丙酮中微溶。所以ChP使用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。烯醇式结构:酸性第四节:含量测定(二)剩余量滴定法第四节:含量测定(三)水解后剩余量滴定法(Residualtitrationafterhydrolysis)1.水解后剩余量滴定法反应摩尔比为1：2USP32-NF27、BP2009、JP15取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，缓缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5mol/L)相当于45.04mg的C9H9O4。USP32-NF27第四节:含量测定滴定度滴定液浓度待测物反应系数滴定液反应系数待测物摩尔质量空白反应体积样品测定消耗体积样品称重量第四节:含量测定2.两步滴定法(Two-steptitration)Aspirin片和肠溶片枸橼酸Citricacid酒石酸Trataricacid水解产物水杨酸SA和HAc第四节:含量测定反应摩尔比为1：1第二步：水解后剩余滴定第一步：中和干扰物和阿司匹林的游离羧基第四节:含量测定终点：溶液显粉红色空白消耗样测消耗校正因子滴定度片剂规格第四节:含量测定直接滴定法水解后剩余量滴定法两步滴定法三种方法的比较第四节:含量测定（四）非水溶液滴定法吡罗昔康第四节:含量测定原理：具有吡啶环，显弱碱性，采用冰醋酸做溶剂，高氯酸滴定液测定。测定法：取本品约0.2g,精密称定,加冰醋酸20ml使溶解,加结晶紫指示液1滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色,并将滴定的结果用空白试验校正。T=33.14mg/ml适用于二氟尼柳、美洛昔康、尼美舒利制剂、对乙酰氨基酚及部分制剂的含量测定

二、紫外－可见分光光度法第四节:含量测定（一）直接紫外可见分光光度法对照品法计算公式：(二)柱分配色谱-紫外分光光度法

(ColumnPartitionChromatography)利用固定相酸碱性的不同进行分离利用药物和固定相起化学反应而进行分离利用生成离子对进行层析分离单纯靠选择流动相进行分离压榨棒350mm21mm担体：硅藻土(Celite545)固定相：一定pH的缓冲水溶液流动相：与水不相混溶的有机溶剂(洗脱前必须先用水饱和)第四节:含量测定阿司匹林的含量测定胶囊内容物氯仿溶解，上样氯仿洗脱HAc-氯仿洗脱，收集洗脱液定容后测定A280硅藻土-NaHCO3SAASAASA第四节:含量测定①NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质②冰HAc酸化的目的：使ASA游离，易被CHCl3洗脱过程溶剂作用第四节:含量测定供试品吸光度对照品吸光度对照品浓度例子三、HPLC法第四节:含量测定HPLC法用于测量阿司匹林栓剂的含量1.色谱条件

色谱柱：C18