组培实验室设计及设备配制（植物组织培养）

学习终极目标能设计组培实验室和组培苗生产小型工厂能熟练运用植物组培尤其是“无菌”概念设计组培室能运用组培生产工艺流程配置组培“四室”和相应仪器设备能使用主要设备，并运用原理进行维护和修理促成目标教学目标学习目标项目介绍

自20世纪60年代以来，植物组织培养已经从实验室研究阶段发展成为一种大规模成批量的工厂生产方法，在植物快速繁殖和种质保存等方面作出了巨大的贡献。因此设计建设能满足工艺要求、保证产品质量、降低能耗，提高经济效益的组培工厂就显得十分重要，本项目将从组培工厂的设计、组培工厂需配备的仪器设备以及设备的使用方法等方面进行阐述。工作任务工作任务

设计组培实验室和组培苗生产小型工厂

任务1使用超净工作台和灭菌锅等仪器设备任务2列出组培室常用仪器设备的名称和作用清单任务3写一份组织培养室注意事项任务4相关实践知识一、设计准备室温室驯化室培养室无菌操作室缓冲室组培室组培室设计及其基本设备（一）准备室作用：材料、培养器械的清洗、培养基准备、灭菌及组织学细胞学观察等的准备工作。准备室普通化学实验室（培养基配制室）细胞学实验室（根据需要设置）洗涤室灭菌室

普通化学实验室：仪器及设备、化学药品。纯水仪、冰箱、移液枪、过滤灭菌器、电炉、微波炉、磁力搅拌器、低速台式离心机、电脑等。作用：配制培养基。细胞学实验室：作用：细胞学和组织学观察。需备有高倍显微镜、体视显微镜、倒置显微镜、各种相机、恒温箱、切片机、恒温水浴、滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻片等。洗涤室：玻璃器皿、用具和培养材料的洗涤。设备：鼓风干燥箱等。

灭菌室：用于培养基、器械等材料灭菌。高压蒸气灭菌装置：如立式、卧式和手提式灭菌。作用：培养基、器械、棉塞、无菌纸等灭菌消毒。细菌过滤灭菌装置

：（二）缓冲室主要功能：用于无菌操作人员更换灭菌工作服、拖鞋，戴口罩。设施装备：紫外灯缓冲室作用：进行植物材料分离接种的重要场所，需长时间的无菌操作，对组织培养成功起关键作用。试验设施超净工作台

紫外灯

固定式和移动式载物台广口瓶、酒精灯、酒精棉、机械支架手术剪、解剖刀、解剖针、镊子等三、无菌操作室（四）培养室

作用：进行材料的培养的场所。其大小、规模可根据工作性质设定。以充分利用空间和节能为原则。设备：可调控光、温、湿度等设备。还有固定式培养架、转床、摇床。（五）驯化室主要功能：用于试管苗出瓶后的驯化。设施装备：空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、光照调节装置、通风口及杀菌剂。驯化室（六）温室

作用：培育组织与细胞培养出来的材料。组培工厂设计图9、天平10、显微镜11、水浴锅12、摇床或转床13、蒸馏水发生器14、酸度计15、离心机二、仪器设备和器皿用具1、超净工作台2、无菌箱3、空调4、除湿机5、恒温箱6、烘箱7、高压灭菌器8、冰箱（一）仪器设备超净工作台(alaminarflowhood)

超净工作台HolmesHAP-240HEPA空气净化器高压蒸汽灭菌器卧式灭菌锅立式灭菌锅手提式灭菌锅过滤灭菌器

滚动摇床空气浴摇床纸制品，干热灭菌烘箱（二）各类器皿1、培养器皿：试管、三角瓶、L和T形管、培养器皿、果酱瓶等2、分注器3、离心管4、刻度移液管5、细菌过滤器6、实验器皿：量筒、量杯、烧杯、吸管、滴管、容量瓶、称量瓶、试剂瓶等（三）器皿的洗涤洗涤方法：1、重铬酸钾洗液：饱和的重铬酸钾洗液：43克重铬酸钾溶于1000毫升馏水中（饱和溶液）。按1：1体积比将浓硫酸缓慢地倒入饱和重铬酸钾水溶液中。

流程：

（12h）

水洗晾干重铬酸钾洗液自来水冲净

蒸馏水洗两次干燥

2、洗涤剂：洗衣粉、洗液3、超声波洗净器：小型玻璃器皿，顽固性污渍。新的玻璃器皿：0.1﹪HCl浸泡12小时，洗衣粉、自来水洗、蒸馏水冲。污染的玻璃器皿：要先高压灭菌后，然后再刷洗。要避免交叉污染。1、镊子2、剪刀3、解剖刀4、接种环5、打孔器6、其他：酒精灯、电炉、磁力搅拌器、微波炉、蒸馏水瓶等。（四）器械用具常用工具酒精灯消毒工具问题探究一、组培工厂设计的原则及总体要求设计原则根据培养目的和规模来设计。流水线式设计布局合理。防止污染。降低成本、节能、安全。选址要求排灌水方便，远离污染源，水电供应充足，交通便利，周边环境清洁，地下水位在1.5m以下。各车间的大小与相对比例合理，在车间设计和设施设备的配置、摆放上与其功能相适应。建筑与装修材料要经得起消毒、清洁和冲洗总体要求二、高压灭菌锅的使用方法高压灭菌锅是一种密闭良好又可承受高压的金属锅分为两种：全自动高压灭菌锅和手提式高压灭菌锅。灭菌锅上有排气阀和安全阀。使用方法：全自动高压灭菌锅：1）加水淹没加热丝；2）放入需灭菌包扎好的器皿；3）在控制面板上设置好灭菌温度和时间。手提式高压灭菌锅：1）加水淹没加热丝；2）放入需灭菌包扎好的器皿；3）加热，当压力升至0.05MPa时，打开放气阀放气两次；4）继续加热并维持锅内压力在0.1—0.15MPa之间20分钟；5）降温，当压力降至0.05MPa时，打开放气阀，待压力降至0时，取出器皿。使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时应注意哪些事项?答:(1)加足水(2)灭菌开始排净冷空气;(3)灭菌终了,缓慢降压回零;(4)灭菌结束,趁热取出物品。高压灭菌的原理：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在108kPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。卧式灭菌锅知识拓展超净工作台的工作原理超净工作台将空气通过由特制的微孔泡沫塑料涂层叠合组成的“超级滤清器”后除去大于0.3um的尘埃、真菌和细菌孢子等吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，已达到台内无菌的状态。（1）每次使用超净工作台时，实验人员应先开启超净工作台上的紫外灯，紫外照射20min后使用。（2）开启超净工作台风机工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精喷洒擦拭消毒工作台面。（3）整个实验过程过程中，实验人员应按照无菌操作规程操作。

紫外灯超净工作台使用管理

（4）实验结束后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照射15分钟。

（5）如遇机组发生故障，应立即通知实验员，由专业人员检修合格后继续使用。

（6）实验人员应注意保持室内整洁。

（7）超净工作台的滤材每2-3年更换一次，并作好更换记录。项目小结

1.组培工厂应包括组培苗生产车间和驯化栽培区。其中组培苗生产车间主要包括洗涤车间、培养基配制车间、灭菌车间、接种车间、培养车间；驯