显微技术作业-课后作业C

生物电子显微技术作业课后作业C1.简述超高压电子显微镜的优点，以及切片与一般超薄切片的不同样。答：超高压电镜不仅分辨率高、单色性好，而且电子穿透力强，对资料的伤害较小，能够观察较厚的资料μm)，场深大，成像有立体感，而且不会影响分辨率。主要用于观察资料、矿物、生物样品、器件透射电子显微象及电子衍射图，对样品微观组织、结构、弊端等定性、定量解析。可对样品在加热、拉伸、电子辐照等条件下微观组织的变化过程进行动向观察。一般透射电镜观察样品时，电子束没法穿过mm以上的切片，因此需将样品切成50~70nm的薄片才能观察。与光镜观察的3~7mm切片比较而言，常将透射电镜的切片称为超薄切片。用于超高压电镜的厚切片制备与一般超薄切片相似，可是有一些特别要求:其切片资料的制备与一般电镜有所不同样。样品块要相对软一些，以保护刀口和便于制作连续切片。覆盖的支持膜要厚，并喷碳加固，以抗高压电子轰击。采用折叠式载网或单缝载网，以防切片零散和阻截视野。采用淹没法染色，并适合延长染色时间。包埋前可先进行整体染色。比较透射电镜与扫描电镜在观察收效和研究用途上的不同样它们各自的优弊端是什么透射电镜扫描电镜观察收效电子显微镜是使用电子来显现它能够直接观察直径物件的内部或表面的显微镜。100mm，高50mm，或更大高速的电子的波长比可见光的尺寸的试样，对试样的形波长短（波粒二象性），而显状没有任何限制，粗糙表微镜的分辨率受其使用的波长面也能观察，这便免除了的限制，因此电子显微镜的理制备样品的麻烦，而且能论分辨率（约纳米）远高于光真实观察试样自己物质学显微镜的分辨率（约200纳成分不同样的衬度（背反射米）。分辨率为～，放大倍数电子象）。分辨率可达为几万～几十万倍3-10nm,放大倍数可达10万倍研究用途用以观察为亚显微结构或超微主若是用来观察物体表结构。面超微形态,适合观察固观察样品面貌、原位解析样品态的生物质料,也能够观的晶体结构察生物质料断面或剥蚀面的结构（亚细胞形态），但是需要起初进行切割或蚀刻办理。有时甚至也可进行细胞化学标记物的形态观察。由于拥有很高的分辨率，多以被广泛用于观察纳米资料。优点1.制样过程对芯片内部结构影1.拥有很高的分辨率响较小2.制样方便，制样周期2.透射电子穿过样品内部，同短，有时能够作非破坏性样品内部的所有东西发生相互的解析作用，从而直接获得内部结构3.观察范围大，倍率变化信息，因此获得综合的高分辨大，立体感强，景深大，率结果观察收效好3.易于调整，经过改变线圈中流过电流的强度，能够改变磁场强度，达到变化折射率和焦距的目的4.像差较小，且较为简单除掉或校正5.对电子束流的能量耗费小弊端1.结构复杂，对制作资料的纯1.只幸亏样品表面扫描，度、元件几何形状尺寸的加工信号来自样品表面，不能够精美度等都要求极高获得样品内比较深的部2.制样的技术难度大，观察点位的情况的定位难，有时需借用聚焦离2.显微像一般不包括结子束刻蚀才能完成构信号，不能够区分单晶、3.解析周期长多晶、非晶，不能够区分位4.成本较高错、层错、晶界等3.不适合厚度在微米以下的薄膜的解析需求采用低温办理制作电镜样品的优弊端是什么优点弊端固定形态和结构，且固化结构使之易低温办理依旧不能够解决永久活体，而且于进一步办理制作过程简单产生冷冻伤害和干燥损2.在保存生物活性的基础上储蓄生物伤。而且切片太厚，不能够做连续切片，资料而且简单破碎。在制作冷冻超薄切片晌，不需经化学药剂固定、脱水、过渡、聚合等，减少了办理过程造成的阎像为什么要采用临界点干燥来办理扫描电镜样品哪些资料不用临界点干燥来办理也能获得满意的图像答：临界点干燥就是利用物质在临界状态下，液体表面张力除掉的特点，战胜样品干燥过程中所发生的变形，保持样品原状，达到干燥的目的。其原理是在必然的温度和压力下，物质的液态平和态界面将会消失，液态刹时转变成气态，形成非液非固的状态，即达到临界点（）状态。在临界点时，表面张力消失，分子间的内聚力等于零，因此，利用临界点状态对资料进行干燥，资料理论上不会产生缩短和形变，对于质地较软的资料这种方法是最好的干燥方法。因此说，对于比较坚硬的资料，及时不使用临界点干燥法也能够实现较好的图像观察。查找采用了低温制样技术的研究文件，采集精良图片，解析这些工作的技术难点和公布图片的质量。答：技术难点：1、冰晶冰晶是组织在冷冻固化过程中,由于冷冻缓慢,冷冻时间过长,使细胞质和组织缝隙内未结合的水逐渐析出形成解决方法:取材大小、厚薄要适合,过大过厚影响冷冻速度。2、组织挤压、皱缩。常有于组织结构软硬不同样的组织，如皮肤。解决方法：将表皮面放在标本的上端,先切较软的皮下组织,依次切真皮、表皮,同时用毛笔轻轻张开,或用抗卷板才能切出完满的切片3、冷冻切片一般不会脱片,偶见于坏死组织或含水量大的组织,如子宫肌瘤黏液变性时。解决方法:第全部片不能够太厚,其次切片固定后用吹风机吹干再染色。4、甲状腺等有腔洞的组织，组织冷冻过头,使之发脆就会破碎形成空洞,这时可用手贴在组织上或用嘴向组织哈气略加温使其消融即可切出完满的切片。5、组织贴附不平也许有皱褶切片切好后用载玻片贴片晌手不能够颤抖,而且在贴附组织时手要有一个向下伸展的动作。文件一密方元,李凤山,马邦磊,钱宁.冷冻切片5min快速制片染色法.临床与实验病理学杂志，2009，Oct25.图1A进口OCT包埋的腮腺混杂瘤冷冻切片B胶片包埋的腮腺混杂瘤冷冻切片图2肾粗针穿刺小标本,先制成冷冻图3脂肪组织冷冻切片,脂肪细胞组织结构平后做冷冻切片,保持了组织保持完满，细胞界线清楚，染色娇艳图4甲状腺组织,HE染色前未经二图5甲状腺组织,HE染色前经二甲苯脱脂甲苯脱脂办理,胞核较模糊办理后，胞核、质结构清楚、透明我认为这几张图片比较好，清楚，甲状腺组织切片中破碎形成空洞，染色很均匀。文件二胥维勇，杨红，李科，杨群.介绍一种FAAPT冷冻切片快速固定液.临床与实验病理学杂志.2002Apr;18大纲手术中冷冻切片的病理诊断是依照冷冻切片组织学形态来进行,以确定病变组织的良恶性为目的。制作冷冻切片包括制片、固定、染色三个环节,在冷冻切片中固定液的选择是不能忽视的一个因素。我们在工作中经屡次试验在众多固定液中选择FAA液(福尔马林-醋酸-乙醇),经改良配成一种适