实验室常用小鼠简介同济

实验室常用小鼠简介同济演示文稿当前第1页\共有23页\编于星期三\22点C57BL/6简要描述：最常见的实验小鼠，经常简称为B6C57或者小鼠。性状描述：毛色为黑色，常作为“标准”的近交系。常见用途：⑴用于多种免疫学、遗传学研究，包括移植、感染等动物模型。⑵常作为背景小鼠，对其进行基因敲除、转基因等遗传修饰,从而提供标准的遗传背景。BALB/C简要描述：是实验室常见的免疫功能不太完善的小鼠。性状描述：毛色为白色，对致癌因子敏感，卵巢、肾上腺和肺部肿瘤、白血病发生率较高。常见用途：⑴用于生产单克隆抗体的杂交瘤的制备。⑵免疫学研究，如移植的供受鼠等。BM12简要描述：是C57BL/6近交系小鼠自发形成的一个近交系小鼠，在MHCII类分子中有3个氨基酸的突变。性状描述：与C57BL/6基本相同，对EAE等自身免疫性疾病具有抗性。常见用途：用于慢性排斥反应研究的供鼠。免疫学研究中常用的小鼠品系当前第2页\共有23页\编于星期三\22点常见的小鼠品系ALR：与NOD小鼠具有共同祖先的小鼠，白色，两者有70%的基因组完全相同，但MHC不相同。对I型糖尿病具有很强的诱导耐受。常用于NOD的对照小鼠。杂交鼠：由两个近交系杂交获得后代，性状不稳定。小鼠遗传操作未进行彻底的小鼠。NOD：简要描述：非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠，最常见的实验小鼠，公认的自身免疫性糖尿病（I型糖尿病）。性状描述：白色，从第9周开始，即会有胰腺炎症状，之后雌鼠会有较高的概率得I型糖尿病。常见用途：⑴I型糖尿病遗传、发病机制研究。⑵其它相关的自身免疫性疾病研究，如干燥综合症等。当前第3页\共有23页\编于星期三\22点1、器官移植模型2、自身免疫性疾病模型3、超敏反应模型4、肿瘤模型免疫研究常见的小鼠动物模型当前第4页\共有23页\编于星期三\22点肾移植模型异位心脏移植模型小肠移植模型骨髓移植模型肝移植模型皮肤移植模型胰腺（胰岛）移植模型慢性排斥（BM12）器官移植模型当前第5页\共有23页\编于星期三\22点1、自发型I型糖尿病动物模型NOD小鼠2、诱导型I型糖尿病动物模型：药物（STZ、Alloxan、环磷酰胺等）诱导破坏小鼠胰岛3、自发型系统性红斑狼疮小鼠BXSB4、诱导型系统性红斑狼疮小鼠慢性移植物抗宿主自身免疫性疾病模型当前第6页\共有23页\编于星期三\22点5、自发型类风湿性关节炎SKG小鼠6、诱导型类风湿性关节炎Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型，佐剂性关节炎(adjuvantarthritis，AA)模型，其它诱导模型7、诱导小鼠EAE；模拟人多发性硬化症/急性播散性脑脊髓炎。髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）多肽免疫；髓鞘碱性蛋白（MBP）免疫疫；髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)免疫；脊髓组织匀浆免疫等自身免疫性疾病模型当前第7页\共有23页\编于星期三\22点超敏反应模型气道高敏感反应模型：腹腔注射卵清白蛋白致敏，然后通过雾化吸入造模。皮肤过敏反应模型：过继输入抗二硝基苯酚（DNP）的IgGE单克隆抗体，使小鼠被动致敏，然后以二硝基氟代苯（DNFB）刺激产生过敏反应。当前第8页\共有23页\编于星期三\22点肿瘤模型移植瘤实验：将人移植入BalB/C、祼鼠、C57BL/6、Rag1等小鼠体内。诱导癌/肿瘤模型：使用二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)等诱癌剂灌胃及自由饮水，长期诱导可产生肝癌模型。当前第9页\共有23页\编于星期三\22点1、基因敲除小鼠2、基因敲入小鼠3、基因捕获小鼠4、转基因小鼠5、条件性基因表达小鼠6、条件性基因敲除小鼠基因修饰小鼠当前第10页\共有23页\编于星期三\22点载体构建基本知识二、pIRES2-EGFP-rtTAAdvanced构建使用引物将rtTAAdvancedCDS区克隆出来，然后以XhoI/BglII双酶切，将其克隆入pIRES2-EGFP载体的XhoI/BamHI位点中。引物序列为：rtTA_XhoI_F:ATCGCTCGAGCCGCCACCATGTCTAGACTGGACAAGAGCAAArtTA_BglII_R:ATCGAGATCTTACTTAGTTACCCGGGGAGCATGTCA当前第11页\共有23页\编于星期三\22点基因表达基本知识DNA一级结构上调控基因表达的元件（基因表达盒结构）promoter5’-UTRpromoterenhancerUTRexonPolyAsignalingenhancer3’-UTRChromosomesequence当前第12页\共有23页\编于星期三\22点基因敲除小鼠当前第13页\共有23页\编于星期三\22点基因修饰ES细胞的获得及囊胚注射基因敲除小鼠当前第14页\共有23页\编于星期三\22点2、基因敲除纯合小鼠的获得当前第15页\共有23页\编于星期三\22点基因敲入小鼠Neorw.tallelefloxallele1IIIIIIw.t.sequenceVectorsequenceloxPsiteFRTsiteTypingprimerTypingprimerexon当前第16页\共有23页\编于星期三\22点基因捕获小鼠效果类似于基因敲除当前第17页\共有23页\编于星期三\22点MBD2基因敲除小鼠

b-geo

w.t.allele

1

2

w.t.sequence

Vectorsequence

mutantallele

Typingprimer

Typingprimer

exon

1

3

b-geo

3

Sequencenotindicated

targetingvector

A

当前第18页\共有23页\编于星期三\22点转基因小鼠靶标基因表达盒DNA当前第19页\共有23页\编于星期三\22点条件性基因表达小鼠PCAGloxPCATloxPHGHPApBR322oriAmpPacIpCAG-CAT-X7100bpMBD2cDNA在MBD2CDS两端PCR加入PacI酶切位点PacIPacIPacI酶切，T4连接酶连接PCAGCATMBD2loxPloxPPacIPacIABCPCAGMBD2loxPPacIPacIDEloxPCAT+Cre介导重组Cre-loxP系统当前第20页\共有23页\编于星期三\22点Tet-on表达系统当前第21页\共有23页\编于星期三\22点条件性基因敲除小鼠Cre-loxP及FLP-FRT技术Cre、FLP是重组酶，loxP、FRT是重组位点当前第22页\共有23页\编于星期三\22点图1:诱导型平滑肌特异性敲除Dicer1基因的小鼠基因型。1A：Dicer1的蛋白质结构,主要包含4个结构域，任一个结构域的缺失均能导致microRNA不能成熟；1B：两侧包含loxP位点的Dicer基因结构图，两个同向loxP位于Dicer基