杂环类药物分析

杂环类药物分析第一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日【基本要求】

1、掌握异烟肼、硫酸奎宁、氢溴酸东莨宕碱、盐酸环丙沙星、盐酸氯丙嗪、异丙嗪、地西泮、氯氮卓的鉴别试验和主要含量测定方法

2、熟悉用薄层色谱法检查异烟肼中游离肼、氯丙嗪、地西泮中有关物质的检查

3、熟悉异丙嗪片剂、注射剂的紫外分光光度法

4、了解本类药物化学结构、化学性质与分析方法的关系

5、了解本类药物的比色测定法返回第二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第一节吡啶类药物一、典型药物的结构与主要化学性质（一）典型药物的结构吡啶（pyridine）异烟肼（isoniazid）第三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日尼可刹米（nikethamide）第四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日硝苯地平（nifedipine)第五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）主要化学性质

1.弱碱性

吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶环的pKb

值为8.8（水中）。尼可刹米除了吡啶环上氮外，β位上被酰氨基取代。酰氨基化学性质不甚活泼，但遇碱水解后释放出具有碱性的二乙胺，故可以进行鉴别。

第六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

2．还原性

异烟肼的吡啶环γ位上被具有还原性酰肼取代，可被氧化剂氧化，可与含羰基的化合物发生缩合反应。

3．吡啶环的特性

异烟肼和尼可刹米的吡啶环α、α’位未取代，而β或γ位被羧基衍生物所取代；硝苯地平的吡啶环β、β’位被甲酸甲酯所取代，其吡啶环可发生开环反应。

第七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日二、鉴别试验（一）吡啶环的开环反应

本反应适用于吡啶环的α、α’位无取代基的异烟肼和尼可刹米。1.戊烯二醛反应（köning反应）尼可刹米+溴化氰H2O戊烯二醛衍生物苯胺黄色芳伯胺＋溴化氰→戊烯二醛→戊烯二醛衍生物芳伯胺吡啶环Ch.P只用于尼可刹米的鉴别第八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（黄色~黄棕色）第十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日2．二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯至熔融或混合醇制KOH紫红色无水条件第十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日采用本法鉴别异烟肼、尼可刹米时，需适当处理，即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后进行鉴别。如异烟肼鉴别：第十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日异烟肼可不经处理发生如下反应：异烟肼+2，4-二硝基氯苯乙醇OH-紫红色第十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）酰肼基团的反应

1．还原反应异烟肼+AgNO3异烟酸铵+N2+Ag银镜异烟肼+亚硒酸硒（红色）第十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日2．缩合反应

异烟肼的酰肼基与芳醛缩合形成腙，其有固定的熔点，可用以鉴别。ChP和BP均采用本法鉴别.

黄色结晶mp为228℃～231℃

第十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

Ar-NH2活性-CH2-+1，2-萘醌-4-磺酸OH-红色第十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（三）

形成沉淀的反应

具有吡啶环的结构，可与重金属盐类及苦味酸等试剂形成沉淀。

如尼可刹米+CuSO4+硫氰酸铵草绿色尼可刹米异烟肼+HgCl2白色第十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

（四）分解产物的反应使湿润的红色石蕊试纸变蓝尼可刹米异烟肼+无水Na2CO3Ca(OH)2吡啶臭尼可刹米+NaOH二乙胺第十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（五）

紫外吸收光谱特征

本类药物的分子结构中均含有芳杂环，在紫外光区有特征吸收，其最大、最小吸收波长及百分吸收系数可供鉴别。本类药物的紫外特征吸收鉴别方法见下表。本类药物的紫外特征吸收鉴别方法

药物溶剂λmax（nm）λmin（nm）E1cm1%

异烟肼HCl（0.01mol/L）265—

约420水266234378尼可刹米HCl（0.01mol/L）263—285NaOH（0.1mol/L）255—840260—860

硝苯地平无水乙醇333—140第十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

（一）异烟肼中游离肼的检查

1.TLC法

Ch.P中异烟肼及其注射,采用TLC法中杂质对照法。

对照品：硫酸肼0.20mg/ml（相当于游离肼50μg）

薄层板：硅胶（用羧甲基纤维素钠溶液制备）

展开剂：异丙醇-丙酮（3：2）

显色剂：乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液

检测结果：供试品主斑点前方，不得显黄色斑点

三、有关物质检查第二十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

BP的检查方法：

供试品溶液制备:

取异烟肼1.0g，加丙酮-水(1:1)制成10ml.

对照溶液制备:

取硫酸肼50mg，加水50ml使溶解后，加丙酮稀释至100ml；量取10ml，加供试品溶液0.2ml，加丙酮-水(1:1)稀释至100ml。

薄层板：硅胶GF254薄层板

展开剂：醋酸乙酯-丙酮－甲醇－水(50:20:20:10)

显色剂：乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液第二十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

检测结果：

于254nm紫外光下检测，供试品中的杂质斑点强度应小于对照溶液中异烟肼色谱斑点；再喷以对-二甲氨基苯甲醛溶液，并在日光下检视，对照溶液中硫酸肼斑点的强度大于供试液中的杂质斑点。第二十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

2．比浊法

JP（14）采用样品中加水杨醛的乙醇溶液观察混浊的方法来控制游离肼的限量。

此法专属性差，因异烟肼(慢)和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。第二十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日3.差示分光光度法

肼异烟肼+对-二甲氨基苯甲醛黄色缩合物对-二甲氨基苯甲醛连氮(λmax=456nm有最大吸收)形成的缩合产物对-二甲氨基苄叉(于λmax=456nm波长处无吸收)

可在456nm波长处测定并计算二者的差示吸收度ΔA456，同时以对照品比较法计算游离肼含量。第二十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

具体测定法：

对照品溶液：硫酸肼CR＝1μg/ml

5ml+丙酮λmax=456nm测A1+对-二甲氨基苯甲醛(ΔA456＝A2－A1)ΔAR5mlλmax=456nm测A2

供试品溶液：异烟肼C＝2mg/ml

游离肼CX=ΔAs/AR×CR

1份+丙酮

λmax=456nm测A1

+对-二甲氨基苯甲醛

(ΔA456＝A2－A1)ΔAs

2份

λmax=456nm测A2第二十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日(二)尼可刹米中有关杂质检查

因有关杂质的化学结构不明，故Ch.P和BP均采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。方法：供试品甲醇溶解成40mg/ml的溶液，再精密吸取适量用甲醇稀释至0.4mg/ml和0.04mg/ml的溶液作为对照液。取供试品和对照品液点样分析，显色后置紫外灯下观察。供试品如果显杂质斑点，与对照液2比较不得更深，如有一个杂质斑点超过2的主斑点，应不深于对照液1。

第二十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

(三)硝苯地平中有关物质检查

硝苯地平遇光分子内部发生光化学歧化作用，降解为4-（2-硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（A）和4-（2-亚硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（B）。其化学结构如下:第二十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日具体方法

1、供试液Ⅰ和Ⅱ的制备2、有关杂质对照品液Ⅰ和Ⅱ的制备(0.2mg/ml)3、色谱条件与灵敏度调节填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶

流动相：甲醇-水（3：2）；检测波长：235nm。取对照品溶液Ⅱ20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使杂质A和B组分色谱峰的峰高为满量程的20%；杂质A和B组分之间，杂质B与硝苯地平之间的分离度均符合规定。1mg/ml0.2mg/ml第二十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日4.有关物质检测

取供试液Ⅰ和对照液Ⅱ各20μl，分别进样记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试液Ⅰ如出现与对照液Ⅱ中杂质A和B相对应的峰，其峰面积不得大于对照液Ⅱ中杂质A和B的峰面积；如出现除杂质A和B以外的其他杂质峰，其峰面积不得大于对照液Ⅱ中硝苯地平的峰面积；各杂质总量不得大于0.5%。供试液Ⅰ中小于对照液Ⅱ中硝苯地平峰面积的10%以下的杂质峰忽略不计。

返回第二十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第三十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

一、基本结构与化学性质（一）典型药物的结构硫酸奎宁硫酸奎尼丁（quininesulfate）(quinidinesulfate)第二节

喹啉类药物第三十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

盐酸环丙沙星(ciprofloxacinhydrochloride)第三十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）主要化学性质

1.碱性

喹啉环上的氮原子具有碱性，与强酸形成稳定的盐。

环丙沙星与盐酸成盐，奎宁和奎尼丁可与二元酸成盐，结构中喹核碱含脂环氮，碱性强，可与硫酸成盐；而喹啉环系芳环氮，碱性较弱，不与硫酸成盐。奎宁pKb1为5.07，pKb2为9.7，饱和溶液的pH值为8.8。奎尼丁pKb1为5.4，pKb2为10。

第三十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日2.旋光性硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为-237o至-244o；硫酸奎尼丁为右旋体，其比旋度为+275o至+290o；而盐酸环丙沙星无旋光性。3.荧光特性硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光。第三十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

（一）绿奎宁反应（Thalleioquin）

绿奎宁反应是奎宁和奎尼丁的特殊鉴别反应。其反应如下：Ch.P收载方法二、鉴别试验绿/翠绿色产物二醌亚胺盐第三十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）光谱特征1.UVCh.P采用本法鉴别盐酸环丙沙星，其盐酸溶液(8μg/ml)在277和315nm处有最大吸收。2.荧光光谱特征硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀H2SO4中均显蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。3.IRCh.P中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。第三十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（三）无机酸盐

利用硫酸奎宁和硫酸奎尼丁显硫酸盐的反应；盐酸环丙沙星显氯化物的反应，可用无机盐的鉴别方法进行鉴别。第三十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

（一）硫酸奎宁中特殊杂质检查

1.酸度主要控制药物中酸性杂质。用pH计测定,pH为5.7～6.6。

2.氯仿-乙醇中不溶物主要控制药物中不溶性杂质或无机盐类.检查方法：取本品2.0g，加三氯甲烷-无水乙醇（2:1)混合溶液15ml，在50℃加热10min，用称定重量的垂熔坩埚过滤，滤渣用混合溶液洗涤5次，每次10min，在105℃干燥至恒重，要求遗留的残渣≤2.0mg。三、特殊杂质检查第三十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日3.其他金鸡纳碱主要控制硫酸奎宁中其他生物碱TLC法：因没有合适的对照品，因此采用薄层色谱中的主成分自身对照法进行检查。

HPLC法（BP）：供试品溶液的制备、对照溶液a、b、c、d和内标溶液（硫脲）的制备第三十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日色谱条件：ODS、乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相、流速1.5ml/min、检测波长：250和316nm色谱系统适用性实验：测定法：二氢奎尼丁≤15％、保留时间小于奎尼丁的有关物质≤5％，其他物质总和≤2.5％。色谱峰峰面积归一化法第四十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）氧氟沙星中特殊杂质的检查1、溶液的澄清度与颜色主要控制本品中不溶性物质和有色杂质。澄清度检查：与2号浊度标准液比浊、黄色或黄绿色4号标准比色液比色。颜色检查：10mg/ml的碱溶液，在450nm处的A≤0.25.3.有关物质主要控制本品中可能引入结构不清的有关杂质，

Ch.P和BP均采用HPLC法中归一化法进行检查，其检查方法如下：第四十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱流动相：醋酸铵高氯酸混合溶液-乙腈(85:15)用磷酸调节pH值2.2.检测器：UV检测波长为294nm；按氧氟沙星峰计算n≥5000;氧氟沙星峰与相邻杂质峰的分离度R＞1.5.测定方法：取本品适量，加0.1mol/l的盐酸制成每1ml中含2.4μg的对照溶液；配制1mg/ml的溶液，置于紫外灯下照射4h；各取溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度和记录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满量程的20％～25%，记录时间应为主成分峰保留时间的2.5倍。按面积归一化法计算，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2％，杂质总量不得大于主峰面积的2.5倍。返回第四十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第四十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

一、基本结构与化学性质（一）典型药物的结构

硫酸阿托品氢溴酸东莨菪碱（atropinesulfate）(copolaminehydrobromide）第三节托烷类药物第四十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）主要化学性质1。水解性本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)。2.碱性

阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有叔胺氮原子,具有较强的碱性,易与酸成盐。如阿托品的pKb1为4.35。第四十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日3.旋光性

氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称碳原子，呈左旋体，比旋度为-24ο至-27ο，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因外消旋化而为消旋体，无旋光性。利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。

第四十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（一）托烷生物碱一般鉴别试验二、鉴别试验生物碱水解莨菪酸发烟硝酸三硝基衍生物KOH（C2H5OH）固体KOH有色的醌型产物Vitaili反应第四十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）氧化反应

本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸和重铬酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味。其反应式为：第四十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日(三)沉淀反应

本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。如：阿托品+氯化汞醇试液黄色沉淀东莨菪碱+氯化汞醇试液白色沉淀（四）硫酸盐与溴化物反应第四十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

1.酸度

东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱形成的盐，通过其5%水溶液的pH值为4.0～5.5，来控制本品中的酸性杂质。

2.其他生物碱三、氢溴酸东莨菪中特殊杂质检查本品水溶液+氨试液不混浊合格混浊存在其他生物碱+KOH试液混浊（东莨菪碱）第五十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日Ch.P：本品两份，一份加氨试液、一份加KOH试液，应产生瞬间消失的白色浑浊。BP：TLC法检查－配制20mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml的供试品溶液和对照溶液a和b，点样后碘化铋钾显色。要求：供试品溶液中除主斑点外的杂质斑点与对照液a的主斑点比均不得更深，比对照液b主斑点颜色更深的杂质斑点不得多余1个。第五十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

3.易氧化物

主要是检查本品在生产中可能引入的阿扑阿托品及及其它含有双键的有机物质，可使KMnO4溶液褪色。返回Ch.P：高锰酸钾的颜色消失BP：控制在254nm处的百分吸收系数，E≤3.6（0.5％）第五十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第四节吩噻嗪类药物一、基本结构与化学性质（一）结构特点与典型药物苯并噻嗪硫氮杂蒽第五十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第五十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第五十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日奋乃静第五十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日癸氟奋乃静第五十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日盐酸氟奋乃静第五十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日盐酸三氟拉嗪第五十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）主要化学性质1.紫外和红外吸收光谱特征硫氮杂蒽母核为共轭三环л系统

三个最大吸收峰别在：205nm、254nm、300nm由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。

硫氮杂蒽母核的硫为二价，易氧化为砜和亚砜，其紫外吸收光谱有明显不同，它们具有四个峰值。另外，取代基R和R’的不同，则可产生不同的红外光谱第六十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第六十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日2.易氧化呈色二价硫易氧化，遇不同氧化剂如硫酸、硝酸、三氯化铁试液及过氧化氢等，随着取代基的不同，而呈不同的颜色。

3.与金属离子络合呈色

本类药物中未被氧化的硫，可与钯离子形成配位化合物，其氧化产物则无此反应。此性质可用于鉴别和含量测定，并具有专属性，可消除氧化产物的干扰。第六十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（一）紫外特征吸收和红外吸收光谱

本类药物可用UV和IR鉴别，Ch.P中UV鉴别实例如下：

药物名称溶剂浓度（μg/ml）λmax（nm）AE1%1cm盐酸氯丙嗪盐酸（9→1000）52540.46915306—

—盐酸异丙嗪盐酸（0.01mol/L）6249—883~937奋乃静无水乙醇72580.65—癸氟奋乃静乙醇10260—

—盐酸氟奋乃静盐酸（9→1000）10255—553~593盐酸三氟拉嗪盐酸（1→20）10256—630盐酸硫利达嗪乙醇8264与315—

—二、鉴别试验第六十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第六十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第六十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

（二）显色反应

1.与氧化剂的显色反应

药物名称硫酸硝酸过氧化氢

盐酸氯丙嗪显红色,渐变淡黄色—盐酸异丙嗪显樱桃红色,放置生成红色沉淀,加热即溶解,后颜色渐变深溶液由红色转变为橙黄色奋乃静—

—显深红色;放置后红色渐褪去盐酸氟奋乃静显淡红色,温热—

—后变成红褐色盐酸三氟拉嗪—生成微带红色的白色沉淀;放—置后,红色变深,加热后变黄色

盐酸硫利达嗪显蓝色

—

—

第六十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

2.与钯离子络合显色反应

利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。第六十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第六十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（三）分解产物的反应

癸氟奋乃静碳酸钠及碳酸钾F-+酸性茜素锆试液[ZrF6]2-配位离子，茜素游离使溶液由红色变为黄色。600℃炽灼第六十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

(一)盐酸异丙嗪中特殊杂质检查

主要有：2-二甲氨基-1-丙醇；N,N,β-三甲基-10H-吩噻嗪-10-乙胺异构体和结构不清的分解产物

。因此采用TLC法中的

高低浓度对比法控制上述这些杂质的限量。(二)盐酸硫利达嗪中有关物质检查

本品遇光不稳定，在生产和贮藏过程中易引入有关物质，因其结构不清，因此也采用TLC法中的高低浓度对比法控制杂质的限量。三、特殊杂质检查返回第七十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第五节苯并二氮杂卓类药物一、结构特征与典型药物NNClH3CO地西泮苯环与含氮七元杂环第七十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日阿普唑仑第七十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日奥沙西泮第七十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日氯氮卓NNNCH3OClH第七十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日主要化学性质1、碱性母核结构上的氮原子，显示弱碱性，并在不同的pH溶液中，可以形成不同的离子化状态，包括质子化分子、中性分子和去质子化分子，从而影响其紫外吸收。2、水解性在强酸性溶液中可以发生水解成二苯甲酮衍生物第七十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

(一)化学鉴别试验

1，沉淀反应

氯氮卓

橙红色沉淀

阿普唑仑盐酸氟西泮

＋KBiI4

也生成橙红色沉淀氯硝西泮放置后，沉淀颜色变深，

因此可以相互区别。二、鉴别试验阿普唑仑+硅钨酸白色沉淀，药典中也用于鉴别。第七十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日2.水解后呈芳伯胺反应

氯氮卓和奥沙西泮，其反应如下：第七十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日3.硫酸-荧光反应

本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，显不同颜色的荧光。例如：

地西泮

黄绿色黄色氯氮卓黄色紫色艾司唑仑+H2SO4亮绿色+稀硫酸天蓝色硝西泮淡蓝色蓝绿色奥沙西泮

淡黄绿色第七十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日4.分解产物的反应

本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。Ch.P用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。

5.氯化铜焰色反应

分子结构中含有氯元素的药物，在铜网上燃烧发出CuCl2绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。第七十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱

药物名称溶剂浓度（μg/ml）λmax（nm）A

地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242约0.51282

约0.23366氯氮卓盐酸溶液(9→1000)7245,308阿普唑仑盐酸溶液(9→1000)12264盐酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2,284±2比值1.95～2.50362±2氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2,307±2奥沙西泮乙醇10229,315±2(较弱)

红外吸收光谱:已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。

第八十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（三）TLC法

1.常用的五种苯并二氮杂卓类药物的TLC法

按常规法点样10μl于硅胶G薄层板上，以苯-丙酮（3：2）为展开剂,饱和15min，用上行法展开15cm，挥发溶剂，用稀硫酸喷雾，于105℃干燥30min，置紫外灯下检视荧光斑点。BP:氯硝西泮＋氯氮卓－TLC法USP:地西泮＋盐酸氟西泮－TLC法；氯氮卓－HPLC法Ch.P:地西泮注射液－HPLC法第八十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日2.酸水解产物的TLC法

利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的二苯甲酮衍生物进行鉴别。由于不同的苯并二氮杂卓类药物水解后可能会获得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的专属性较差。

第八十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

（一）有关物质检查－中间体、副产物、分解产物

Ch.P收载的八种本类药物，除氯氮卓外，其余均作此项检查。其检查方法除了三唑仑采用GC法外，其余均用TLC法进行检查。USP(24)和BP(2000)中对氯氮卓都规定了此项检查，而且均用TLC法进行检查。三、特殊杂质检查第八十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

1.地西泮中有关物质的检查

地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化学结构不清的有关物质，可采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。

2.氯氮卓中有关物质的检查

USP(24)用TLC法检查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得过0.01%；中间体7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮-4-氧化物含量不得过0.1%。第八十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日3.氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法

色谱条件：色谱柱为150mm×4.6mm（i.d.）Nucleosil10C18柱；流动相为甲醇-水（50:50),流速1.0ml/min，检测波长：254nm。

检测结果：间硝西泮的tR为3.1min、氯氮卓的tR为3.6min，有关物质A的保留时间约为氯氮卓0.7，有关物质B约为2.3，有关物质C约为3.9。溶液的配制：供试品液0.2mg/ml、对照液(a)1μg/ml、硝西泮a(b)5μg/ml,(2-氨基-5-氯苯基）苯甲酮对照液（c)0.4μg/ml第八十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日要求：1、记录的色谱时间为主峰保留时间的6倍2、有关物质A和B的峰面积不得大于对照液a主峰面积的0.2％3、有关物质C的峰面积不得大于对照液c主峰面积的0.2％4、其他杂质峰的峰面积年均不得大于对照液a主峰面积的0.5倍5、各杂质峰的面积和不得大于对照液a峰面积的2.5倍第八十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第八十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日(二)降解产物的检查

地西泮注射液列入此项检查，因本品在贮藏过程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等杂质。采用HPLC法进行检查。返回第八十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第六节含量测定一、非水溶液滴定法主要用于测定有机碱及其盐，也可以测定有机弱酸

1、酸性溶剂：有机弱碱在酸性溶剂中可显著地增强相对碱度2、碱性溶剂：有机弱酸在碱性溶剂中可显著地增强相对酸度

3、两性溶剂：具有酸、碱性能，如methanol4、惰性溶剂：没有酸、碱性的溶剂，丙酮、氯仿第八十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日一、非水溶液滴定法(一)基本原理当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游离碱类盐被置换出的弱酸因此，要根据不同情况采用相应测定条件。第九十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日(二)一般方法供试品+冰醋酸10ml~30ml若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml结果高氯酸滴定液滴定以空白试验校正第九十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

(三)问题讨论1.适用范围

主要用于pKb>8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使pKb为8～13的弱碱性药物采用本法滴定。

一般来说：pKb为8～10时，宜选冰醋酸作为溶剂；

pKb为10～12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；pKb>12时，应用醋酐作为溶剂。

另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著增大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。

第九十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

2.酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：

高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞硝酸

消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2

量不足终点不明显，结果偏低。

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

过量(1～3倍)不影响测定结果第九十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日3.滴定剂的稳定性非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品与标定HClO4溶液时的温度不一致，温差未超过10℃时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正：

4.终点指示方法常用电位法和指示剂法。Ch.P收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。另外，橙黄Ⅳ、萘酚苯甲醇、喹哪啶红、孔雀绿第九十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日(四)应用实例

1.游离弱碱性药物测定

异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。

药物名称取样量(g)溶剂指示剂终点颜色

尼可刹米0.15冰醋酸10ml结晶紫蓝绿色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml结晶紫绿色氯氮卓0.3冰醋酸10ml结晶紫蓝色第九十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

2.氢卤酸盐类药物测定

当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢卤酸在冰醋酸中酸性较强，对测定有干扰，必须先加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成难以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下：

药物名称取样量(g)溶剂加入醋酸汞试液(ml)指示剂终点颜色盐酸氯丙嗪0.2醋酐10ml5橙黄Ⅳ玫瑰红色盐酸异丙嗪0.3冰醋酸10ml4结晶紫蓝色盐酸氟奋乃静0.3冰醋酸20ml5结晶紫蓝绿色盐酸环丙沙星0.2冰醋酸25ml5橙黄Ⅳ粉红色氢溴酸东莨菪碱0.3冰醋酸20ml5结晶紫纯蓝色盐酸硫利达嗪0.3丙酮100ml5电位滴定法

第九十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日3.硫酸盐类药物测定

硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成SO42-，但在非水介质中，只显示一元酸解离为HSO4-，即只供给一个H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。第九十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（1）硫酸阿托品测定：阿托品为碱性较强的

一元碱药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以简写为(BH+)2·SO42-，用高氯酸直接滴定时的反应式为：(BH+)2·SO42-+HClO4→(BH+)·ClO4-+(BH+)·HSO4-可根据1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的关系计算其含量。第九十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（2）硫酸奎宁测定：奎宁为二元碱，其中喹核碱的碱性较强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，1mol的硫酸奎宁消耗3mol的高氯酸。其反应式如下：(C20H24N2·H+)2SO4+3HClO4→(C20H24N2·2H+)·2ClO4-

+(C20H24N2·2H+)·HSO4-·ClO4-

Ch.P和USP(24)都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。第九十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日(3)硫酸奎宁片的测定：

硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高氯酸标准溶液直接滴定。此时1摩尔的硫酸奎宁可消耗4摩尔的高氯酸，因此片剂分析的滴定度与原料药分析的滴定度不同。

第一百页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日4.硝酸盐的测定

硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般不用指示剂法而用电位法指示终点。第一百零一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日5.磷酸盐与有机酸盐

磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性极弱，不影响滴定反应的定量完成，可以按常规方法直接滴定。第一百零二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（一）硝苯地平的测定

基本原理硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示：

终点时:微过量的Ce4+将指示剂中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终点的到达。二、铈量法第一百零三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）吩噻嗪类药物的测定药物Ce(SO4),-e红色Ce(SO4),-2e红色消退自身指示终点或电位法、永停法指示终点第一百零四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日溴酸钾法－异烟肼类药物的含测定利用在酸性溶液中，异烟肼具有较强的还原性，可以与溴酸钾发生化学反应，用甲基橙指示剂，粉红色消失为终点，反应的mol比为3：2第一百零五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日(一）酸性染料比色法

1.基本原理三、比色法

是利用碱性药物在一定的pH条件下与某些酸性染料结合显色，进而用分光光度法测定药物含量的方法第一百零六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

2.影响因素

(1)水相最佳pH值的选择：本法中水相的pH应使有机碱性药物均成阳离子(BH+)，而酸性染料应电离足够的阴离子(In-),阴阳离子才能定量生成离子对，并完全溶于有机溶剂中，而过量的染料完全保留在水相中，才能保证定量的测定。

(2)酸性染料及其浓度：常用酸性染料有溴麝香草酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿等。酸性染料浓度，对测定影响不大，有足够量即可。增加染料浓度可提高灵敏度，如果太高，则容易乳化

根据有机药物和酸性染料的pK值及两相中的分配系数来确定第一百零七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日(3)有机溶剂的选择

有机碱药物应对离子对提取率高，不与水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。(4)水分的影响：严防水分混入有机溶剂中，水相中过量有色酸性染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影响比色测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混入的水分。第一百零八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日3.应用示例

Ch.P中硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪碱片和氢溴酸山莨菪碱片等，采用本法测定含量测定。

紫外吸收弱、标示量低第一百零九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日1、配制对照品溶液－氢溴酸东莨菪碱2、供试品溶液－样品→研细→称细粉→溶解过滤3、测定－精密取对照品和样品加入分液漏斗，加入氯仿和溴甲酚绿，振摇后分层，分取氯仿层进行UV法，在420nm处测定第一百一十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（一）直接分光光度法

供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。

1.奥沙西泮原料的测定在229nm，采用标准对照法测定。

2.盐酸异丙嗪片的测定在249nm，采用E1cm1%＝910测定。

3.盐酸异丙嗪注射液的测定

测定波长的选择：注射液处方加VC作抗氧剂，可还原异丙嗪红色氧化产物，从而防止异丙嗪氧化变色。VC在盐酸异丙嗪最大吸收波长249nm处有吸收，干扰注测定。因此选用299nm波长测定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生素C在此波长处则不产生干扰,但E1cm1%＝108。四、紫外分光光度法第一百一十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日(二)萃取后分光光度法盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪氨水碱化氯丙嗪乙醚提取乙醚层盐酸提取盐酸氯丙嗪max254±1nm处测定A，E1cm1%＝915第一百一十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（三）萃取-双波长分光光度法

本法是USP（24）收载的方法，用于盐酸氯丙嗪注射液的含量测定，主要用来校正样品中氧化物对测定的干扰。测定原理利用氯丙嗪的最λmax为254nm，其氧化物在此波长也有吸收，同时在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波长无吸收。因此，可由两波长处测得△A计算氯丙嗪含量。第一百一十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第一百一十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（四）二阶导数分光光度法盐酸氯丙嗪注射液抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定。因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰266nm～谷254nm距离，标准曲线法定量

其测定方法如下：

第一百一十五页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日1.光谱绘制

测绘条件：波长范围为200nm～320nm；狭缝为12nm；纸速为120mm/min。2.线性关系精取盐酸氯丙嗪对照液(50μg/ml)制得标准系列，以HCI(0.1mol/L)为空白，按光谱绘制项下分别测定。用尺量取不同浓度系列溶液光谱266nm-谷254nm距离（DL），并以峰谷距离为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。3.供试品测定精密量取盐酸氯丙嗪注射液2.0ml，按光谱绘制项下的方法，测得二阶导数光谱，量取光谱峰-谷(266nm～254nm)距离，从标准曲线上求出浓度，计算百分含量。第一百一十六页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第一百一十七页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日五、气相色谱法*

对热稳定可气化的有机碱，先碱化得游离碱后测定（一）硫酸阿托品片的含量测定

USP(24)采用的方法。以后马托品作为内标,采用标准对照法。

测定方法

(1)内标溶液的制备：(2)供试品溶液与对照品溶液的制备：(3)色谱系统：色谱柱为1.8m×2mm的玻璃柱；担体为与碳酸钠混合于900℃熔融后，经酸和碱处理的硅烷化藻土；固定相为3%的OV-17（即50%甲基，50%苯基的聚硅氧烷）；载气为氮气，流速为25ml/min；检测器为氢火焰离子化检测器。第一百一十八页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

(4)系统适用性试验：取对照品溶液1μl，进样6次，所得的对照品和内标峰面积之比的RSD不大于2.0%；对照品峰和内标峰的分辨率Rs≥4.0；拖尾因子T≤2.0。[T(拖尾因子)=W0.05h/2d1，d1为峰顶点至峰前沿之间的距离]

(5)测定方法：取供试液和对照液各进样1μl，记录各峰面积，用下式计算所取片粉中硫酸阿托品[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重(mg)第一百一十九页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日（二）人血浆中硝苯地平的气相色谱法测定及药代动力学研究血浆样品处理：血浆→加入内标→加入乙醚：环已烷（1：2）＋NaOH→窝旋提取→离心→分取有机相→吹干→丙酮溶解→GC分析GC-ECD测定：DB-1（25×0.32×0.5），氮气为载气，分流比50：1，气化室温度：250℃，检测器温度：300℃，程序升温：第一百二十页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日色谱系统适用性：硝苯地平tR=9.4min，n≥39000,内标tR=12min，n≥30000，内源性物质不干扰测定（专属性），LOD=0.5ng/ml，线性范围：1.0～100ng/ml，高、中、低的绝对回收率≥75％第一百二十一页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日第一百二十二页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

(一)反相高效液相色谱法

1.地西泮注射液的反相HPLC法

地西泮注射液曾用萃取后分光光度法测定含量，因萃取不完全，及有关物质和分解产物等对测定有干扰，故中国药典自1995版改用HPLC法。此法操作简便，可消除干扰。注射液中地西泮的平均回收率为99.4%，相对标准偏差为0.8%。

(1)色谱条件与系统适用性试验：ODSC18；流动相为甲醇-水(70:30)；检测波长为254nm。n＞1500，R＞1.5。

(2)内标溶液的制备：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。六、高效液相色谱法第一百二十三页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日

(3)测定方法：取地西泮对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。吸取5μl～10μl进样，记录色谱图；另取本品适量(约相当于地西泮5mg），同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。第一百二十四页，共一百四十二页，编辑于2023年，星期日2.高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量

色谱条件:色谱