甲肝疫苗研制与应用(187)

一、甲型肝炎及甲型肝炎病毒二、甲肝疫苗的研制三、甲肝疫苗的应用四、甲肝疫苗的研究趋势和展望当前第1页\共有48页\编于星期五\10点甲型肝炎(简称甲肝)是一种人类普遍易感的高发病率的肠道传染病，由于其流行的普遍性和严重性，已成为一个世界性公共卫生问题。在病毒性肝炎中发病率及感染率最高。即使在低发区和非流行时，一般都占急性病毒性肝炎的50％左右。甲肝的流行时有发生。甲型肝炎严重危害人类健康。一、甲型肝炎及甲型肝炎病毒当前第2页\共有48页\编于星期五\10点20世纪90年代以前，全国各地甲肝大小流行不断，年发病人数逾百万，农村中成年人85%以上受感染，1988年上海发生的甲肝大流行发病人数达32万，我国是世界上甲肝流行最严重的国家之一，严重危害人民健康。预防和控制甲肝最有力的手段---研究甲肝疫苗。当前第3页\共有48页\编于星期五\10点（一）、甲肝流行病学1、传染源传染源主要为病人和病毒携带者的粪便。1)、病人甲肝潜伏期为28天（15-50天）。病人潜伏期和发病后2-3周内的粪便和血液有传染性。发病前4天至发病后4-6天传染性最强。2)、病毒携带者甲肝亚临床或隐性感染者作为传染源在流行病学上很有意义。当前第4页\共有48页\编于星期五\10点2、传播途径甲肝病毒的传播主要是通过粪--口途径的人人传播。受感染者的粪便直接或间接的污染水源或食物在传播中起主要作用。也可经血液（注射或输血)途径传播。甲肝的流行通常发生在幼儿园、学校、监狱和其他人口密度较高的群体。当前第5页\共有48页\编于星期五\10点

3、易感人群人群对HAV有普遍的易感性，感染后可产生稳固而持久的免疫力。在发展中国家，儿童期已大部分获得感染。发达国家，由于卫生条件及其它措施的改善，发病率逐渐降低，发病高峰后移至青壮年。由此也导致了人群抗-HAV水平的下降和易感人群的增加。当前第6页\共有48页\编于星期五\10点

4.流行特征甲肝可呈集体暴发流行(通常发生在幼儿园、学校、监狱和其他人口密度较高的群体)。多发生于秋冬季。发达国家季节性消失，呈常年散在发生。国内外曾多次报道，污染水源或水产品而引起甲肝暴发流行。当前第7页\共有48页\编于星期五\10点

5、感染类型感染甲肝后患者可表现为三种不同感染类型1)显性肝炎2)亚临床型肝炎3)隐性感染甲型肝炎其隐性感染者较多，呈急性发病者较多，伴有黄疸症状和全身症状明显。亚临床感染和隐性感染是造成甲肝流行的一个必要条件。当前第8页\共有48页\编于星期五\10点（二）、甲肝实验室诊断1、肝功能改变2、血浆白蛋白降低3、免疫学检测1)、在粪便、肝组织、胆汁、血液中能直接证明有HAV。2)、检测甲肝IgM抗体，诊断是否甲型肝炎的感染。当前第9页\共有48页\编于星期五\10点

二、甲肝疫苗的研制甲肝疫苗研究和使用主要依据有:1、HAV只有一个血清型。2、感染后可获得牢固的免疫力。3、HAV可以在细胞培养繁殖，提供了病毒的来源。4、有用于检测疫苗安全、效力试验及评价减毒株减毒水平的动物模型。当前第10页\共有48页\编于星期五\10点为何研发减毒活疫苗1、减毒活疫苗的优点和优势基于免疫学原理2、部分病毒性传染病灭活疫苗无效3、活疫苗的缺点当前第11页\共有48页\编于星期五\10点减毒活疫苗的免疫学基础细胞免疫：直接由细胞如NK细胞和T细胞执行效力功能。体液免疫：由体液介导，实际上包括所有液相分子。抗体细胞因子趋化因子补体常被错误地理解为仅仅是抗体免疫。体液免疫和细胞免疫两者是重叠的。当前第12页\共有48页\编于星期五\10点减毒活疫苗和灭活疫苗主要区别减毒活疫苗MHCI类和MHCII类分子途径都能提呈抗原，产生体液、细胞免疫。灭活疫苗主要通过MHCII类分子途径产生提呈抗原，产生体液免疫。细胞外抗原主要刺激CD4分子减毒活疫苗的免疫学基础当前第13页\共有48页\编于星期五\10点比较灭活疫苗活疫苗特点用灭活的病原微生物制成在制备过程中，其灭活步骤可杀灭任何可能污染的其它生物学因子疫苗中残存灭活剂、防腐剂不能产生分泌型抗体，可能产生毒性或潜在的有害免疫反应免疫缺陷者接种安全用弱毒或无毒活病原微生物制成无灭活步骤，疫苗中可能污染危险因子可采取模拟自然感染的途径免疫，疫苗进入机体内可有一定增殖能产生分泌型抗体疫苗在机体内有毒力恢复的潜在危险性有可能形成潜在感染和传播灭活疫苗与活疫苗的比较当前第14页\共有48页\编于星期五\10点灭活疫苗与活疫苗的比较比较灭活疫苗活疫苗保存接种研制效果成本疫苗较稳定，易于保存和运输，有效期较长需多次免疫，接种剂量大开发周期相对短，相对简单效果差，维持时间短，需加入佐剂生产成本高，纯化抗原工艺复杂疫苗不稳定，严格冷链运输，效期相对较短一般只需一次免疫，接种剂量小减毒株筛选时间长

免疫效果巩固，维持时间长生产成本低，常需制成冻干制剂当前第15页\共有48页\编于星期五\10点灭活疫苗致免疫增强作用接种灭活麻疹疫苗后可预防疾病，但几年后接种者感染自然流行的麻疹后会产生非典型疾病，并伴有增强的全身症状和肺炎。原因是：用甲醛灭活麻疹病毒时破坏了F蛋白(融合蛋白)，从而使F诱生血溶抑制抗体的能力下降，但不破坏H蛋白（血凝素）诱生抗体的能力，当血凝素抗体下降到病毒能再感染时，由于机体无抗F蛋白抗体，麻疹病毒的复制位点发生改变，引起严重的疾病。现在麻疹疫苗都使用减毒活疫苗，避免由于灭活疫苗的使用而引起的免疫增强作用。麻疹当前第16页\共有48页\编于星期五\10点灭活疫苗的免疫增强作用呼吸道合胞病毒在60年代，用福尔马林灭活呼吸道合胞病毒疫苗免疫婴幼儿，发现接种者在随后的呼吸道合胞病毒感染时发生严重下呼吸道疾病的机率大于其他婴幼儿。原因可能1、是由于该疫苗是肌肉接种，不能对呼吸道产生足够的局部IgA抗体，使接种者的免疫系统不同部分之间或内部呈现不平衡状态，这种不平衡状态可能更容易感染病毒，并使疾病加强。当前第17页\共有48页\编于星期五\10点原因可能是2、疫苗接种后诱导高水平的CD4+细胞，而不能诱导CD8+细胞，导致细胞免疫的不平衡，而且CD4+细胞中的Th1和Th2亚群比率倒置，使Th2亚群点的炎症加剧，造成更严重的支气管炎和肺炎。灭活疫苗的免疫增强作用呼吸道合胞病毒当前第18页\共有48页\编于星期五\10点

1、甲肝灭活疫苗国外主要研制和发展的是灭活疫苗。1995年SmithKline(史克)公司的HM175株和Merck(墨克)公司的CR326F株所制备的甲肝灭活疫苗经美国FDA批准后，儿童甲肝疫苗策略逐步实施－最后步骤：全国儿童甲肝常规接种，创造最终消灭本土家肝病毒传播基础。美国甲肝流行模式在疫苗使用前和疫苗时代有显著的不同。1988年---1994年，年发病率超过20/10万。2004年，年发病率2.7/10万。当前第19页\共有48页\编于星期五\10点法国巴斯德研究所的GBM株甲肝灭活疫苗和瑞士血清学研究所的RG-SB毒株，已批准上市。

我国唐山怡安生物－北大科兴和昆明生物研究所研制的TZ84株、Lu-8株甲肝灭活疫苗，2003年被批准生产上市。云南沃森、上海惠生、长春百克等公司甲肝灭活疫苗研制处在不同阶段。

当前第20页\共有48页\编于星期五\10点

2、甲肝减毒活疫苗1）、国外甲肝减毒活疫苗研究国外以美国Merk公司为代表的甲肝减毒活疫苗研究领域，目前仍处于早期实验室研究及小量人体观察阶段，累计观察人数不足百人。当前第21页\共有48页\编于星期五\10点ResultsofTrialsofFandF’VaccinesinAdultHumanVolunteers

doseNo.withofvaccinevirusNo.ALTHAVAB

(TCID50)subjectselevationHAVABM

F(105.6) 93/9a9/99/9

F(105.6) 11 2/11b6/118/11F(104.6) 9 3/9c 6/9 6/9 F(103.6) 8 1/8d 2/8 2/8

F’(106.3)11 0/11 6/1110/11

CR326当前第22页\共有48页\编于星期五\10点2)、国内甲肝减毒活疫苗研制该项目为国家“七五”、“八五”和“九五”重大科技攻关项目，具有我国自主知识产权的科技成果。L-A-1株：黑龙江省疾病控制中心上海市疾病控制中心长春生物制品研究所H2株：浙江医学科学院昆明生物研究所当前第23页\共有48页\编于星期五\10点甲型肝炎病毒L-A-1疫苗株选育1、减毒过程和方法2、减毒株的减毒标志3、动物模型系列试验4、攻击保护试验5、减毒株的传代及鉴定6、疫苗制备7、血清中和抗体测定8、实验性疫苗接种绒猴观察9、甲肝疫苗保存稳定性试验等当前第24页\共有48页\编于星期五\10点1985年－1991年临床前研究Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床研究中试和万人临床观察和免疫效果研究1992年获得新药证书、试生产文号1996年获生产文号

当前第25页\共有48页\编于星期五\10点甲型肝炎减毒活疫苗（L-A-1)的临床

反应与免疫效果观察（万人）

三批疫苗:901,9092,903观察接种：12000人，二个月随访。接种对象分布：4--5岁：1054人6－3岁：8216人14－8岁：1084人19岁以上：408人500人精细观察

当前第26页\共有48页\编于星期五\10点●局部及全身反应：弱反应：0.94%－2.4%中反应：0.95%－1.8%血清肝酶变化：无肝酶升高现象●疫苗免疫后抗体应答：12周：97.5%●受试者粪便HAAg检测及HAV分离：HAAg检测：阴性HAV增殖试验：阴性病毒扩散能力非常有限，对密切接触者水平传播可能性很小。●一般反应观察及流行病学效果考察二年不同地区、不同年龄组随访观察，未见甲肝发病者。当前第27页\共有48页\编于星期五\10点当前第28页\共有48页\编于星期五\10点

冻干甲肝减毒活疫苗的研制

液体剂型疫苗因无有效保护剂，需－20℃以下低温冻结贮存、冷链运输，2－8℃有效期仅为3－5个月，对疫苗的推广应用和接种效果及开发国际市场等带来了难以克服的困难。甲肝病毒的某些生物学特性为类似于脊髓灰质炎病毒、轮状病毒等其它肠道病毒属，皆为无脂蛋白包膜的微小RNA病毒，长期以来，国内外一直未能解决此类病毒冷冻干燥问题，冷冻干燥后极易失活。如脊髓灰质炎疫苗、轮状病毒疫苗等至今尚未解决冷冻干燥问题。

当前第29页\共有48页\编于星期五\10点1、首创研制成功冻干甲型肝炎减毒活疫苗及其保护剂。2、完成冻干甲肝疫苗及其保护剂工业化生产工艺研究。３、2001年首家获国家药品监督管理局颁发的新药证书及生产文号。4、获国家发明专利及国际专利（PCT）。当前第30页\共有48页\编于星期五\10点

表1冻干甲肝减毒活疫苗接种后反应观察观察局部反应全身反应（%）分组人数(红、肿、热、痛)无弱中强

A1130 99.11(112)0.88(1)0(0)0(0) B1140 99.12(113)0.87(1)0(0)0(0)C108098.15(106)0.00(0)0(0)0(0) D1160 98.28(114)0.86(1)0(0)0(0) Y113098.23(111)0.88(1)0(0) 0(0) 结果表明：所有志愿者均无有关的局部及全身临床反应。当前第31页\共有48页\编于星期五\10点

表2冻干甲肝减毒活疫苗接种后SGPT变化情况

0月1月2月分组检查人数异常人数检查人数异常人数检查人数异常人数

A 1130113 0 1130 B 114 0 114 0 1140 C 108 0 108 0 1080 D 116 0 116 0 1060

Y 113 0113 0 1000

SGPT采用改良赖氏法检测,结果≥25u/ml为异常升高。当前第32页\共有48页\编于星期五\10点表3冻干甲肝减毒活疫苗一针程序免后的抗体水平免后人数阳性数阳性率抗体水平mIU/ml时间(%)<200200-1000>1000平均高值低值一月11311198.26029227426719137二月99991004639145054028125当前第33页\共有48页\编于星期五\10点表4冻干甲肝减毒活疫苗免疫效果及免疫策略研究分组疫苗滴度免疫抗体阳转率%(月)抗体水平mIU/ml(月)抗体水平

CCID50/ml程序(月)12671267增长(倍)Y6.5一针98.297.5742505A6.50,198.2100121345128.5B6.50,6NDND86.610042428236.7C6.00,194.810084215825.7D6.00,6NDND5510032720016.1结果表明：一针免疫抗体阳转率达95％以上，二针免疫抗体阳率均达100％

当前第34页\共有48页\编于星期五\10点

冻干甲肝减毒活疫苗与液体甲肝减毒活疫苗稳定性的比较温度稳定性冻干甲肝疫苗液体甲肝疫苗2-8℃18个月3－5个月22－25℃18周1周37℃21天2天－20℃以下26个月12个月当前第35页\共有48页\编于星期五\10点当前第36页\共有48页\编于星期五\10点当前第37页\共有48页\编于星期五\10点2006年开始规模生产冻干甲肝减毒活疫苗生产情况及国家批签发情况2006年2007年批签发２３批25批合格证２３批25批疫苗生产周期6个月当前第38页\共有48页\编于星期五\10点长春所甲肝疫苗生产优势单一品种国内外最大甲肝疫苗研发和生产基地，生产用设施、设备技术含量高，适宜规模化、工业化生产、疫苗生产过程可控性强、生产稳定。疫苗品质优势采用独特生产工艺和独家使用的疫苗稳定剂，获国家技术发明二等奖、国家发明专利、美国、欧盟专利，疫苗的安全性高。20097年7月17日国家药典委员会病毒专业委员会企业注册标准会，中检所报告的结果证明了长春所疫苗的优势。当前第39页\共有48页\编于星期五\10点三、甲肝减毒活疫苗的应用自1992年甲肝减毒活疫苗在全国范围内逐步推广应用，结果表明：甲肝减毒活疫苗具有非常良好的安全性、免疫原性和显著的流行病学保护效果。当前第40页\共有48页\编于星期五\10点甲肝减毒活疫苗（L-A-1株）免疫持久性●免后６周抗体阳转率及GMT：阳转率：97.2%GMT:5.1±2.3●免后２－５年抗体阳性率：抗体阳性率%GMT２年93.3３年88.82.4±2.1４年82.8５年80.71.8±2.1当前第41页\共有48页\编于星期五\10点HBsAg阳性者接种甲肝减毒活疫苗

的反应及免疫效果●局部及全身反应除个别由弱中反应外，无其他不良反应。●肝酶SGPT检查对照组无一肝酶升高，观察组肝酶值与免前相比，无有临床意的改变。●抗体应答抗体阳转率(W％)GMT(W)24848观察组：181人44.584.293.04.9±2.15.8±2.5对照组：163人43.083.794.75.0±2.45.8±2.9当前第42页\共有48页\编于星期五\10点

儿童中进行随机对照试验，各组20余万人。接种一剂规范化滴度疫苗。第一年观察中：对照组发病38例，接种组未发现一例。三年观察期满：对照组发病115例，接种组发病３例，保护效果达97％。

当前第43页\共有48页\编于星期五\10点H2与L-A-1两组保护率一致，可见两株活疫苗预防效果极佳。史克公司甲肝灭活疫苗在泰国４万名小学生进行研究，有效率为92%。我国研制的甲肝活疫苗同国外报道的史克灭活疫苗相比，预防效果毫无逊色。当前第44页\共有48页\编于星期五\10点甲型肝炎减毒活疫苗接种后抗体水平疫苗株剂量接种三个月接种六个月

TCID50