自身抗体和风湿病临床

自身抗体和风湿病临床第一页，共86页。风湿病诊断

—实验室检查及其他特殊检查一般性检测：常规血、尿液、肝肾功能检查免疫功能检查：免疫球蛋白、补体、T细胞亚群特异性检查血清自身抗体、HLA检测、关节液等影像学检查Xray，MRI,超声等关节镜与滑膜活检病理检查：Noninflammatoryonleft

Inflammatoryonright第二页，共86页。自身抗体与分类命名自身抗体（autoantibodies）：各种原因造成B细胞产生针对自身组织成分的抗体。生理性（亲和力、滴度、阈值），病理性。分类：按照自身抗体在体内分布分为器官/组织特异性抗体和非器官/组织特异性抗体。按照基质不同分为细胞特异性抗体和非特异性抗体等等。细胞抗体主要为非器官/组织特异性抗体，组织抗体主要为器官/组织特异性抗体。命名：以抗体在细胞和组织位置命名（胞浆、核、核仁、线粒体），以靶细胞和靶组织命名等等。以患者名字命名（Sm、Ro）以疾病名字命名（SS-A、Scl-70）以抗原的化学性质命名（RNP、DNA）以抗原的部位命名（Anti-mDNA）。第三页，共86页。

自身抗体检测方法免疫荧光法（immunofluorescence,IF)酶联免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)被动血凝法(passivehemagglulination,PHA)颗粒凝集法(particleagglutination,PA)对流免疫电泳法(countercurrentimmunoelectrophoresis,CIE)免疫双扩散法(agargeldoubleimmunodiffusion,IDorDID)免疫印迹法(immunoblotting,IB)免疫沉淀法(radioimmunoprecipitationassy,RIP)斑点酶免疫渗透试验(dotimmunoenzymefiltrationassy,DIEFA)斑点金免疫结合试验(dotimmnuogoldfiltration,DIGFA)第四页，共86页。间接免疫荧光法原理第五页，共86页。荧光显微镜下ANA的染色型别均质型：与抗组蛋白和抗DNA有关斑点型：与抗ENA有关周边型：与抗dsDNA有关核仁型：4-6sRNA着丝点型：在SD及CREST中出现第六页，共86页。ANA：均质型EUROIMMUN抗核抗体第七页，共86页。ANA：斑点型EUROIMMUN抗核抗体第八页，共86页。ANA：核膜型EUROIMMUN抗核抗体第九页，共86页。 WesternblotHEp-2cellextract免疫印迹法检测ENA原理第十页，共86页。国内现状自身抗体的测定不普遍欠规范对其意义了解尚少缺乏研究第十一页，共86页。自身抗体测定准确率欠佳的原因分析1.测定方法不规范

底物选择(鼠肝、Hep-2);

试验方法(IIF、ELISA、IB)2.试剂(盒)标准化问题

厂家不同，质量参差不齐3.技术人员专业水平

严格的培训；操作方法及结果判定的差异第十二页，共86页。

表1放置4℃1d、3d、5d、7d、14d时血清APF转阴率

Table1LostofpositiverateofAPFafterserumhadbeen

separatelystoredfor1,3,5,7,14daysat4℃

aP<0.01vscontrols第十三页，共86页。

表2室温分别放置1d、2d、3d、5d、7d时血清APF的转阴率

Table2LostofpositiverateofAPFafterserumhadbeenseparately

storedfor1,2,3,5,7daysatroomtemperaturea

P<0.01与对照组转阴率的比较值第十四页，共86页。2、抗原底物在不同温度保存不同时间对血清APF的检出率影响

将抗原片于4℃保存至3天时已出现APF的检出率的丢失（10%），无统计学意义；到5天后已有35%的检出率的丢失，具有统计学意义（P<0.05）；放置7天后检出率的丢失为40%，统计学意义显著（P<0.01）；放置14天检出率的丢失已有一半（见表3）。而在-20℃下保存2周内检出率无变化。第十五页，共86页。

表34℃时抗原底物保存时间对血清APF的检出率影响

Table3Influenceoftimeofantigenicsubstratebestoredontheoccurrence

ofAPFinserum

aP<0.05vscontrols,

bP<0.01vscontrols第十六页，共86页。ANA检测的意义有助于疾病的诊断，如抗Sm是SLE标记抗体；抗ScL-70是SD的标记抗体，抗Jo-1是PM/DM的标记抗体观察疾病活动度和治疗反应研究发病机理第十七页，共86页。几种核抗原分子特性第十八页，共86页。几种核抗原分子特性第十九页，共86页。

抗核抗体新概念（FANA）传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称

狭义定义现代定义：是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸(nucleicacid)和核蛋白（nucleoprotein)抗体的总称

广义定义

靶抗原分布：细胞核

细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期第二十页，共86页。ANA由来中性粒细胞DNP(DNA-Histone)+抗DNP+补体均质体LE细胞LE细胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等结缔组织病，药物过敏，慢活肝等亦可阳性。抗DNP取代LE细胞的检测+第二十一页，共86页。抗核抗体的分类1.抗DNA抗体抗双链DNA(dsDNA)抗体抗单链DNA(ssDNA)抗体抗左旋DNA(z-DNA)抗体2.抗组蛋白抗体总组蛋白抗体（AHA）

H1、H2a、H2b、H3、H43.抗非组蛋白抗体

抗可溶性核抗原(ENA)抗体：Sm、RNP、SSA、SSB、Scl70、Jo-1、pM-1、PCNA、RANA、Ku、Mi-1、-2抗体、DNP抗体等。

抗着丝点抗体(ACA)4.抗核仁抗体:

抗5rRNA、核小体、U3nRNP、Nor-90抗体。5.抗其它细胞成分:

线粒体、中心体等。抗核抗体第二十二页，共86页。第二十三页，共86页。第二十四页，共86页。类风湿因子

（RheumatoidFactor）抗人或动物的IgG的FC片段抗体。其本身是免疫球蛋白，因此，RF有IgG、IgM、IgA型等。RF无种族和种属特异性与DNP及半抗原（二硝基苯）有交叉反应。7SIgM(IgG)-RF主要参与关节外症状的免疫复合物形成，且与疾病活动性有关第二十五页，共86页。如何评价类风湿因子是诊断RA的标准之一，不是唯一标准，并非RA特有作为血清阴性脊柱关节病区分标准正常人2%阳性，老年人可达5%阳性RF与其他蛋白、半抗原有交叉反应多种结缔组织病（SLE，SD，SS，PM/DM）感染疾病（SBE，TB，hepatitis）,肝硬化，弥漫性肺纤维化，结节病等均可阳性病后半年才产生，有关节外表现者，滴度高。持续高滴度RF预示疾病严重，预后差第二十六页，共86页。类风湿关节炎的自身抗体名称敏感性(%)特异性(%)类风湿因子RA33/36抗体Sa抗体抗角蛋白抗体抗核周因子抗CCP抗体抗CB10抗体抗BiP抗体50--7025-45373338-6260-7072708693.678-9787-9270-909670-8892自身抗体与风湿病第二十七页，共86页。62.374.384.3405060708090RFCCPRF/CCP敏感度（%）不同抗体检测的敏感度聚丝蛋白抗体群第二十八页，共86页。不同抗体在RA诊断中的意义阳性抗体RA%(n=114)对照%(n=93)敏感度%特异度%阳性预测值%RF711762.381.780.6CCP84574.394.694.3RForCCP962084.398.482.7RF+CCP59251.797.896.7聚丝蛋白抗体群第二十九页，共86页。系统性红斑狼疮的自身抗体抗体敏感性(%)特异性(%)抗核抗体(ANA)dsDNA抗体抗Sm抗体膜DNA抗体核小体抗体U1RNP抗体SS-A抗体SS-B抗体抗心磷脂抗体类风湿因子PCNA抗体组蛋白抗体核蛋白抗体809599949287-947040753095505099702578855025-351520-4025530-8058自身抗体与风湿病第三十页，共86页。抗双链DNA抗体

（短膜虫免疫荧光法1:5）第三十一页，共86页。抗组蛋白抗体

（酶联免疫吸附法X2SD)系统性红斑狼疮 50%其他结缔组织病 23-30%服异烟肼12月以上 53%服苯妥因钠6月以上 18%服他巴唑6个月 0活动期SLE90.2%阳性第三十二页，共86页。

抗H1H2AH2BH2A-H2BH3H4系统性红斑狼疮+++++++++++ 长期服异烟肼+++++++++++++ 类风湿关节炎+++ + ++ SLE以IgG型抗组蛋白抗体为主，而长期服烟肼及RA病人以IgM型为主抗组蛋白抗体

（免疫印迹法）第三十三页，共86页。几种ENA的由来及同义词Sm：病人名：SmithRNP:u1RNP或nRNPNuclearRibonucleoproteinSSA:ROSjogren’ssyndromeASSB:La,Ha,Sjogren’ssyndromeBJo-1:病人JohnScL-70:Scleroderma第三十四页，共86页。常见结缔组织病的抗核抗体的阳性率

ANAdsDNAHistoneSmnRNPSSASSBScL-70Jo-1着丝点核仁SLE90（62）50（25）4039100006SS501530014（75）（59）0009SD75527012195300（20）（39）PM/DM501305000(20)010RA2310230020500015++有指端硬化ANA1:40（+），抗dsDNA30%(或1：5）（+）第三十五页，共86页。磷脂抗体

（Phospholipidantibody）

多见于SLE（70%），SS、白塞病、自身免疫性血小板减少、真性红细胞增多、免疫性血管炎、习惯性流产、恶性肿瘤、多发性硬化、传染性疾病、肾上腺出血和Addison病均可阳性第三十六页，共86页。抗磷脂抗体检测包括：狼疮抗凝物；抗心脂抗体，梅毒血清试验假阳性。抗磷脂抗体还有抗磷脂氨酸（Anti-phosphotidylserine）和抗磷脂酸（Anti-phosphtidilacid）抗体等。第三十七页，共86页。抗磷脂抗体检测磷脂基因中具有抗原性：心磷脂、磷脂碱、酰丝氨酸、酰肌醇脂和酰乙醇脂等β2GP1（载脂蛋白）与磷脂结合，使其改变表面结构，暴露中被识别的抗原决定簇，而呈现磷脂抗体特性。β2GP1是必需的辅助因子，测β2GP1可能比测ACL更有意义。第三十八页，共86页。干燥综合征的自身抗体自身抗体阳性率(%)ANA抗SSA抗体抗SSB抗体

抗a-胞衬蛋白抗体抗M3受体抗体

类风湿因子ANCA抗M2抗体ACA抗RNP抗体60-8050-7030-60

65-8792

60-8010-251327

自身抗体与风湿病第三十九页，共86页。其他风湿病的自身抗体硬皮病(PSS)

皮肌炎/多肌炎(DM/PM)

血管炎

抗磷脂抗体综合征

混合性结缔组织病(MCTD)Scl-70抗体抗着丝点抗体(ACA)抗核抗体(ANA)

PM-1抗体Jo-1抗体抗核抗体(ANA)

抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)抗内皮细胞抗体(AECA)

抗磷脂抗体(Acl)狼疮抗凝物质

U1RNP抗体(70kd)抗核抗体(ANA)自身抗体与风湿病第四十页，共86页。抗中性粒细胞胞浆抗体

(ANCA)靶抗原：中性蛋白酶3（PR3），髓过氧化物酶（MPO），杀菌/通透性增高蛋白（BPI），丝氨酸蛋白酶，人白细胞弹性蛋白酶（HLE），乳铁蛋白（LF），组织蛋白酶G，β葡萄糖醛酸酶，溶菌酶第四十一页，共86页。抗中性粒细胞胞浆抗体

（Anti-NeutrophilCytoplasmicAntibody,ANCA）

cANCA(PR3蛋白酶)中性粒细胞胞浆内荧光染色，其抗原是中性粒细胞颗粒内的和单核细胞溶酶体的丝氨酸蛋白酶，此种抗体主要与Wegener’s肉芽肿相关，且与疾病活动性相平行，结节性多动脉炎也可阳性。第四十二页，共86页。抗中性粒细胞胞浆抗体

（Anti-NeutrophilCytoplasmicAntibody,ANCA）

pANCA（MPO）指核周染色，并非周边型核抗体。其抗原是胞浆内髓过氧化物酶，弹力蛋白酶及某些成分，此种抗体与特发性新月体肾小球肾炎相关，且与疾病活动度相平行。显微镜下多动脉炎，结节性多动脉炎也与之有关第四十三页，共86页。

类风湿关节炎抗CCP抗体、BiP抗体、AFA、抗GPI抗体、抗CB10抗体

系统性红斑狼疮

抗膜DNA抗体、抗核小体抗体、Hu抗体、SmD1抗体

干燥综合征

抗M3抗体

、抗a-胞衬蛋白抗体、抗b-胞衬蛋白抗体

其他

AECA、抗Sp100抗体、抗Calpastatin抗体、抗a-enolase抗体新发现的自身抗体自身抗体与风湿病第四十四页，共86页。RA实验室及特殊检查类风湿因子（RF）RF分RF-IgGRF-IgARF-IgM，胶乳凝集法测出的主要是IgM型RF，ELISA法可进一步检出其它型临床意义：类风湿关节炎（阳性率70%）其它自身免疫性疾病（SLE、干燥综合症等）可阳性慢性活动性肝炎、某些感染性疾病（传染性单核细胞增多症、结核病感染性心内膜炎等）也可出现阳性

第四十五页，共86页。RA实验室及特殊检查RA早期诊断指标抗CCP抗体抗MCV抗体抗角蛋白抗体（AKA）以上抗体中两项同时阳性者91.3%可确诊RA第四十六页，共86页。抗聚丝蛋白抗体群第四十七页，共86页。1997抗聚丝蛋白抗体群的抗原决定簇与瓜氨酸残基有关1993APF的抗原为前聚丝蛋白部分去磷酸化产物1979发现以鼠食管角质层为底物的RA特异性的抗体AKA1964发现以颊粘膜上皮细胞核周围的角质透明蛋白颗粒为底物的RA特异性抗体APF抗聚丝蛋白抗体群研究回顾1999发现抗CCP对RA的特异性聚丝蛋白抗体群第四十八页，共86页。…NovelexcitingantibodiesinRheumatoidArthritis抗核周因子（APF）抗角蛋白抗体（AKA）抗聚丝蛋白抗体（AFA）抗CCP抗体

对应抗原颊黏膜前聚丝蛋白部分去磷酸化产物

聚丝蛋白的核心抗原多肽衍生物

抗聚丝蛋白抗体群食道上皮前聚丝蛋白及其中/酸性异构体

纯化聚丝蛋白聚丝蛋白抗体群第四十九页，共86页。

抗P68抗体

新的类风湿关节炎特异性抗体第五十页，共86页。

抗BiP抗体新的类风湿关节炎特异性抗体`

以HeLa细胞为底物，分别加入待测血清和FITC标记的山羊抗人IgG,各在室温下孵育1小时，然后在荧光显微镜下观察（40×10),图为抗BiP抗体阳性的荧光核型P68第五十一页，共86页。抗P68抗体在各种风湿性疾病中的阳性率第五十二页，共86页。抗P68抗体在RA的敏感性和

特异性

敏感性为67.76%

特异性为91.28%BiP第五十三页，共86页。抗P68抗体和其他自身抗体敏感性及特异性的比较类风湿关节炎第五十四页，共86页。抗P68抗体在血清阴性RA患者的阳性率

项目

例数P68抗体阳性组例数%RF（-）544379.6APF（-）592440.7AKA（-）512243.1CCP（-）8450RA33（-）131076.9HRFIgG（-）461839.1HRFIgA（-）452248.9第五十五页，共86页。类风湿关节炎的新抗原(1)抗原主要来源致病机制与临床的关系HCgp-39(YKL-40)软骨基质炎性细胞释放增加，参与组织重建、基质降解与RA活动度有关Aggrecan同上激活T细胞及抗体反应？P205滑膜细胞诱导RF产生，刺激T细胞扩增？Osteopontin骨、软骨、滑膜促进细胞粘附、迁移、血管生成及软骨凋亡和骨重建可能与疾病活动有关P68胞浆、内质网结合免疫球蛋白，促进吞噬，激活T细胞抗体阳性率64%，特异性99%，可见于RF阴性RAcalpastatin胞浆、胞核对calpain的抑制减弱，蛋白降解增加针对不同结构域的抗体阳性率、特异性报道不一，可见于早期RAGPI胞浆关节表面免疫复合物沉积，补体激活，介导炎细胞迁移抗体阳性率64%第五十六页，共86页。FRP胞核减少滑膜细胞基质金属蛋白酶及前列腺素E2的产生。与病情活动有关A2hnRNP胞核剪接体结构,分子模拟、决定基扩展抗体阳性率33.6%，见于早期RAgp130IL-6靶向细胞表面即IL-6受体β链，可溶性gp130抗体促进IL-6活性与病情活动有关HLA-DR4/1片段APC表面含QK/RRAA，分子模拟和模糊识别机制RA易感基因，与骨质破坏、抗体滴度有关filaggrin角质细胞透明颗粒脱亚氨基修饰后诱导T、B细胞免疫与病情活动有关变性IgG角质细胞透明颗粒免疫复合物沉积、激活补体RF见于约80%RA，与疾病活动有关HSP60细菌高度保守，分子模拟？gp110EBV含QKRAA表位，分子模拟？VP-1/NS-1细小病毒B19激活T、B细胞？MAM结核杆菌超抗原，多克隆T细胞激活？类风湿关节炎的新抗原(2)第五十七页，共86页。类风湿关节炎的其他抗体抗核周因子抗RA33/抗RA36抗Sa抗体6磷酸葡萄糖异构酶（6GPI）。。。。。。第五十八页，共86页。核小体结构如图所示第五十九页，共86页。抗核小体抗体和其他抗体的敏感性和特异性比较

阳性例数

敏感性%

特异性%

AnuA

37

67.3

97.4

dsDNA

25

45.5

95

Sm

15

27.3

99

AHA

18

32.7

30

DNP

15

27.3

80

AnuA第六十页，共86页。AnuA与dsDNA的关系

NAnuA(+)AnuA(-)阳性率%

dsDNA(-)30171356.7dsDNA(+)25205

阳性率%27.8AnuA第六十一页，共86页。

统计学上差异显著（r=0.322,p=0.016）AnuA与SLEDAI评分的关系AnuA第六十二页，共86页。抗细胞膜DNA抗体

(mDNA)新的系统性红斑狼疮特异性抗体第六十三页，共86页。以Raji细胞为底物抗mDNA抗体核型第六十四页，共86页。抗mDNA抗体在不同疾病的阳性率

组别例数抗mDNA阳性例数%

SLE20715273.4

SS7268.3RA6334.8AS3200正常人8200

注：SLE与各组比较P值均<0.01cmDNA第六十五页，共86页。

抗mDNA抗体和其他抗体的比较

自身抗体检测例数阳性例数敏感性%特异性%

mDNA207

15273.496.4AnuA72

103

67.397.4ds-DNA158

56

35.496.9AHA1395136.764.9DNP1494630.981.6Sm1573824.295cmDNA第六十六页，共86页。抗mDNA抗体在血清阴性SLE中的阳性率

抗体例数抗mDNA抗体阳性例数%

Sm阴性

1037370.9ds-DNA阴性886068.2DNP阴性926873.9AHA阴性765268.4AnuA阴性241354.2

cmDNA第六十七页，共86页。

抗体靶抗原意义方法SmRNA和核蛋白SLE标记抗体，阳性20~40%双向免疫扩散U1RNP小核糖核蛋白MCTD阳性>90%;SLE﹑SS﹑SSc﹑PM/DMDID;EIASSA(Ro)小细胞质核糖核蛋白PSS40~95%;SCLE70~90%DID;EIASSB(La)小细胞核核糖核蛋白SS高度特异性DID;EIArRNP60S核糖体大亚基SLE高度特异性抗体，阳性10~40%。与脑病有关。EIAScl-70拓扑异构酶1SSc特异性抗体,预后不良。EIAJo-1tRNA合成酶PM/DM标记抗体20~30%DID,IB

ENA多肽7项是目前临床最多应用于风湿病检查的项目

5/20/202368临床常用免疫学检查第六十八页，共86页。类风湿因子 72％抗核抗体 92％抗SSA 80％抗SSB 40%抗线粒体 20％抗甲状腺抗体 50％抗唾腺管抗体 30％抗着丝点抗体 12％抗胞忖蛋白抗体抗M3抗体SS的B细胞活化-多种自身抗体第六十九页，共86页。a-胞衬蛋白多肽抗体在CTD的阳性率

诊断例数

a-FAp值阳性例数%干燥综合征

896067.4

…….

原发性

745473

…….

继发性

15640 …….系统性红斑狼疮

41819.5 <0.01类风湿关节炎

441329.5<0.05正常人

5923.8 <0.01a-FA第七十页，共86页。a-胞衬蛋白多肽抗体与其他自身抗体

的敏感性和特异性的比较a-FA 54 7388.7SSA抗体38 51.364.7SSB抗体 9 17.985ANA 27 43.642.6抗体类别阳性例数敏感性（%）特异性（%）a-FA第七十一页，共86页。a-胞衬蛋白与其他化验指标的关系

例数a-FA阳性a-FA阴性p

例数%例数%ANA

49 41 75.9 8 40<0.05SSA抗体

38 34 68.6 4 20 <0.05

SSB抗体

9 8 14.8 1 5 <0.05RF 38 27 50 11 55 >0.05IgG升高 54 39 7215 75 >0.05IgA升高

34 24 44.410 50 >0.05CIC升高

40 24 44.416 80 >0.05ESR升高

49 36 66.713 65 >0.05WBC降低

25 19 35.2 6 30 >0.05RBC降低 21 16 29.6 5 20 >0.05PLT降低

6 6 11.1 0 0 <0.05a-FA第七十二页，共86页。

抗M3蛋白抗体

干燥综合症的特异性抗体第七十三页，共86页。抗M3受体抗体在SS及对照组

的阳性率

分组例数抗M3抗体阳性p值例数%SS504386.0*---RA2000<0.01SLE2015.0<0.01正常对照组1417.1<0.01M3第七十四页，共86页。

SS患者血清抗M3受体抗体

与其他自身抗体的比较

自身抗体阳性例数敏感性(%)特异性(%)抗M3抗体4386.0*96.3*抗-胞衬蛋白抗体2573.086.6抗SSA抗体2346.069.7抗SSB抗体1020.071.4M3第七十五页，共86页。M3受体抗体在血清阴性

SS患者的阳性率

项目

阴性例数抗M3受体抗体阳性例数%抗SSA抗体272281.0抗SSB抗体403187.5抗-胞衬蛋白抗体252284.0M3第七十六页，共86页。SSc