植物叶绿体色素含量的测定

植物叶绿体色素含量的测定第一页，共十六页，编辑于2023年，星期三高等植物叶绿体色素叶绿素类胡萝卜叶黄素---C40H56O胡萝卜素---C40H56叶绿素b---C55H70O6N4Mg叶绿素a---C55H72O5N4Mg第二页，共十六页，编辑于2023年，星期三叶绿素吸收光谱：第三页，共十六页，编辑于2023年，星期三最大吸收区域在蓝紫光部分（400-500nm），基本上不吸收黄光，从而呈现黄色。

类胡萝卜素吸收光谱：第四页，共十六页，编辑于2023年，星期三红光区蓝光区第五页，共十六页，编辑于2023年，星期三叶绿体色素提取液中各色素的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的重叠，在不分离的情况下同时测定叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的浓度，可分别测定在663nm、645nm（分别是叶绿素a和叶绿素b在红光区的吸收峰）和475nm的光吸收，然后根据Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的浓度。A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.75Ca+45.60Cb（2）第六页，共十六页，编辑于2023年，星期三将上式整理，可以得到下式：Ca=13.95A665-6.88A649Cb=24.96A649–7.32A665CT=Ca+Cb=18.08A649-6.63A665

CX.C=(1000A470-2.05Ca-114Cb)/245第七页，共十六页，编辑于2023年，星期三叶绿体色素，不溶于水，易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。同时，叶绿体色素在植物细胞内是以色素蛋白复合体的结构存在的。故通常用80%的丙酮或95%乙醇提取叶绿素。叶绿体色素的提取第八页，共十六页，编辑于2023年，星期三

为什么要用含有水的有机溶剂提取叶片中的叶绿素？

这是因为叶绿素分子结构的“头部”是亲水的，与蛋白质结合很牢，需要经过水溶解作用才可被提取出来。第九页，共十六页，编辑于2023年，星期三

实验步骤

1．取2种新鲜玉米（完全/缺素）叶片，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。

2．各称取0.2g，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2ml95％乙醇，研成匀浆，再加少量95%乙醇，多次研磨至组织发白，静置片刻。加入少量碳酸钙；弱光下研磨，速度要快第十页，共十六页，编辑于2023年，星期三实验步骤

3．取滤纸1张，置漏斗中，用95%乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml容量瓶中，用少量95%乙醇冲洗研钵和研棒数次，将液体全部倒入漏斗中。

4．用滴管吸取95%乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用95%乙醇定容至25ml，摇匀。残渣中的色素要充分洗脱！第十一页，共十六页，编辑于2023年，星期三

实验步骤

5．把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm和470nm下测定吸光度。完全缺素A470A649A665过滤的比色液不能混浊第十二页，共十六页，编辑于2023年，星期三

95%乙醇提取液中色素计算公式：①

Ca=13.95A665-6.88A649②

Cb=24.96A649–7.32A665

CT=Ca+Cb=18.08A649-6.63A665③

CX.C=(1000A470-2.05Ca-114Cb)/245

以上是求出叶绿素总浓度，mg.L-1

第十三页，共十六页，编辑于2023年，星期三按以下公式计算各色素含量(mg.g鲜重-1)

：叶绿体色素含量=

色素的浓度×提取液体积(L)×稀释倍数

样品鲜重(g)第十四页，共十六页，编辑于2023年，星期三注意事项：1、研磨要在弱光下进行，且速度要快；2、研磨时要加入少量的碳酸钙，保护叶绿素；3、残渣中的色素要充分洗脱；4、波长要调准；5、比色液不能混浊。

第十五页，共十六页，编辑于2023年，星期三思考题

1、叶绿素a、b在蓝光区也有吸收