新冠核酸检测技术PCR实验室质量体系文件

经典word整理文档，仅参考，转Word此处可删除页眉页脚。本资料属于网络整理，如有侵权，请联系删除，谢谢！新冠核酸检测技术PCR实验室质量体系文件****医院临床检验中心临床基因扩增实验室管理程序标准操作程序（SOP）起草人：批准人：生效日期：年月日新冠核酸检测技术PCR实验室质量体系文件目录临床基因扩增实验室的设置····································································3临床基因扩增实验室内部管理规章·························································11临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训··············································15临床基因扩增实验室的设施和环境·························································18临床基因扩增实验室清洁制度规章·························································19临床基因扩增实验室仪器设备管理规章···················································21Roche480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（）未修改·26Finnpipette可调式移液器的使用与维护标准操作(SOP-2)······························35Finnpipette可调式移液器校准标准管理程序(SOP-3)····································39温度计及湿温度计的校正标准管理程序(SOP-4)··········································40离心机使用与维护标准操作程序(SOP-5)··················································41超净工作台使用与维护标准操作程序(SOP-6)·············································45恒温水浴箱使用、维护与校正（）·················································46旋涡振荡器使用与维护标准操作程序（）·········································49冰箱的使用与维护标准操作程序（）··············································50可移动紫外灯标准操作程序（）···················································52仪器故障时标记、放置标准操作程序（）·······································53仪器设备发生故障时的应急处理程序（）·······································54临床标本的收集管理标准操作程序（）··········································57检验标本的验收和保存标准操作程序（）·······································58新冠核酸检测技术PCR实验室质量体系文件样本编号的标准操作程序(SOP-15)··························································63PCR标本管理标准操作程序（）···················································65标本前处理标准操作程序（）······················································67核酸扩增及产物分析检测标准操作程序（）····································68乙型肝炎病毒基因扩增检测标准操作程序（SOP-19）·································70基因扩增检测实验结果分析标准操作程序(SOP-20)·····································75实验结果有效性判断标准操作程序（）··········································78室内质量控制标准操作程序(SOP-22)·······················································79实验室试剂耗材购买、验收和贮存的标准操作程序（）·····················85试剂质检标准操作程序（SOP-24）·························································91实验室耗材质检标准操作程序（）················································94手套使用及左右手分开的原则（）················································97实验室化学试剂贮存使用、废弃物处理及生物防护（）·····················98抱怨的处理程序（SOP-28）·································································101实验室记录管理规章标准操作程序（）·········································105检验报告单管理标准操作程序（）···············································108实验室台面摆放顺序程序（）·····················································112实验室常用溶液配置标准操作程序（）·········································113****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的：依照实验室设置规范实现核酸扩增荧光检测实验室配置合理，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性2范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确各项规章制度3操作人：****4实验室设置规章：4.1依据：号）中临床基因扩增检验实验室基本设置标准结合本实验室的条件进行设置，并严格按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字2002第8号）的要求开展临床基因扩增工作(拟开展基因扩增检验项目见附表1)4.2实验室设置:4.2.1扩增及产物分析区(PCR-Ⅲ）三个工作室组成。这三区各自独立，每个区设有缓冲间。其布局见实验室平面图（见附图4.2.2扩增及产物分析区本室工作人员不得进入”标记。4.2.3建立实验室内务管理，并放在进入实验室的明显位置（如置于缓冲区的墙上；内务管理应有进入实验的工作流程、进入实验室的要求、实验前的准4.2.4三个工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识：试剂准备区—蓝色，标本制备区—紫色，PCR扩增及产物分析区—黑色。各区的实验物品不得混用（实验室主要设备一览表见表4.2.5进入各区的工作流程为：试剂储存和准备区→标本制备区→PCR扩增及产物分析区。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页4.2.6进入实验室必须更换有本室标识的工作服及清洁鞋套，工作人员离开某4.3各区实验设备及用品配置：4.3.1试剂储存和准备区：车、固定紫外线灯，混匀器，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸4.3.2标本制备区：器、可调式移液器（覆盖作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离4.3.3PCR扩增及产物分析区：Line-Gene全自动荧光定量PCR核酸扩增仪、紫外消毒车、固定紫外线记号笔等。4.4实验室人员设置：实验室人员配置：我院PCR实验室配备有3名工作人员，其中1人具检验师职称，2人具主管检验师职称。已全部经过安徽省临床检验中心培训，并取得培训合格证（实验室工作人员一览表见表年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页附表1拟开展临床基因扩增检验项目一览表****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表2临床基因扩增检验实验室工作人员一览表所学毕业从事本备注专业时间专业时间格证号1×××√∥2×××√∥3×××√∥主管检验82．7主管检验81．7检验师检验95．7****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表3临床基因扩增检验实验室仪器设备一览表仪器设备生产厂家仪器型号名称备注公司样本浙江大学净化****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页仪器设备生产厂家仪器型号名称备注公司12恒温医疗器械S.HH.W21.42001006水浴厂箱微型上海医科13混匀大学仪器XW-80AQ/DAALC-20002003-2-15准备区样本准备区样本准备区样本准备区PCR扩增全新扩增Magnetic****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页仪器设备生产厂家仪器型号名称备注有限公司江阴市光电仪器有限公司械厂区PCR扩增区全新19线消毒车****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页基因扩增实验室平面图图1****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的：依照实验室管理规范实现全面质量管理，实现核酸扩增荧光检测实验室有专人负责，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性2范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确了各项规章制度3操作人：**4规章：4.1实验室内务管理规章：4.1.1本接收时同时进行以下记录：在标本与化验单上同时进行标本的唯一性编号，在标本接收登记本上记录患者的姓名、年龄，标本接收日期，标本的特性、状态，接收者签名。经验收合格后接收的标本直接运送至标本制备区。4.1.2实验过程中须严格遵守实验的工作流程：试剂准备区→标本制备区→扩增及产物分析区的唯一流向制度。4.1.3开启实验区前逐一打开设在缓冲区外墙上的紫外线灯开关（控制实验区30分钟。4.1.4工作开始前，在缓冲区换好本实验区工作衣，戴上一次性口罩、帽子，套上一次鞋套，关闭紫外灯。打开缓冲的排风装置，开启实验区门锁，工作时反锁隔离门。4.1.5进行测定前的准备和工作记录（实验前的准备和工作记录见表a)记录冰箱温度、紫外线消毒时间；b)消毒液、清洁液、75%酒精配制；c)查看加样器、扩增仪、离心机、灭菌的吸头等是否在有效期限内；d)校正水浴锅温度；e)试剂准备：试剂是否在有效期范围内，根据标本量确定准备模板的数量及阴阳性对照数量；4.1.6实验过程的记录（见SOP4.1.7检测结果的记录（见SOP****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页4.1.8实验完成后实验室清洁消毒处理及记录：实验台面、加样器、离心机、超净工作台、振荡器、扩增仪、实验室空间、实验室地面等（详见实验室清洁4.1.9工作结束，内务整理完毕，关闭排风装置及实验区，加锁。4.1.10唯一流向制度同样运用于实验室物流管理及内务管理。4.2质量控制规章：4.2.1制定各种SOP文件并严格执行。4.2.2参加室间质评。4.2.3开展室内质控工作。4.3人员行为规章：4.3.1要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。4.3.2实验室人员须保持仪表整洁。4.3.3严格遵守实验操作规范，不得随意更改操作步骤。4.3.4实验室技术人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，包括实验室擦洗、台面消毒，离心管、吸头的无菌灭活准备，仪器使用和废弃物的处理等。4.3.5进入实验室工作人员必须遵守实验室唯一流向制度，无必要尽量减少进入实验室的次数。4.3.6实验室内严禁饮食、吸烟。4.3.7非本室工作人员未经允许不得进入实验室。4.3.8语言有礼貌、举止讲文明，对待来访病人或电话应和蔼礼貌，解释明确耐心，不得推脱或生硬回绝。4.3.9晚上下班要关门、窗，检查空调和仪器的电源是否关闭。4.4仪器管理规章：4.4.1实验人员必须熟悉仪器性能方允许操作，严格遵守操作规程。4.4.2所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，有使用维修记录。4.4.3仪器使用前必须检查是否完好，一旦发现问题，及时向负责人反映，不得擅自拆装。4.4.4注意保持仪器卫生整洁，严禁在室内抽烟，吃零食，非仪器操作员应尽量少入。4.4.5每天了解仪器运转情况，负责仪器的整洁，安全，检查电源，水龙头。4.4.6定期校正和维护PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器、设备，并建立仪器质量认证档案。4.5试剂管理规章：4.5.1实验室根据需要，定期提交试剂申购单，并做到及时盘存清点，入库做****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页到心中有数。4.5.2所购试剂一律按试剂和耗材的SOP进行，并做到来源渠道正规，质量保证。4.5.3实验室对试剂库存定期检查，不使用过期变质的试剂。4.5.4自配试剂须经严格校正后方可使用。4.5.5试剂的保存应严格按照规定存放，确保有效期内能有效使用，杜绝浪费现象。4.5.6易燃易爆试剂应分开存放，远离火源和电源。4.5.7试剂外借一律须经负责人同意方可。5．本制度的变动程序：本制度的变动，可由任一使用该文件的工作人员向主管负责人提出，主管负责人则召集与本制度相关的所有人员进行讨论，根据讨论结果是否通过，如通过则公布实施。批准人****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表4年月日目缓冲区处在排风状态冰箱温度记录实验室紫外线照射30分钟更换新配制的消毒液清洁液配制10%84液擦洗75%乙醇清洁在有效期内在有效期内在有效期内在有效期内在有效期内在有效期内所用模板数量所用阳性对照所用阴性对照表4年月日目缓冲区处在排风状态冰箱温度记录实验室紫外线照射30分钟更换新配制的消毒液清洁液配制10%84液擦洗75%乙醇清洁在有效期内在有效期内在有效期内在有效期内在有效期内在有效期内所用模板数量所用阳性对照所用阴性对照****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1．目的：保证实验室具备开展该项实验的能力。2．适用范围：临床核酸扩增荧光检测实验人员。3．负责人：**4．内容：4.1人员要求：4.1.1由于PCR检测干扰因素较多，结果分析复杂。因此，PCR实验室工作人员应具备较广泛的分子生物知识。4.1.2PCR实验室工作人员应取得上岗培训合格证书，临床PCR检验过程须在具培训合格证书的技术人员监督指导下完成，检验报告须由具培训合格证书的技术人员审核签。4.1.3工作人员上岗前必须学习掌握PCR实验管理文件及要求，并由实验室主任核查。4.2人员配置：4.2.1根据卫生部临检中心对实验室人员的在求选择人员；4.2.2我科PCR实验室配备3名工作人员（PCR实验室工作人员一览见表4.2.3实验室主任负责实验室全面管理、解决技术疑难及与临床沟通、组织人员参加培训，室主任不在岗时，应指定代理人负责。4.2.3资深检验技师及青年技师负责实验室技术管理及临床标本的检验。4.3人员管理：a)严格遵守实验室内务规章制度；b)严格执行年度考核制度：1)日常工作质量的评价；2)室内质控的评测；3)室间质控的评测；4)年度考试；5)在日常抱怨工作中的应变能力。c)科年度奖励制度：1)参加室间质评优秀；2)年度在CN级刊物上在论文发表；****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页3)在本地刊物有多篇论文发表；4)考试成绩优秀；5)受到有关部门或群众特别嘉奖。d)科主任建立实验室工作人员业绩档案。4.4人员培训计划：4.4.1本室现有人员已参加安徽省临床检验中心基因扩增实验室人员培训班，并取得上岗证。见附件14.4.2自学及考核：室主任督促指导实验室人员通过继续教育或自学提高业务素质。工作人员根据自身情况，每年完成一篇学术论文、综述或经验总结提交室主任，室主任以此作为年度考核技术人员的一项依据。4.4.3室主任每年必须参加临床检验中心的PCR质控总结会议。4.4.4室成员每年至少有一个月脱产的理论和技能的学习。4.4.5经常同其它PCR室的同道进行理论和技术交流。4.4.6订阅与分子生物学及PCR技术有关的文献、杂志。4.4.7每年底对下一年的人员培训做出具体安排。4.4.8实验室主任对技术人员的技术档案每两年修正补充一次。5.该程序的变动程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：检验科主任、室技术负责人注:所引用表格:1.实验室工作人员一览表见表22.实验室工作人员档案记录见表5****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表5毕业学校及所学专业****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的保证环境良好，工作有序，结果可靠2范围PCR实验室及相关工作人员3操作人****4规章：4.1扩增及产物分析区（备区（PCR-Ⅰ）——标本制备区（PCR-Ⅱ）——PCR扩增及产物分析区（PCR-4.2每个实验区的门上有本区的标识及非本室人员不得进入字样。4.3每个实验区配有温度调控设备、温湿度计，可移动及固定紫外灯。4.4PCR扩增仪配有UPS多功能稳压电源。4.5工作人员在操作过程中严格遵守实验室内务管理，严格执行操作程序。4.6实验室人员进入本工作区时须穿该区具有标识专用工作服，同时配备其它保护性装备如手套、口罩、帽子、鞋套并遵守实验室的唯一流向制度。4.7严禁将本区的物品和工作服带离本区，以防扩增产物污染扩增前区。4.8在实验过程中使用过的废弃枪头等材料应立即浸泡于装有84消毒液的容器4.9标本盖子的开闭及移取应在超净台内进行，操作时应，关闭抽风机，操作时小心谨慎，防止液体外溅。4.10每天实验开始前，打开紫外灯及紫外消毒车照射30分钟。4.11工作结束后，对该区的工作台用84消毒液消毒30分钟后，再用该区专用的清洁干净的抹布用自来水擦拭两遍。对地面用该区专用的拖把用84消毒液消毒30分钟后，再用该区专用的拖把用自来水拖擦两遍。用紫外消毒车距实验台面和实验仪器30cm照射1小时，同时打开该区紫外消毒灯消毒1小时。批准人****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行2范围PCR实验室台面、地面及仪器、设备等3操作人****4规章：4.1实验室台面和地面清洁4.1.1每次实验结束后由专人负责并记录，各区的清洁工具不得混用。4.1.2实验台面选用84液擦拭;扩增区实验台面用75%的酒精清洁;实验室地面用先用10%的84液清洁，再用自来水清洁。4.1.3清洁完成后,按各区要求紫外线照射消毒。同时可移动扩增区紫外线灯照实验台30-60分钟。4.1.4实验操作过程中出现血液/痰液等不慎泄露至实验台面，应立即停止实验，用10%84液浸住污染区域，再用滤纸片覆盖可继续实验，30分钟左右后可用软布蘸10%84液溶液反复清洗，再用75%酒精擦拭；实验结束后用紫外线灯照30-60分钟。4.2高速离心机清洁4.2.1每次实验开始前，用75%的酒精擦拭离心的心机外表。4.2.2每次实验完毕后，先用10%84消毒液浸过的软布擦洗离心机的转头及内壁,再用洁净的湿布擦洗,待干后盖上机盖。4.2.3如果离心时及时发现离心管破裂，必须先停止实验，将有破裂管的离心管放入盛有10%84消毒液缸内，取备用离心管继续下一步操作。4.3超净工作台清洁4.3.1每次使用后用10%84消毒液擦拭工作台面，再用洁净的湿布擦洗。75%酒精棉球擦拭紫外灯；4.3.2每星期清洁净化工作台的周围环境，去除尘埃。4.3.3如果操作过程中出现液体不慎泄露，应立即停止实验，用10%84液浸住污****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页染区域，再用滤纸片覆盖可继续实验，30分钟左右后用软布蘸10%84消毒液溶液反复清洗，再用洁净的湿布擦洗，然后用75%酒精擦拭。4.4加样器清洁4.4.1每次实验结束后用75%的酒精擦拭。4.4.2当怀疑加样器有可能污染时在121C及1巴压力下消毒20分钟。各区的加04.5工作服清洁4.5.1每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验区的工作服隔天洗涤。4.5.2如在实验过程中疑有污染，立即用10%84液浸泡消毒。4.6扩增仪的清洁：见仪器的维护。4.7实验室空间消毒：实验结束及后续工作（如地面及仪器清洁）完成后，将固定紫外灯打开照射60分钟。5.本制度的变动程序：本制度的变动，可由任一使用该文件的工作人员向主管负责人提出，主管负责人则召集与本制度相关的所有人员进行讨论，根据讨论结果是否通过，如通过则公布实施。（注：实验室清洁消毒见表6）批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的保证PCR实验室的仪器设备得到妥善管理，控制在用仪器设备的工作状态2范围PCR实验室所有的仪器、设备3操作人****4操作：4.1仪器设备的管理，维护，保养等的具体事项由实验室设备管理人员负责执行；4.2由PCR实验室负责人负责组织执行和监督管理；5内容：5.1建档管理：仪器设备的档案管理应包括以下内容（实验室主要仪器设备相关文件一览表见表5.1.1仪器设备的一般情况：a)名称b)制造商，型号，序号c)d)目前存放地点，接受人员签字等。e)校准和检定的日期、结果及下次校准和检定的日期、结果。f)迄今为止所进行的维护及今后维护计划。5.1.2仪器设备的相关文件：仪器设备的说明书，操作手册等，有关文件（或复印件）的文件序号，名称，保存方式，管理负责人等。5.1.3仪器设备的损坏，故障，修理须作如下记录(相关表格见表7)：日期，设备名称，设备标记号，维修内容（损坏或故障的表现、损坏故障的5.1.4正常运转的仪器设备贴上绿色正常使用标识牌。有问题的仪器设备加贴明显的红色停用标识，标识上应有停用日期及原因；可搬动的仪器移至设备处报修，不可移动的设备原地使用布罩封存待修，直至修复校验后重新标识正常使用。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页5.1.5仪器设备的报废处理（报废申请表见表因使用寿命，损坏，故障导致仪器设备不能满足检测需要时，该设备即行报废。由管理人员填写报废申请，科质量负责人核实，设备科批准后由质量负责人在设备档案中签名注销。5.2仪器设备实行严格的分区专用。5.3使用的仪器设备应进行校准和检定，具体见SOP文件。5.4为保持仪器设备工作状态的稳定，应对其进行定期的、必要的维护和保养，具体见SOP文件。5.5为了使扩增仪处于稳定的工作状态，在该电脑上不得使用非本室的外来软盘，不能在电脑内加载其它程序和软件；在使用本室软盘进行资料备份时，需在报告系统电脑上预先杀毒方可使用。5.6非本室工作人员不得使用仪器。6该程序的变动程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：检验科主任、室技术负责人批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表7临床基因扩增检验实验室主要仪器设备相关文件一览表文件负备责人注明书√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√√原件√原件√原件√原件√原件√原件√原件√原件√原件Line-Gene扩增仪江阴市光学仪有限PCR扩公司增区17紫外线消毒车****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表8质量负责人签名放置地点****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表9备注****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页校准（）未修改1目的：确保Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪正确及正常使用。2适用范围：Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪。3操作人****4标准操作方法：4.1在打开电源以前，先确认以下内容：4.1.1确认电源线插头已插入电源插座中。4.1.2Line-Gene与计算机及电源的连接是否可靠。4.2．核酸扩增仪操作方法：4.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入“荧光定量PCR检测系统”界面；4.2.2模板制好后，按模拟模板反应孔的样式放入扩增仪反应槽，注意阴阳性、阳性标准品、质控品位置，标本不够用空白管填补；4.2.3打开PCR仪电源开关,预热5分钟；4.2.4点击“运行”键，打开“运行”文件中“达安”试剂程序；4.2.3点击工具栏中的“样本资料”按钮，输入样本资料，并清空缺省样本号；点击“确认”保存样本资料信息，保存的文件名为：年月日+批次（批次用a、b、c表示）如20030516a文件自动形成后缀名为*.flr4.2.44.2.5检测结果分析：a.程序运行结束后，系统自动进入分析界面并将检测结果自动保存，在荧光定量PCR检测系统界面单击“数据分析”键，进入结果分析界面。b.定量分析：1）单击“分析模式”菜单中的“定量分析”命令，在分析方法选择中可选择样点拟合法。2）样点数选择：样点为循环数/荧光强度对数曲线中基线以上各循环的点，****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页系统根据选择的样点数，将被选中的样点拟合成直线，该直线与域值的交叉点即为CT的起始循环至终止循环荧光强度的平均值为零点设置时尽可能选择样本荧光强度稳定（用“达安”试剂在Line-Gene荧光定量扩增仪对标本及控制品4）检测，通常起始及终止为在各样本噪声的上方并尽可能的底，对同一种试剂在各个实验的结果分析时基线设置尽可能相同。同一实验结果分析，基线设置不同CT值不同。的截距控制在42±2、斜率控制在-2.7±0.2、相关系数小于-0.98。设置完成后界面显示分析结果。（在每进一批试剂的时候，用本批试剂测定上一批稳定的试剂已测定过的控制品及阴阳对照，根据上批试剂测定的结果求出本批试剂在这种结果下本室其它人员判断结果，这些参数必须控制在此范围，这样结果判断在本室才具一致性。每进购一批试剂后，在SOP文件中，这些参数也需调4.3分析结果打印。4.4Line-Gene基因扩增仪使用过后要及时记录（Line-Gene基因扩增仪的使用记录见表9）5维护方法及注意事项：5.1PCR仪属于精密电子仪器，应放在水平台上，PCR仪在运行的时候，室温应当控制在15℃至25℃之间，温度过高或过低均会引起内部的程控芯片或其它电子元件的不正常工作。5.2PCR仪配有单独使用的ups稳压电源。PCR仪不能靠近水池、火炉、腐蚀性物质、强磁场等，均会影响仪器正常工作。5.3每次实验时，最好能将扩增仪的孔位全部放置样品管，若样品管少时可用空的样品管代替，以保证实验田的一致性和重复性。5.4实验结束后应及时擦干孔内存在的水份，盖上机盖。5.5本仪器表面如有污迹，可用软布沾清洁膏擦拭干净。5.6每周五清洗样品槽一次。方法是用棉棒沾75%的乙醇清洗若干次，以有灰尘****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页或其它残留物影响扩增效果。5.7每月末清洁热盖和反应孔。具体方法是：正常关机后，将反应槽取出，将热盖翻开，用浸透95%酒精棉棒擦拭反应孔和热盖，待乙醇挥发后再将热盖和反应槽安装好，热盖恢复原位。5.8荧光定量PCR检测系统软件的维护：5.8.1安装荧光定量PCR检测系统软件计算机进入Window98/2000/XP系统后，将荧光定量PCR检测系统安装光盘放入光驱,找到光盘根目录下的SETUP.EXE双击它，进入设置程序荧光定量PCR检测系统。据屏幕提示进行操作即可完成荧光定量PCR检测系统软件的安装。5.8.2卸载荧光定量PCR检测系统软件：在【开始】/【设置】/【控置面板】菜单中单击“添加删除程序”项，选择“荧光定量PCRPCR检测系统.5.9Line-Gene基因扩增仪的维护保养后要及时记录（Line-Gene基因扩增仪的维护保养记录见表6校准：Line-Gene基因扩增仪校准工作需由专业工程师进行。除与仪器厂家达成协议以外，以实验判断仪器校准状态也可为何时进行仪器校准提供信息。通过对室内质控图的分析，及时发现系统误差的出现。经过分析排除了试剂和人员误差后，应进行仪器状态校验实验：6.1使用标准化试剂作为校验试剂。6.2在仪器处于校准状态下，由固定人员用标准化试剂对10、10、10、10、4236标准品进行扩增实验。该实验在两个月应进行20次。分别计算标准曲线的斜率、截距、相关性的控制限。6.3每年6月、12月由固定人员进行上述实验，观察标准曲线的三个参数是否处在控制范围和10标准品是否检出。26.4当10标准品未检出、标准曲线的三个参数控制超出控制范围或仅出现后2者时，先排除实验人员、试剂因素，再重复实验。如结果依然，联系厂家立即进行仪器校准。6.5当仅有10标准品未检出时，检查实验全过程。再次上机检测10标准品22两枚。如仍未检出，则联系厂家进行仪器校准。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页6.6仪器经过校准后，重复该实验。结果归入仪器档案。6.7本程序的变动程序：本程序的变动，可由任一使用该文件的工作人员向主管负责人提出，主管负责人则召集与本制度相关的所有人员进行讨论，根据讨论结果是否通过，如通过则公布实施。附：Line-GenePCR扩增仪文件的创建：1.检测文件的创建：1.1在荧光定量PCR检测系统界面单击“运行”键，进入程序设置界面。单击1.2按1.3样本信息输入：扭。框内选择属性或性别。位”栏输入：单击浓度单位的下拉键在下拉框内选择浓度单位，缺省项为“copyies/ml”。栏的输入：选中该栏中某输入内容，单击“缺省样本列表”键，名称栏自动按1、2、3……33名称设置，其余栏全部清空。行，该行自动形成比上一行大一个值的号码，也可修改。的内容，也可修改。出自动形成上一行的内容，也可单击该行重新选择。显示当天日期，按Enter键输入该日期，或点击对话框左边的下拉键弹出日历界面，选择需输入的日期按Enter键输入，点击下一行（无输入内空****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页9）样本信息内容在打印报表时将会打印（打印时类型、样本编号、编号、姓名、年龄、性别、住院号、门诊号、病历号、临床医师、送检科室、临床诊断、采样时间最多可选取10以缺省打印。1.4样本输入模板：单击“编辑”菜单中的“样本输入模板”命令。在样本输入模板中添加送检科室、临床医生内容。在样本信息输入时，送检科室、临床医师项的输入可选择样本输入模板中已添加的送检科室、临床医师内容。1.5设置检测通道、荧光强度增益：选择Ｆ1通道，增益值须根据不同的试剂进行设置，定量分析，荧光强度初试值调整在70左右。1.6实验参数设置:1)“下移”键可对选中的程序进行编辑。2)选择分析模式：单击插入键，在弹出的显示框内设置各参数，最多可插入六个。分析模式选择定量分析时，单击采样模式栏的下拉键在弹出的下拉3)设置循环数。1.7保存程序设置文件：单击“文件”采单中的保存命令；如果要保存在另一个文件夹中，请找到并打开该文件夹，在“文件名”框中，键入文件名称，单击“保存”按扭。2.运行程序设置文件：2.1运行程序设置文件:单击“运行”菜单中的“运行设置程序组”命令；单击工具栏中的“运行”按钮。2.2保存检测结果：运行程序设置文件时弹出检测结果保存对话框，如果要保存在另一个文件夹中，请找到或新建文件夹并打开该文件夹，在“文件名”框中，键入文件名称，单击“保存”按扭。保存的文件名为程序设置文件名+日期+时间，其文件名的后缀为*.flr2.3检测结果保存设置完后，弹出运行界面，系统进行样本位置检测并弹出样本位置检测对话框。样本位置检测完成后系统运行已设置的程序。3.检测结果分析：3.1程序运行结束后，系统自动进入分析界面并将检测结果自动保存，在荧光定量PCR检测系统界面单击“数据分析”键，进入结果分析界面。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页3.2定量分析：1)单击“分析模式”菜单中的“定量分析”命令，在分析方法选择中可选择最大二阶倒数法或样点拟合法。2)样点数选择：样点为循环数/荧光强度对数曲线中基线以上各循环的点，系统根据选择的样点数，将被选中的样点拟合成直线，该直线与域值的交叉点即为CT3)a)自动调整：以第一至第十循环荧光强度的平均值为零点。b）手动调整：以设置的起始循环至终止循环荧光强度的平均值为零点设置时尽可能选择样本荧光强度稳一种试剂在各个实验的结果分析时基线设置尽可能相同。同一实验结果分析，基线置不同CT值不同。4)数，设置完成后界面显示分析结果.4.分析结果打印4.1单击“文件”菜单中的“设置打印模板”命令，在弹出的对话框内进行设4.2“删除”项的排列顺序。样本类型、样本编号、编号、姓名、性别、住院号、门诊号、临床医师、送检科室、临床诊断、采样时间等所需项目。4.3在打印栏内，选择参考浓度、参考CT值选项并输入数值，打印时显示参考标准。4.4在打印栏内,输入最大浓度、最小浓度、打印时当某一样本计算浓度大于最大浓度或小于最小浓度将显示≥最大浓度或≤最小浓度值。4.5在打印选项栏内,选中结果判断、打应曲线、计算浓度、CT值后在打印报表内容中将显示结果判断、荧光强度/循环数曲线、计算浓度、CT值。4.6在打印选项栏内,设置每项打印两个样本时选中打印注释选项可打印注释对话框内输入的内容。4.7打印模板设置完成后按“确定”键，保存设置。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页4.8单击“文件”菜单中的“打印报表”命令,在弹出的对话框内进行设置,单击“确定”即可打印。批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表10临床基因扩增检验实验室Roche480II实时荧光定量PCR仪使用记录检测项目运行情况使用人签字****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表11临床基因扩增检验实验室Roche480II实时荧光定量PCR仪扩增仪维护保养记录保养人室质量负责签名人检查签名****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的：正确使用移液器，确保移液器的精确性。2适用范围：各种品牌、型号的固定、可调式和多通道加样器。3操作人：****4操作：4.1设定容量值：a)根据所需取液量选择相应的加样器；可调式加样器应在允许的范围内调节；连续可调式加样器容量读数由三位拨号数字组成（显示所转移液体容刻度可将容量调节到更精确度的分度。b)各种不同的型号，F至FFFF4.2吸液和放液：首先选择一支合适的吸嘴安放在加样器套筒上。稍加扭转压紧吸头使之与套筒间无空气间隙。未装吸头的加样器绝不可用来吸取任何液体。最常用的吸液和放液方式有两种。4.2.1前进式：a)吸液：把按扭压至第一点；垂直握持加样器,使吸头浸入液样中，浸入液面深度视加样器型而定：F和FF和F2—3mm2—4mm然后缓慢、平稳地松开按钮吸入液样，待移液器吸满液体后等一秒钟，然后将吸头提离液面，贴壁停留2-3秒，使管尖外侧的液滴滑落。b)放液:将吸头口贴到容器内壁并保持10°～40°倾斜。平稳地把按钮压到****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页c)第一停点,放出液体，等1-2秒钟后再把按钮压到第二停点以排出剩余液体。压住按钮,停顿1-2秒，提起加样器,使吸头贴容器壁擦过。松开按钮。按吸头弹射器除去吸头(只有改用不同的液体时才需更换吸嘴)。d)此种加样方式适合加样本时使用。4.2.2倒退式a)吸液：把按扭压至第二点；垂直握持加样器,使吸头浸入液液样中,然后缓慢平稳地松开按钮吸入液样，吸满液体后，将吸头撤出液面，贴壁停留2-3秒，使管尖滴滑落。b)放液:将吸头口贴到容器内壁并保持10°～40°倾斜。平稳地把按钮压到第一停点,放出液体。遗留在管嘴尖的液体随吸嘴一起扔掉或按至第二点压回到原来液体管中。c)此种方式适用于高粘度液体；易起泡沫的液体或极小量的液体。4.3预洗a)当取液体积大于10ul时，为了保证吸液的精确度和准确性，在装上一个新吸嘴（或改变吸取的容量值）后应预洗吸嘴，即先吸入一次液样并将之排回原容器中，反复2-3次。这是因为第一次吸取的液体会在吸嘴内壁形成液膜，导致计量误差。而同一吸嘴在连续操作时液膜相对保持不变，故第二次吸液时误差即可消除。b)而当液体体积小于10ul，只有在没有预洗，同时要将吸取的液体在要转入的液体中反复吸打几次，排空液体，再将吸嘴提出并贴壁停留1-2秒，才能保证取液的精确度和准确性。4.4致密及粘稠液体对于密度低于水的液体，可将容量计的读数调到低于所需值来进行补偿。例如：用F加样器转移10ul血清。先将读数调到10ul，吸取后以重量40法测定。如实测体积为9.5ul，即偏差0.5ul，则将读数调到10.5ul并重复一次。如第二次仍不够准确，根据偏差再作调整。吸取或排放血清或粘稠液体时，宜在第一点多等一两秒钟再压到第二点。4.5加样器吸头加样的准确性与精密度与加样器的吸嘴的质量也密切相关，吸嘴的选择也至关重要。基因扩增实验因为要使用大量的吸嘴，并有许多微量操作，因此在选择时应注意以下几点：****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页b)形状（密封良好的环口、薄壁和嘴口尖细）使安装或卸脱更加容易、管壁有弹性、不会产生漩涡，从而精度更高。c)嘴口决无毛刺。吸嘴表面光洁平滑，沾湿性极小，避免液体留外壁引起的误差。e)每个嘴口上都有模具编号，确保品质跟踪系统。f)吸嘴与吸嘴套筒密封完好，防止空气泄漏造成精度或准确度的误差。g)有液体容量刻度线。D200吸嘴在20和100ul处标出、D1000吸嘴在300ul处标出、D10吸嘴在2ul处标出，这样吸液量不够可以及时发现。h)可在121C及1巴压下消毒20分钟。0i)应选用带虑芯的吸头，以避免样品与样品、样品与加样器或样品与操作人员的污染。4.6故障排除a)发现漏气或计量不准，其可能原因和解决方法为：套筒松动？用手拧紧螺帽。套筒括花或破裂？卸下弹射器，检查套筒。活塞或密封受化学腐蚀？更换活塞或密封圈。用蒸馏水洗涤套内壁。b)发现套筒内有液体可依下法清洁：卸下弹射器，拧下螺帽并用蒸馏水洗涤套筒、活塞、密封圈及0形环，待完全干燥后重新组装。c)需要时，雷勃加样器的吸管部分及套筒、螺帽和弹射器在121C及1巴压0力下消毒20分钟。注意密封圈及0形环不能高温消毒。d)发现吸液时有气泡：先将液体排回原容器，检查吸嘴浸入是否合适，再更慢地吸取液体；如仍有气泡应更换吸嘴。4.7凡是更换了活塞或操纵杆的加样器需进行全面调校。4.8加样器使用注意事项：a)根据所需取液量选择相应的移液器及吸嘴，基因扩增实验要求使用带虑心的吸嘴，防止污染。b)取液时应缓慢匀速吸取，避免液体浅到移液器头上；打出液体后拇指不应松开按钮，将吸嘴压掉后再将拇指松开，避免液体回吸。c)调整取液量的按钮时，不要用力过猛，并应注意计数器显示的数值不要超过其可调范围。d)连续可调移液器在取样加样过中应注意移液嘴不能触及其它物品，以免被污染。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页e)连续可调移液器在使用完毕后应置于移液器架上，远离潮湿及腐蚀性物品。连续可调移液器不可在无吸嘴时使用，吸嘴有液体时不能平放或倒置。f)在取液之前，所取液体应在室温（15-25C）平衡；液体温度与室温有异0时，将吸嘴预洗多次再用；移液温度不得超过70C。0g)操作时要慢和稳，吸嘴浸入液体深度要合适，吸液过程尽量保持不变；改吸不同的液体、样本或试剂前要更换新吸嘴；发现吸嘴内有残液时必须更换；新吸嘴使用前应先预洗。h)为防止液体进入移液器套筒内，应注意以下几点：压放按钮时保持平稳；移液器不得倒转；吸嘴有液体时不得平放。i)切勿用油脂等润滑活塞或密封圈。j)不可把容量调到超过其适用范围。k)使用了酸或有腐蚀性蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸馏水清洗活塞及密封圈。4.9加样器的维护a)每天实验完毕后用75%酒精清洁。b)如有液体进入加样器内造成污染，可以将加样器拆开后进行清洁。c)各区加样器具有各区的标识，清洁时分别对待。4.10本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的：保证移液器加量的准确性。2适用范围：各种品牌、型号的固定、可调式和多通道加样器。3操作人**4校准管理程序：4.1使用全自动PCR实时扩增仪，三区、四区合并，第三区可调式加样器转为备用状。4.2每年由本室工作人员分批对可调式加样器打包，运至生产厂家进行校正。4.3每年的四月份对试剂贮存和准备区的加样器进行校正，同时把备用加样器换上试剂贮存和准备区的区域标识，把剂贮存和准备区贴上待校正标识，打包，邮递、托运或专门派人送交及运送日期，在实验室日志上要注明清楚。4.4加样器校正完毕取回后，贴上正常运行标识，并注明本次校正日期、下次校正日期。4.5把备用加样器去掉试剂贮存和准备区标识，消毒，再转入备用状态。4.6每年的八月份对标本制备区的加样器进行校正，步骤同上。4.7每年的十二月份对备用加样器进行校正，步骤同上。4.8本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的：保证温度计及湿温度计对环境温度衡量的准确性。2适用范围：常规温度计、低温温度计、湿温度计3操作人**4校准管理程序：4.1常规温度计、低温温度计校正：a)本室工作人员取同其它温度计规格相同的常规温度计、低温温度计各一支，送到当地计量部门进行校正，并保存好校正记录和校正温度计的编号。b)温度计自我标定：用已校正过的温度计及未校正的温度计在同一温度条件下，对同一温度的刻度显示来进行校正，标定。4.2湿温度计校正：a)本室工作人员取同其它温度计规格相同的湿温度计一支，送到当地计量部门进行校正，并保存好校正记录和校正温度计的编号。b)湿温度计自我标定：用已校正过的湿温度计及未校正的湿温度计在同一环境温度条件下，对同一温度湿度的刻度显示来进行校正，标定。4.3标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的：保证离心机的正常使用。2适用范围：各种品牌、型号的高速离心机。3操作人****4操作4.1使用方法：4.1.1高速离心机a)离心机应放在水平坚固的地板或平台上，并力求使仪器处于水平位置以免离心时造成仪器振荡。b)打开电源开关，将预先平衡好的样品对称放置于转头的样品架上，关闭机盖。c)旋动定时旋钮设定离心时间，缓慢旋转转速调节旋钮使仪器转速达到预定的要求。d)离心完毕后，将转速调节旋钮调回零位，关闭电源开关。e)待离心机停止转动时打开机盖，取出离心样品，再次关闭机盖结束离心。4.2校准：每年6月、12月请本单位专业设备科专业人员对该类仪器进行定期检修校准。5使用时的注意事项：5.1离心机应始终处于水平位置，外接电源系统的电源要匹配，并要有良好的接地线;开机前应检查机腔内有无异物掉入。5.2样品应预先平衡，使用离心机微量离心时离心套管与样品应同时平衡;使用离5.3挥发性或腐蚀性液体离心时应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏，以免侵蚀机腔或造成事故。5.4离心机运行时，离心机周围30cm范围内不得有人与危险物品。5.5每次操作完毕，应做好使用情况记录，每年6月、12月请本单位设备科专业人员对仪器各项性能进行检修。5.6离心过程中如发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术员检修。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页5.7每年6月、12月视使用频率而由设备科专业人员行清洁机腔和转头。5.8离心机的维护：一般清洁见实验室清洁程序中的高速离心机的清洁；离心及转子的清洁下，再用中性去污剂（75%的异丙醇/水混合物/或乙醇去污染）清洁离心室；离心室内的橡胶密封圈经去污剂处理后用水冲洗，再用甘油润滑。5.9离心机的转速用相对离心力表示。离心机转速与相对离心力（RCF）换算公式如下：N=（RCF×105）/（1.18×R）RCF=0.011238095×R×NN表示转速，单位为转/分(r/min)；R表示离心半径，即离心管底端至轴心的距离，单位为厘米(cm)；RCF表示相对离心力，单位用重力加速度g(g=9.8m/s)；注：所引表格：离心机使用情况记录见表12离心机维护保养记录见表135.10本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表12离心机使用情况记录表****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表维护保养内容室质量负责人检查签名日期仪器放置地点运行标识清洁仪器性能状态意外情况记录****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的：保证超净工作台内的高清洁，无污染。2适用范围：医用超净工作台3操作人****4使用方法4.1接通电源，打开电源开关。4.2超净工作台使用时必须预先用紫外线消毒至少30分钟。4.3消毒及工作期间严禁打开风机，始终保持工作台内“死屏”即无空气对流效果。4.4每次使用后，即刻以消毒液洗擦工作台面后，再用洁净的湿布擦洗，然后以75%酒精擦洗；紫外线灯消毒30分钟后关机。4.5经常用纱布沾上酒精将紫外线灯杀菌表面揩擦干净，保持表面整洁，以免影响紫外线灯消毒效果。紫外线灯按规定交医院统一检测。4.6定期将预过滤器中的滤料拆下清洗，一般间隔时间为3～6个月。4.7定期（一般每半年1次）计测工作区风速，如发现不符合技术参数要求，则可调大风机供电电压。当风机组电压调到最大时，工作区风速仍达不到4.8本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页）1目的：保证水浴箱工作温度恒定。2适用范围：电热恒温水浴箱3操作人：****4电热恒温水浴箱的操作：4.1水浴箱应置于坚固的平台上。4.2电源接地，在首次插入电源插头将仪器通电以前应先确认以下内容：4.2.1电源是否与仪器要求的电压相符合。4.2.2确认电源插头已插入电源插座中。4.3在水浴箱内注入清洁温水至总高度的1/2～2/3处。4.4合上水浴箱盖，打开电源开关，待水沸腾后，放入需裂解的Ependoff管，计时，到时间后取出继续其它操作。4.5每次水浴箱使用前，应做温度稳定性校正：放入标准温度计同监测实际水温，连续监测10分钟，水浴箱工作温度应在±1℃以内。水浴箱挂有温度质量控制表，记录每天温度；如有温度超出范围，该温度应划上红圈，并把修正操作记录下来。4.6注意事项：在操作过程中应注意Ependoff管盖是否崩开，以防止样品损失及污染到水浴箱中。4.7水浴箱内外应保持清洁，外壳忌用腐蚀性溶液擦拭。5、电热恒温水浴箱温度的校准5.1．校准依据：温度计测量校准法，显示温度观察法。5.2校准环境及用具：5.2.1校准环境：仪器的正常工作条件。5.2.2校准用具：经校准的温度计。5.2.3设置温度：以该水浴箱使用温度作为校准的设定温度。5.3校准方法：5.3.1温度波动性校准：采用显示温度连续观察法，连续10次观察水浴箱在设置温度下的显示温度波动，每隔20秒记录一次显示温度。接受标准为：记录的显示温度值在10分钟内其波动范围≤±0.5℃。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页5.3.2温度准确性校准：比较水浴箱中实测温度与显示温度的偏差，按温度误差修正方法（见水浴箱使用说明书）来调整仪器。5.3.3温度均匀性校准：以水浴箱左上角，左下角，正中点，右上角，右下角五点的实测温度进行比较，观察温度均匀性。5.4．校准步骤：5.4.1使水浴箱在设置的温度恒温30分钟使其稳定。5.4.2在水浴箱左上角，左下角，正中点，右上角，右下角五点分别放入已加入0.5ml石蜡油的Ependoff管。5.4.3把温度计放入Ependoff管中测量温度。5.4.4连续观察记录水浴箱的显示温度在设置温度的波动情况10分钟。5.4.5比较记录的显示温度数据，若数据在接受标准内，则认为该水浴箱温度波动性合格，继续下列校准。5.4.5若记录数据不在接受标准内，则停止校准，停用，报修。5.6记录水浴箱中的实测温度。5.4.7比较显示温度值与实测温度，若二者一致，该仪器无温度误差，继续下列校准。5.4.8若显示温度与实测温度不一致，则按温度误差修正方法校准仪器，并重复测定，待其一致后，继续下列校准。5.4.9分别测量水浴箱左上角，左下角，正中点，右上角，右下角五点的度并记录。5.4.10比较水浴箱边四角与中间的实测温度，若偏差≤±1℃，则认为该水浴箱温度均匀性合格，校准完毕。5.4.11若水浴箱周边四角与中间的实测温度﹥±1℃，停用，报修。5.4.12校准记录见表145.5本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。起草人批准人生效日期年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表℃℃℃波动性是否合乎要求审核人(℃)注：校准日期一到，在进行校准时用钢笔填写当日日期。完成后，在下一栏用铅笔填上预定下次校准日期。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页）1目的：保证待处理的样品完全混匀。2适用振荡器范围：XW——80A旋涡振荡器。3操作人：×××××××××4标准操作：4.1旋涡振荡器应置于坚固的平台上。4.2接通电源。4.3将样品管垂直或略为倾斜地放置在振荡盘上，开机振荡数秒或数分钟直至样品完全混匀后关机。4.4切忌将样品管平躺或倒转振荡，以免管内液体渗出。4.5保持振荡器清洁、干燥。4.6本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页）1目的：确保冰箱内温度恒定（冷藏室：0～10℃，冷冻室：-202适用范围：各种品牌、型号的冰箱、低温冰箱。3操作人：****4操作：4.1冰箱应放置于水平地面并留有一定的散热空间。4.2外接电源电压必须匹配，并要求有良好的接地线。4.3冰箱内禁止存放与实验室无关的物品。4.4放入冰箱内的所有试剂、样品、质控品等必须密封保存。4.5保持冰箱出水口通畅；非自动除霜冰箱应定期除霜；定期清洁冰箱，清洁时切断电源，用软布蘸水擦拭冰箱内外，必要时可用中性洗涤剂。4.6每日由专人负责观察冰箱内温度并记录于表中，记录表挂于门上，每月一张，一年装订成册存档（冰箱温度记录表见表154.7若温度超出规定范围，调节温控器使其回到正常范围，并进行记录。4.8若温控调节无效，报请设备科维修，修理后须验收签字后方可正常使用。4.9本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表１5冰箱温度记录表年月日至日区记录人日期123456789987654321冷藏室0℃0℃冷-1-2-3冻室-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-17-18-19-20-21-22-23-24-25-26-27-28-29-30****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页）1目的：保证可移动紫外灯的正常使用。2适用范围：Ⅰ3操作人****4步骤：4.1使用前进行通电实验，检查是否有漏电现象，电源接地。用毕后将开关切断，拔掉插头。4.2本仪器不能在易燃易爆的体环境中使用，放置于无腐蚀性气体和通风良好的室内4.3每周五用干布擦干外壳和灯管，以保持清洁光亮。经常用酒精进行消毒、灭菌，特别是电源开关等触摸部位，以防交叉传染。4.4紫外线灯波长要定期由医院统一检测。4.5本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页）1目的：保证故障的仪器明显区别于正常仪器，而不被错误使用。2适用范围：核酸扩增荧光检测实验室的各种仪器。3操作人****4步骤：4.1找到出现故障的仪器。4.2用红牌故障标志标示故障仪器。4.3小型仪器送仪器部门维修。4.4大型贵重仪器关闭电源开关，取下电源插头。用相应防尘罩遮蔽仪器。4.5维修完成后取下红色故障标志，换上黄色标识牌。4.6调整实验通过，去掉未校准标识牌，换上绿色标识牌。4.7仪器重新正常使用。4.8本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页）1．目的：在实际操作中，仪器设备发生故障是不可避免的。为在最大程度上减轻类似情况所带来的不利影响，特制定本程序。2．范围：与PCR检测、试剂存储、污染预防等有关的设备。3．操作人：****4操作：4.1每一个工作人员在职责范围内均有责任有意识地注意以求及时发现并报告仪器设备的异常情况。4.2室主任负责启动本程序。4.3作为应急处理，潜藏着一定的可能影响检测质量的不确定因素。室主任有责任组织并直接监督本程序的实施。4.4室主任负责在第一时间检查核实应急措施的有效性。5．工作流程：5.1室主任接到异常情况报警后，立即现场确认异常情况的性质：观察有误、误操作、偶发现象或确属不能立即排除的故障。5.2对于发生故障的仪器设备，在联系有关部门维修的同时，采取以下处理办法。5.2.1有满足要求的替用设备，启用替用设备。5.2.2可借用其他部门仪器设备时，及时联系借用并核实该设备的使用状态。5.2.2及时与供应方会同解决。5.2.2.1根据双方合同约定，及时通知供应方。供应方技术人员将在规定的时间内随身携带备用设备到达现场。5.2.2.2在经必要的验收工作后，启用备用设备。5.2.3替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时，必须同时满足实验室管理措施（特别是防污染）的要求。5.3室主任须检查并随时跟踪所采取措施的有效性。5.4仪器设备故障处理见表16。5.5本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页）1目的：确保标本收集正确和采集时间合适；确保样品检测准确、有效。2适用范围：血浆/清、分泌物、痰液、胸/腹水、脑脊液和尿液的采集。3操作人：****临床专业医生及护士4操作：4.1血清/浆标本：用无菌注射器抽取受检者的静脉血2ml，注入PCR专用试管中，尽快在2小时内分离血清/血浆后转入另一1.5mlEppendoff管。如用血浆标本，预先加入EDTA-Na、枸橼酸钠抗凝。24.2分泌物：a)男性：取尿道分分泌物或细小棉拭子伸入到尿道约2～4厘米，略捻拭子取b)女性：阴道——用无菌棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内停留5送检。c)尿道——用无菌棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米处，4.3痰液：用一次性痰盒取受检者肺深部咳出痰液1～3毫升，密闭送检。4.4胸/腹水、脑脊液：用无菌注射器抽取胸/腹水或脑脊液后，注入PCR专用试管密闭送检。4.5尿液：直接取中段晨尿入PCR专用试管密闭送检。4.6本程序用于对临床标本采集及收集有关人员的培训，临床标本采集及收集有关人员要掌握本程序。4.7本标准操作程序的变动程序：可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室技术负责人，检验科主任。批准人****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页）1目的：保证所收集的标本符合实验要求，保证标本的保存质量。2适用范围：核酸扩增荧光检测实验室的现行项目：HBV。3操作人：****4验收、保存程序：4.1验收步骤：4.1.1签收：严格对各类标本执行查对和双签制度，不符合要求的标本一律退回，并记录登记。4.1.2分类验证：4.1.2.1住院部、门诊及院外病人的标本用未加抗凝剂的一次性真空负压管由临床护士或专业人员按操作规程采集。4.1.2.2标本的运送：住院及门诊病人的标本，采集后2小时内由专人送至PCR实验室；院外病人的标本，须用加有冰块的容器在采集后2小时内由专人运送。4.1.2.3查对姓名，联号，住院号，病区床号，项目等。对不符合要求的者应作记录，并及时通知采样科室，正确及时地补采样，以免延误病人的检测报告。姓名，住院号，性别，年龄，病区床号，检验项目等。4.1.2.4按检测项目验证标本：HBV所需标本类型为未溶血的血清或血浆，注意血浆标本所用的抗凝剂，一般用EDTA-Na或枸橼酸钠抗凝，不可有用肝素。标本为全血时及时分离2出血浆保存。4.1.3符合拒检的不合格病人标本的范围：标本的处理：标本收到后，立即分离血清并分装到两只离心管内，一份用****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页于检测，另一份用于标本的保存。4.1.4拒检程序：a)对拒检的不合格的标本应登记在不合格标本处置记录本上。b)填写不合格标本处置单，并随同申请单送返送检单位。c)必要时电话告知相关科室医生或护士。4.2标本的保存：HBV标本：血标本可在4℃下短期保存，分离出的血清或血浆保存于-15℃下。4．PCR实验室应有专人专门保存检测标本的冰箱并加锁，确保标本的真实性及初、复检的一致性。4.3特殊标本的处理：对暂不检测的项目和规定时间外收到的零散标本，要随时登记和正确保管，以免漏检、遗失和延误检验。对特殊样本或特殊病人的样本，实行“首接”负责制，所谓特殊样本是指难于采集的样本。无论哪位工作人员一旦收到标本后，均须负其责任，不得以任何借口推诿，及时、正确保管和转送样要到有关科室或有关人员，同时作交班记录和双签名。对于做长期病情动态观察的病人标本一律置于-70℃下长期保存备用。4.4所引用的表格如下：a)可接收标本记录表见表17b)拒收标本记录表见表18c)标本保存记录表见19批准人年月日****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表收记录（****医院临床基因扩增实验室）接收人患者姓名（签名）****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页表拒收标本记录表（****医院临床基因扩增实验室）送检人患者姓名性别年龄科别（签名）（签名）****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页标本保存记录表19标本保存记录标本唯一编号备注至至至至标本保存记录标本唯一编号备注标本唯一编号备注标本唯一编号备注****医院临床基因扩增实验室-103-****医院临床检验中心SOP文件第页共页1目的：保证样品编号的一致性，也是准确发报告单的基础。2适用范围：核酸扩增荧光检测实验室的现行项目：HBV。3操作人：****4操作：4.1标本唯一标识的规章:a)标本的唯一性标识须字迹清晰明了，不得随意作任何涂改；必须时，在旧标识上划双线更改，更改后应保持旧标识可辩识；操作人员在更改处必需签名。b)标本的唯一性标识由三部分构成——标本接收日期、检测项目类型、化验单接收顺序号，三部分无间隔符号。4.2编号基本原则(三点):a)按标本接收日期标记：如2003年6月15日，则接收标本的编号开始为030615。b)按检测项目类型分类标记：根据检测项目的不同，每种检测项目对应为唯一的一种代号。如乙型肝炎病毒标记为HBV。c)按化验单接收顺序号编号：在同种类型的化验单中，按化验单的顺序编号。序号为01～99。如第一个检测乙型肝炎病毒的化验单编为01，第二个检测乙型肝炎病毒的化验单编为02,第三个检测乙型肝炎病毒的化验单编为HBV03等。例如：03年06月15日HBV01，项目类型序号标本编号为030615HBV01(整个标识共有11位)4.3编号步骤：a)先统计所有当天送来的标本，根据编号的基本原则，按类型、按顺序给当天的标本编好号，每个样本的每个检测项目对应一个唯一的编号。b)用记号笔在每一张化验单和对应的样本管上做