《生物实验技术》第四章 脱水、透明与封固

第四章脱水、透明与封固第一节脱水与脱水剂第二节透明与透明剂第三节封固与封固剂复习题：1.脱水、透明、封固的目的。2.常用脱水剂、透明剂、封固剂的主要性质。第一节脱水与脱水剂第四章一、脱水的目的：归纳为两类：非石蜡溶剂的脱水剂：如酒精、丙酮等，脱水后经二甲苯等透明剂才可浸蜡。石蜡溶剂的脱水剂：如正丁醇、叔丁醇、环己酮、二氧六圜等，可直接浸蜡。

使组织块或切片呈无水状态，便于下一步骤透明剂、石蜡（或封藏剂）的透入。二、脱水剂及其应用

1.乙醇：脱水梯度：低浓度到高浓度，据材料确定梯度大小脱水时间：据组织块种类、体积大小、厚度而定。使用自动脱水机的振动功能时可以缩短时间脱水剂的量：充足脱水要充分。脱水容器要密封。第一节脱水与脱水剂第四章注意2.丙酮（Acetone）：脱水力比乙醇强，使组织收缩、硬化也比乙醇大。与水、醚、氯仿、酒精、苯以任何比例相混合不与树胶、石蜡相溶。挥发快，多用于快速制片的脱水剂。对组织抗原性和酶活性保存好。第一节脱水与脱水剂第四章3.正丁醇（Ｎ－Butyl-alcohol）能与水、乙醇、石蜡混合。脱水力较酒精、丙酮弱，使组织收缩少。易挥发，吸入后使人头痛。经各级酒精脱至95％纯正丁醇（更换1次）

1/2正丁醇1/2石蜡纯蜡3次包埋

4.叔丁醇（TertiargButyl-Alcohol）无毒。可与水、乙醇、二甲苯、石蜡混合，是一种很好的脱水剂，优于正丁醇。不使组织收缩或变硬。电子显微镜技术用其作中间脱水剂。5.环己酮（Cyclohexanone）无毒，可与苯、二甲苯、氯仿、石蜡等相溶，可代替纯酒精脱水后直接入石蜡，组织不会变硬。第一节脱水与脱水剂第四章6.二氧六圜（Dioxan，二氧己圜O（CH2CH2）2O

易挥发，能与水、二甲苯、石蜡混合。优点：（1）可用于多种固定剂固定的组织，冲洗后直接入其中脱水。（2）不使组织收缩和硬化，可用于易收缩、变脆材料的脱水。（3）能溶解苦味酸和氯化汞。缺点：（1）蒸气有毒，无嗅无味，空气中含量达1/1000时有中毒危险。（2）易燃。（3）对有空隙的材料易生气泡妨碍透蜡。（可抽气）第一节脱水与脱水剂第四章应用方法：

常规固定冲洗

二氧六圜2-5h

1/2二氧六圜1/2石蜡

纯石蜡（56℃）2-3h

常规包埋、切片贴片

二氧六圜脱蜡

染色、脱水、透明、封片

第二节透明与透明剂第四章二、透明剂及其应用常用:苯类（二甲苯、甲苯、苯）、氯仿、香柏油、冬青油、甘油、松脂醇等一、透明的目的包埋前组织块的透明：替换出酒精，便于石蜡透入。封片前切片的透明：替换出酒精，便于封藏剂渗透；提高折光率，以利于观察。透明剂应有较高的折光率，且是石蜡和封藏剂的溶剂。

第二节透明与透明剂第四章1.苯类（二甲苯、甲苯、苯）折光率挥发性透明速度收缩与硬化应用二甲苯1.497较易挥发快易切片及组织块，应用广泛甲苯1.495同二甲苯较慢不易使组织硬化同二甲苯苯1.502极易挥发较慢少于二甲苯包埋前组织块的透明2.氯仿：折光率1.446，极易挥发，能溶于醇、醚、苯、石蜡等，不使组织硬化，但渗透慢，透明时间为二甲苯的2-3倍。易吸水。

3.香柏油：折光率为1.510，对组织收缩和硬化程度均较低，但透明很慢（小组织块也需12h以上），挥发慢，不易被石蜡代替，不与树胶相混合，一般不用作石蜡切片的透明剂，而用于整体封片的封固剂。第二节透明与透明剂第四章4.甘油：（水溶性透明剂）折光率1.470，易和水、酒精相混合。不使组织收缩或变硬，用于细嫩标本的透明或封片。

5.松酯醇（松油醇）（水溶性透明剂）

吸水性强，但作用慢。多用于酒精或Carnoy氏液固定的组织，对早期胚胎标本或多卵黄标本最为适宜。二甲苯、松酯醇1：4混合液对某些不易切片和易碎组织优于香柏油。组织脱水至95％酒精，入松酯醇透明数小时。第四章第二节透明与透明剂透明不良一、封固的目的：用粘度大，折光率高，易于干固的封固剂，使标本能够永久保存。第三节封固与封固剂第四章二、水溶性封固剂1.甘油:运动终板、脂肪、类脂体等的染色标本，原生动物、浮游生物的不染色标本整体封片。

2.甘油明胶：3.乳酸—石炭酸封固剂：适用于藻类、菌类、原叶体及其它较小的材料。4.攸伯拉（Euparal）:含有铜盐，可加强苏木精的颜色。

第四章第三节封固与封固剂1.加拿大树胶：折光率1.541-1.547

，溶于二甲苯后为

1.520。可溶于苯、二甲苯及氯仿，一般用二甲苯

配成60%浓度使用，溶液应为中性。

2.达马树胶：折光率为1.520，溶液长期保持中性，干固快，较加拿大树胶效果好。

3.合成树胶：折光率1.567。效果比加拿大树胶好。迪