注射用辛芍(冻干粉针)安全性实验研究

注射用辛芍（冻干粉针）安全性实验研究【摘要】目的对注射用辛芍(冻干粉针)进行肌肉刺激性、血管刺激性、过敏性及溶血性实验，为其临床应用提供安全性实验依据。方法肌肉刺激性实验，观察3只家兔注射辛芍(冻干粉针)后48h的变化；血管刺激性实验，观察单次用药和连续用药5d注射用辛芍(冻干粉针)及生理盐水，恢复4d后的注射局部血管和周围组织反应情况；在全身过敏实验中，分辛芍组与阳性药物组，对豚鼠第1次腹腔注射给药后14d及21d，分别静脉注射用辛芍(冻干粉针)及阳性药，观察注射后15min动物的过敏症状；大鼠被动皮肤过敏实验，采用%伊文思兰溶液分析法；体外溶血实验，观察该品在3h内有无溶血和聚集现象。结果注射用辛芍(冻干粉针)对家兔股四头肌、耳缘静脉未见明显刺激作用，对豚鼠主动全身过敏反应及大鼠被动皮肤过敏反应均未见明显过敏反应；未见明显体外溶血作用。结论注射用辛芍(冻干粉针)的安全性实验结果提示其安全可靠。

【关键词】注射用辛芍安全性实验

注射用辛芍是由灯盏细辛和赤芍研制而成的中药冻干粉针剂，具有活血化淤、通经活络之功效，用于中风淤血阻络证，证见半身不遂、口眼歪斜、苔薄白或薄白腻、脉沉细等，以及脑梗塞有上述见证者。灯盏细辛有效成分主要为野黄芩苷等黄酮苷类化合物［1］，赤芍有效成分主要为芍药苷等苷类化合物［2］，多具水溶性，可制备成冻干粉针剂，该剂型能有效地提高药物的稳定性，保证制剂使用安全，质量稳定可控。为评价注射用辛芍是否符合静脉注射药物的安全性标准，为其进入临床应用提供实验依据，我们对注射用辛芍进行了安全性实验。现报道如下。

1材料1药物与试剂注射用辛芍(冻干粉针)，棕黄色粉末，200mg/瓶，由贵州百祥制药有限责任公司提供，批号20040518，实验时用%氯化钠注射液配成50ml备用。卵蛋白，上海伯奥生物科技有限公司产品，批号20031201，临用前用%氯化钠注射液配成%浓度用于豚鼠腹腔注射。百日咳菌苗，卫生部上海生物制品厂研究所产品，批号200303。伊文思蓝，中国医药(集团)上海化学试剂公司产品，批号030213。硫化钠，上海南汇区宣治化工厂产品，批号030212。％氯化钠注射液，南京小营药业有限公司产品，批号2005013009。2动物家兔、SD大鼠、豚鼠等均由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供，许可证号SCXK(沪)2003-0003。Beagle犬由南京新学人科技开发有限公司提供，许可证号SCXK2002－0028。

2方法

肌肉刺激性实验［3］取健康家兔3只，于本实验环境下饲养1周，以熟悉实验室条件。每只分别于一侧股四头肌处以无菌操作方法注射辛芍溶液1ml；另侧相应部位同法注射等容积灭菌生理盐水作为对照。正常供应饲料和水。48h后放血处死家兔，解剖股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，按表1换算成相应的反应级分值，并取受试部位的肌肉，用10%甲醛溶液固定，进行病理检查。

表1肌肉刺激反应分级标准

血管刺激性实验［4］取健康家兔6只，分为两组：①单次给药组：右侧耳缘静脉以无菌操作方法单次注射浓度为mg/ml的注射用辛芍ml/kg，左侧耳缘静脉注射等体积生理盐水注射液。②多次给药组：右侧耳缘静脉以无菌操作方法单次注射浓度为mg/ml的注射用辛芍ml/kg，左侧耳缘静脉注射等体积生理盐水注射液，1次/d，连续给药5d。上述两组均分别于末次给药后96h，肉眼观察注射部位有无红肿、充血等刺激现象，按表2换算成相应的反应级分值，并取注射部位血管，用10%甲醛溶液固定，进行病理检查。

表2血管刺激反应评分标准

主动过敏反应实验［3，5］取健康雄性豚鼠12只，体重250～300g。分成辛芍组和阳性药物组，按注射剂过敏实验的要求，分别给每组豚鼠隔日腹腔注射辛芍和卵蛋白ml，共注射3次，然后每组内分成两批，分别在第1次给药后14d和21d分别从颈静脉给予辛芍和卵蛋白1ml，观察豚鼠在静脉注射后15min内有无兴奋不安、抓鼻、竖毛、呼吸困难、痉挛、休克甚至死亡等过敏症状，持续观察3h。按表3分级，判定其反应级数。

表3豚鼠过敏反应级数

被动过敏反应实验［3，6］

大鼠含IgE的抗血清制备取3只健康雄性SD大鼠，按注射剂大鼠同种被动皮肤过敏实验的要求，分别后肢肌肉注射辛芍ml/kg、%的卵蛋白溶液5ml/kg、生理盐水5ml/kg，同时腹腔注射百日咳疫苗1ml/只。13d后眼眶取血，分离得血清备用。

大鼠同种被动皮肤过敏反应实验取24只健康雄性SD大鼠，于本实验环境下饲养1周，并观察自主活动及一般状况。随机分成辛芍组、阳性药物组(卵蛋白组)和空白对照组。在背中线两侧距脊柱约cm处用8％的硫化钠溶液脱毛，每侧2点，间隔2cm。取上述含IgE的血清，用生理盐水分别稀释为1∶5，1∶10，1∶20，1∶40倍，按不同浓度次序，分别皮内注射于各组大鼠去毛各点。48h后，辛芍组静脉注射%伊文思蓝溶液1ml，阳性药组静脉注射%伊文思蓝溶液1ml，空白对照组静脉注射%伊文思蓝溶液1ml。30min后处死动物，检查注射各点的蓝色反应斑。

溶血性实验［7］取健康家兔1只，自心脏取血约20ml，置于预先放有玻璃珠的三角瓶中，搅拌去纤维蛋白，然后将血移入刻度离心管内，加入生理盐水5～l0ml，混匀后离心5min(2000～2500r／min)，去除上清液，再加生理盐水混匀离心，反复洗3～4次，至上清液无色透明，将所得红细胞按其容积用生理盐水稀释成2％的混悬液。取试管7支，编号排列于试管架上，按表4加入各种溶液，第6管不加注射用辛芍(冻干粉针)药液作为空白对照管；第7管不加药液，用蒸馏水代替生理盐水，作为溶血的阳性对照组，将各管轻轻摇匀，在37℃恒温箱中进行温育，观察24h有无溶血情况，记录实验结果。各管配比量见表4。

表4各管溶血实验配比量

全溶血：溶液澄明红色，管底无细胞残留。部分溶血：溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留。无溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。凝集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。

3结果

肌肉刺激性实验注射后不同时间观察结果表明股四头肌表面未见明显充血，红肿，家兔活动正常，未见明显异常反应。3只家兔48h后健康如常，解剖观察股四头肌，给药部位均未见红肿、充血等现象，评分0级。病理检查表明：对照侧和给药侧注射部位股四头肌结构清楚，肌纤维呈束状，肌膜完整，间质内未见明显炎细胞浸润。实验结果表明，注射用辛芍(冻干粉针)对家兔股四头肌注射部位无明显刺激性。

血管刺激性实验单次给药组和多次给药组6只家兔耳缘静脉注射部位均未见红肿、充血等刺激现象。病理检查表明,给药组和对照组家兔耳缘静脉注射部位血管结构完整，管腔无明显扩张、变性、坏死，静脉壁及其周围组织无明显炎细胞浸润，官腔内无明显血栓形成。实验结果表明，注射用辛芍(冻干粉针)对家兔耳缘静脉无明显刺激性。

主动过敏反应实验注射用辛芍(冻干粉针)组豚鼠分别于第1次给药后14d及21d，由足背静脉注射注射用辛芍(冻干粉针)1ml，注射后豚鼠均未出现兴奋不安、呼吸困难、抓鼻、颤抖、竖毛、痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡等过敏反应，判定为0级，提示注射用辛芍(冻干粉针)未见全身主动过敏反应；而阳性对照组豚鼠分别于第1次给药后14d及21d，足背静脉注射%卵蛋白1ml，注射后两批豚鼠在5min内均出现兴奋不安、呼吸困难、抓鼻、颤抖、竖毛、痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡等过敏反应，判定为4级。

被动过敏反应实验注射用辛芍(冻干粉针)组、空白对照组大鼠背部皮肤均未见明显蓝色反应斑点。而阳性对照组8只大鼠背部1∶5，1∶10注射点均出现明显蓝色反应斑。结果表明，注射用银杏达莫辛芍(冻干粉针)无明显同种被动皮肤致敏作用。

溶血性实验第7管(阳性对照管)溶液呈现澄明红色，其余6管均末见澄明红色，红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。结果见表5。结果表明注射用辛芍(冻干粉针)无溶血和凝集反应。

表5不同时间点溶血实验结果

“－”表示无溶血或凝集反应，“＋”表示有溶血或凝集反应

4讨论

由于中药制剂的活性成分及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质(如pH值、渗透压等)均有可能引起刺激性和／或过敏性和／或溶血性和／或热原反应的发生，而严重的毒性可以影响用药的安全有效性，因此药物在临床应用前应该研究其制剂在给药部位使用后引起的局部和／或全身毒性，以提示临床应用时可能出现的毒性反应、毒性靶器官、安全范围、临床研究监测指标并为临床解毒或解救措施提供参考，保障临床用药的安全有效。综合考虑以上各实验的结果，以便为药物的临床研究与应用提供一定的药物毒理学基础。

本次实验的受试药物注射用辛芍(冻干粉针)对家兔肌肉注射、静脉注射给药后未见明显肌肉、血管刺激性；豚鼠静脉注射后未见明显全身主动过敏反应；也未见明显大鼠同种被动皮肤过敏；对红细胞未见明显溶血和凝集作用。以上结果提示注射用辛芍(冻干粉针)安全性较好，为其临床应用提供实验依据。

【参考文献】

［1］吕曙华，解军波，吕归宝．灯盏细辛的研究进展［J］．天津药学，2003，15(2)：46．

［2］阮金兰，赵钟祥，曾庆忠，等．赤芍化学成分和药理作用的研究进展［J］．中国药理学通报，2003，19(9)：965．

［3］中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则课题研究组．中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则(第3稿)［S］．北京：中国食品药品监督管理局，2005：12．

［4］王北婴．中药新药研制与申报［M］