第四章药物含量测定方法验证

第四章药物含量测定方法验证第一页，共四十八页，编辑于2023年，星期一基本要求

一、掌握测定药物含量的容量、光谱和色谱分析法，滴定度与含量计算，色谱系统适用性试验的内容、要求及相关计算。药物分析方法验证与内容。二、熟悉定量分析样品的前处理方法。

返回第二页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

第二节

定量分析样品的前处理方法

一、概述

1.为什么要对定量分析的样品进行前处理？

含卤素、氮、硫、磷等有机药物R-X（F，Cl,Br,I，N）

金属有机药物R-O-Me（有机酸或酚的含金属有机药物金属盐；结合不牢固）

有机金属药物R-Me

（结合牢固）

2.常用的处理方法不经有机破坏的分析方法药物分析中常用的分析方法经有机破坏的分析方法第三页，共四十八页，编辑于2023年，星期一（一）直接测定法例如：富马酸亚铁

溶于热稀矿酸，采用铈量法，邻二氮菲作指示剂

二、不经有机破坏的分析方法第四页，共四十八页，编辑于2023年，星期一（二）经水解后测定法

1.直接回流后测定法例如：三氯叔丁醇的含量测定

CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH(CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3

2.用硫酸水解后测定法例如：硬脂酸镁的含量测定

Mg(C17H35COO)2+H2SO4

MgSO4+2C17H35COOH

H2SO4+2NaOHNa2SO4

+2H2O

△二、不经有机破坏的分析方法第五页，共四十八页，编辑于2023年，星期一（三）经氧化还原后测定法1、碘他拉酸的含量测定

2.碘番酸、胆影酸、胆影葡胺注射液、泛影酸、泛影酸纳及泛影葡胺注射液的含量测定Zn还原，后银量法二、不经有机破坏的分析方法第六页，共四十八页，编辑于2023年，星期一3.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量

（1）含锑药物例如：葡萄糖酸锑的含量测定

Sb5++2KISb3++2K+

++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6

（2）含铁药物2Fe3++2KI2Fe2++2K++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6H+二、不经有机破坏的分析方法第七页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

湿法破坏

药物分析中常用的有机破坏的方法有

HNO3-HClO4法干法破坏(一)湿法破坏HNO3-H2SO4法

H2SO4-硫酸盐法（凯氏定氮法）

HNO3-H2SO4-HClO4法；H2SO4-H2O2；H2SO4-KMnO4(二)干法破坏加Na2CO3或MgO以助灰化；温度控制在420℃分为：高温炽浊法和氧瓶燃烧法

三、经有机破坏的分析方法含氮有机药物第八页，共四十八页，编辑于2023年，星期一凯氏定氮法在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量。1.原理2.包括四个过程：消化、蒸馏、吸收、滴定第九页，共四十八页，编辑于2023年，星期一2.反应过程1.有机物中的氮在强热和

浓H2SO4作用下，消化生成无机氮

NH2CHCOOH+2H2SO4=SO2+H2O+2CO2+NH3

2NH3+H2SO4=(NH4)2SO4

2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3(NH4)2SO4+2NaOH=Na2SO4+2NH4OH

4.用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量。NH4H2BO3

+HCl=H3BO3+NH4Cl3.

NH3收集于H3BO3

溶液中。NH3+H3BO3=NH4H2BO3第十页，共四十八页，编辑于2023年，星期一3.反应装置第十一页，共四十八页，编辑于2023年，星期一4.反应试剂1、消化液：硫酸2、催化剂：硫酸铜、硫酸钾3、碱溶液：40%氢氧化钠4、吸收液：2%硼酸5、混合指示剂：（1：1）乙醇溶液

0.1%甲基红：0.1%溴甲酚绿6、标准滴定液：0.2MHCL第十二页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

5.各种试剂的作用硫酸：

1.脱水。使有机物炭化，生成C

2.氧化。H2SO4将C、H氧化为CO2和H2O蒸汽逸出，本身还原为SO2，而药物则分解成无机氮，并与硫酸结合成硫酸铵，留在酸性溶液中第十三页，共四十八页，编辑于2023年，星期一硫酸铜：1.催化剂加速反应硫酸铜，氧化汞或硒粉作为催化剂以及加入少量过氧化氢作为氧化剂，次氯酸钾防止污染。通常使用硫酸铜。2.碱性反应指示剂

有机物全部消化后，出现硫酸铜的兰绿色，可以作为指示剂。

第十四页，共四十八页，编辑于2023年，星期一40%氢氧化钠

碱性条件下，使硫酸铵释放出氨气。加入氢氧化钠溶液要过量；要防止样液中氨气逸出。硼酸H3BO3：半微量或微量定氮通常用硼酸溶液吸收氨的作用。硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影响指示剂变色反应。

盐酸：HCl滴定液常量法中取0.1M比较合适，半微量法中则在0.02～0.05M之间比较合适。

第十五页，共四十八页，编辑于2023年，星期一6.注意事项取样量：

常量法：相当于含氮量2530mg半微量法：相当于含氮量1.02.0mg2.蒸馏加浓碱NaOH，加的量为H2SO4量的4倍常量分析：≥80mlNaOH，25ml的2%硼酸，半微量分析：例如10ml样品，10mlNaOH，

10ml2%硼酸3.硼酸保持过量。4.标准酸浓度：一般常量用0.1mol/L

半微量用0.05mol/L

微量用0.01mol/L第十六页，共四十八页，编辑于2023年，星期一氧燃瓶燃烧法(oxygenflaskcombustionmethod)1.原理将含有待测元素的有机药物放入充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧，使有机结构部分彻底分解为二氧化碳和水，而待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物（或无氧酸），被吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行检查或定量测定。第十七页，共四十八页，编辑于2023年，星期一适用范围：含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。特点：简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析。2.氧燃瓶燃烧法的适用范围及特点第十八页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

3.仪器装置燃烧瓶为500、1000或2000ml无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶瓶塞空心底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状第十九页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

4.称样用材料及称样

A.固体样品无灰滤纸

B.液体样品纸袋

C.软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹第二十页，共四十八页，编辑于2023年，星期一第二十一页，共四十八页，编辑于2023年，星期一5.吸收液

作用将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态

吸收液的选择氟水（HF)

氯

NaOH溶液（HCl溶解度低）溴

H2O2-NaOH（NaOH-硫酸肼饱和溶液碘

NaOH－硫酸肼饱和溶液硫

NaOH或H2O2

硒硝酸溶液第二十二页，共四十八页，编辑于2023年，星期一6.操作方法①燃烧瓶燃烧前的准备：用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。②样品的准备：取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。③样品的燃烧：点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。第二十三页，共四十八页，编辑于2023年，星期一①根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶。ChP（2005）规定的燃烧瓶体积为500、1000或2000ml三种，采用常量或半微量分析。（4）注意事项

第二十四页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

待分解样品量

燃烧瓶的体积3~5mg（微量分析）150~250ml20~30mg（半微量分析）300~500ml50~60mg1000ml0.6~0.7g或更多2000ml或特殊结构的燃烧瓶第二十五页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

正确选用燃烧瓶的目的在于：样品能在足够的氧气中燃烧分解完全；有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。②测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶③铂丝燃烧时起催化作用④应同时做空白试验⑤燃烧时要注意防爆⑥燃烧要完全⑦燃烧产生的烟雾完全被吸收第二十六页，共四十八页，编辑于2023年，星期一应用示例：碘苯酯的测定返回第二十七页，共四十八页，编辑于2023年，星期一（二）数据要求

回收率%=（测定平均值—空白值）/加入量×100%要求制备高、中、低三浓度的样品，各测定3次。应报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。第二十八页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

第三节药品质量标准分析方法验证一、准确度

是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示（一）含量测定方法的准确度1.原料药可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。2.制剂要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。

具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3,共9个数据来评价回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般回收率可达98%～102%；容量法可达99.7%～100.3%

第二十九页，共四十八页，编辑于2023年，星期一二、精密度

是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果之间的接近程度。

（一）精密度表示方法1.偏差(deviation,d)d=测得值-平均值=Xi-X

2.标准偏差（standarddeviation,SD或S）

S=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相对标准差(relativestandarddeviation,RSD)也称变异系数(coefficientofvariation,CV)RSD=标准偏差/平均值×100%=S/X×100%第三十页，共四十八页，编辑于2023年，星期一（二）重复性、中间精密度及重现性1.重复性在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度.2.中间精密度在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。3.重现性在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。第三十一页，共四十八页，编辑于2023年，星期一（三）数据要求

应报告S或SD、RSD和可信限。用统计学的可信性分析(t或f）。第三十二页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

三、专属性是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。

（一）鉴别反应应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品均应呈现负反应。第三十三页，共四十八页，编辑于2023年，星期一（二）含量测定和杂质测定色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。

图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方法进行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方法。第三十四页，共四十八页，编辑于2023年，星期一四、检测限（limitofdetection,

LOD)是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。（一）常用的方法

1.非仪器分析目视法用已知浓度被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。2.仪器分析方法

UV法：LOD=f.3S空=C样/A样×

3S空

Flu法：LOD=f.3S空=C样/(F样-F空)×

3S空

GC和HPLC法：

LOD=S/N=2或3

第三十五页，共四十八页，编辑于2023年，星期一（二）数据要求应附测试图，说明测试过程和检测限结果。第三十六页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

五、定量限（limitofquantitation,

LOQ)

是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求

LOQ.常用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10时相应的浓度进行测定。第三十七页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

六、线性

是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

UV法：首先制备一个标准系列，浓度点n=5;A=0.3～.0.7

建立回归方程C=aA+b;r＞0.9999。HPLC法：制备一个标准系列，浓度点n=5～7;以C对h或A或与内标物的峰面积之比，建立回归方程r＞0.9999。第三十八页，共四十八页，编辑于2023年，星期一七、范围

是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间。

原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的80%-～120%。

制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的70%-～130%。

溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限度的±20%。第三十九页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

八、耐用性

是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的承受

程度。典型的变动因素有：被溶液的稳定性、样品提取次数、时间等。HPLC法变动因素有：流动相组成与pH，色谱柱，柱温，流速等。

GC法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检测器温度等。第四十页，共四十八页，编辑于2023年，星期一

分析方法效能指标的具体应用：1.用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性，其余不要求。2.用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：①用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标均要求。②限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其余不要求。3.原料、制剂及溶出度测定：不要求检测和定量限，其余均要求。返回第四十一页，共四十八页，编辑于2023年，星期一练习与思考[A型题]

1．药品的鉴别是证明A．未知药物的真伪B．已知药物的真伪C．已知药物的疗效D．药物的纯度E．药物的稳定性2．相对标准差表示的应是A．准确度B．回收率C．精密度D．纯净度E．限度第四十二页，共四十八页，编辑于2023年，星期一3．用移液管量取的25ml溶液，应记成A．25mlB．25.0mlC．25.0