重组技术的基本工具动画很经典详解

重组技术的基本工具动画很经典详解演示文稿目前一页\总数二十三页\编于六点优选重组技术的基本工具动画很经典目前二页\总数二十三页\编于六点基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程实质结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人们需要的新的生物类型和生物产品剪切→拼接→导入→表达基因重组基因工程的概念预习目前三页\总数二十三页\编于六点1DNA重组技术的基本工具第1节目前四页\总数二十三页\编于六点DNA重组技术的基本工具准确切割DNA的工具（“分子手术刀”）——限制性核酸内切酶DNA片段的连接工具（“分子缝合针”）——DNA连接酶基因转移工具（“分子运输车”）——基因进入受体细胞的载体目前五页\总数二十三页\编于六点来源种类作用作用结果阅读课本4-5页“限制性核酸内切酶——分子手术刀”的相关内容，填写下表自主学习主要从原核生物中分离纯化而来已经分离出大约4000种1、识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列2、使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。形成两种末端：黏性末端或平末端目前六页\总数二十三页\编于六点3’,5’-磷酸二酯键磷酸二酯键目前七页\总数二十三页\编于六点8仔细观察各限制酶识别的特定序列有何特点？限制酶的识别序列限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为回文序列目前八页\总数二十三页\编于六点大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。目前九页\总数二十三页\编于六点

黏性末端黏性末端EcoRI限制酶的切割

被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。目前十页\总数二十三页\编于六点平末端平末端SmaI限制酶的切割当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。目前十一页\总数二十三页\编于六点大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。目前十二页\总数二十三页\编于六点你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。寻根问底为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。目前十三页\总数二十三页\编于六点例1．下图表示限制酶切割某DNA的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列及切点是（）A．CTTAAG，切点在C和T之间B．CTTAAG，切点在G和A之间C．GAATTC，切点在G和A之间D．CTTAAC，切点在C和T之间例2：下列黏性末端属于同一种限制性内切酶切割的是（） A．①② B．①③ C．②④ D．③④

目前十四页\总数二十三页\编于六点15类型来源功能相同点差别E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)阅读课本第5页“分子缝合针”——DNA连接酶的相关内容，填写下表自主学习目前十五页\总数二十三页\编于六点两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来DNA连接酶的缝合作用可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！目前十六页\总数二十三页\编于六点DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低DNA连接酶的缝合作用目前十七页\总数二十三页\编于六点DNA连接酶DNA聚合酶相同点作用实质化学本质不同点模板作用对象

作用结果 用途都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质

不需要需要形成完整的重组DNA分子形成DNA的一条链基因工程DNA复制DNA连接酶与DNA聚合酶的比较只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键目前十八页\总数二十三页\编于六点作用：将外源基因送入受体细胞。运载体思考：1.假如目的基因导入受体细胞不能复制将怎样？2.作为载体没有切割位点（即限制酶切点），将会怎样？3.目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？4.如果载体对受体细胞有害将会怎样？目前十九页\总数二十三页\编于六点1.能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2.具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。3.具有某些标记基因，便于进行筛选。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。4.对受体细胞无害。作为运载体需要什么条件吗？（二）种类：细菌的质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。目前二十页\总数二十三页\编于六点有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。有切割位点能复制并带着插入的目的基因一起复制质粒——裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。最常用运载体——质粒

实际上在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。目前二十一页\总数二十三页\编于六点例3．下列哪项通常不被用作基因工程的运载体A．细菌质粒B．噬菌体C．动植物病毒D．细菌核区的DNA例4．以下说法正确的是()A．限制酶与DNA连接酶作用的化学键不相同B．质粒是基因工程中惟一的运载体

C．运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D．限制性核酸内切酶的操作对象是原核细胞

DC目前二十二页\总数二十三页\编于六点为什么能把一种生物的基因“嫁接”到

另一种生