酶标记和免疫层析法技术课件_第1页
酶标记和免疫层析法技术课件_第2页
酶标记和免疫层析法技术课件_第3页
酶标记和免疫层析法技术课件_第4页
酶标记和免疫层析法技术课件_第5页
已阅读5页，还剩39页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

酶标记和免疫层析法技术黄陂区人民医院酶联免疫吸附测定法(ELSA)今1、1简介:基本概念:抗原:抗原是指进入人或动物机体后,可刺激机体免疫系统发生免疫应答,从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞,并能和抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。抗体:是由抗原刺激动物的免疫系统后,由免疫系统产生分泌的能和相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗原抗体的基本特性:a、反应的特异性;b、反应的等比例性1.2、ELSA方法简介今ELSA属于标记免疫学技术的一种,1971年由荷兰和瑞典的学者提出,由于其操作过程简单易行并可以定量,从而使其在医学检验中得到了广泛的应用13、ELSA方法的原理基于抗原抗体反应的特异性和等比例性,以聚苯乙烯塑料微孔板为载体,在适当的技术条件下使抗原或抗体包被(吸附)在酶标板微孔的内壁上成为包被抗体或抗原,没有被吸附的抗原或抗体通过洗涤除去,然后直接加入酶标记抗体或抗原形成酶标记的抗原一抗体复合物固定在微孔内,没有吸附的酶标记物洗涤去除,在微孔中加入底物溶液,复合物上的酶催化底物使其水解、氧化或还原成为有色的底物。复合物上酶的量和酶产物呈现的色泽成正比,因此可以用酶标仪进行测定,从而计算出参与反应的抗原和抗体的量。今14、ELSA方法的分类ELSA可以分为直接法、间接法和夹心法等几种直接法:直接法是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗原一抗体复合物,加入酶反应底物,测定产物的吸光值,计算岀包被在酶标上的抗体或抗原的量。见图2-17(a)间接法◆是将酶标记在二抗上,当抗体(一抗)和包被在酶标板的抗原结合形成复合后,再以酶标二抗和复合物结合,通过测定酶反应产物的颜色可以反应一抗和抗原的结合情况,进而计算出抗原或抗体的量。见图2-17(b)夹心法令是先将未标记的抗体包被在酶标板上,用于捕获抗原,在用酶标的抗体与抗原反应形成抗体-抗原-酶标抗体复合物;也可以象间接法一样应用酶标二抗和抗体-抗原-抗体复合物结合形成抗体-抗原-抗体-酶标二抗复合物,见图2-17(C)。前者称为直接夹心法,后者称为间接夹心法。ELSA原理及分类(图217)①抗体包被l、x小*+平②抗原包被)问接法▲▲▲▲▲人人人人人①直接夹心法丫丫②间接夹心法代表抗质↓代表框标抗丫代表抗体大代表标沉体员代表产物图2-17ELISA原理图引自于善谦等今上述三种方法又可以分为竞争法和非竞争法。下面对接法中的酶标抗原竞争法作重点说明。在进行测定时首先将包被了抗体的酶标板的微孔分为测定孔和对照孔,在对照孔中加入系列标准品溶液和酶标记物;在测定孔中同时加入酶标记物和非酶标抗原(通常来自于待测样品),酶标记物和样品互相竞争包被抗体的结合点,经过温浴后,没有结合到包被抗体上的酶标记物和样品经过洗涤去除。拍干后加入底物溶液,经温育后洗涤拍干,显色、终止,用

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论