紫外可见分光光度计

沧州医学高等专科学校王凤玲沧州医学高等专科学校王凤玲检验仪器分析技术

紫外-可见分光光度计3教学基本要求掌握光谱分析的基本原理。掌握紫外-可见分光光度计的工作原理和基本结构。熟悉紫外-可见分光光度计性能指标及评价。了解紫外-可见分光光度计的常见故障和处理方法。了解影响分光光度法准确性的因素。一、光谱分析技术概述分类：按光谱获得方式：吸收光谱和发射光谱。按仪器设计：紫外-可见分光光度计、原子吸收光谱仪、荧光光谱仪、红外光谱仪、原子发射光谱仪、原子荧光分析仪等。光谱分析技术的基础理论（一）光的特征光是一种电磁辐射（又称电磁波），是一种以巨大速度通过空间不需要任何物质作为传播媒介的光（量）子流，它具有波动性和微粒性。5一、光谱分析技术概述（二）光的吸收定律朗伯-比尔定律（Lamber-Beer）是吸收光度法的基本定律。

6式中A代表吸光度；T表示透光度或透射率；I0、I为入射光和透射光强度；c为吸光物质溶液的浓度；b为液层厚度；k为吸光系数。入射光I0透射光I一、光谱分析技术概述（三）偏离朗伯-比尔定律的因素71.化学因素2.光学因素非单色光杂散光散射光和反射光非平行光一、光谱分析技术概述紫外-可见分光光度法（ultravioletandvisiblespectrophotometry；UV-vis）是研究物质在紫外-可见光区（200nm～800nm）分子吸收光谱的分析方法。其基本工作原理是利用一定频率的紫外-可见光照射被分析的物质，它将有选择地被吸收，引起分子中价电子的跃迁。根据吸收光谱的波长和强度对物质进行定性和定量分析。8二、紫外-可见分光光度计的工作原理三、紫外-可见分光光度计的基本结构

紫外-可见分光光度计都由光源、单色器、吸收池、检测器和讯号处理与显示器五部分组成。9100.575光源单色器吸收池检测器显示三、紫外-可见分光光度计的基本结构单波长双光束分光光度计11比值光源单色器吸收池检测器显示系统光束分裂器三、紫外-可见分光光度计的基本结构双波长分光光度计12三、紫外-可见分光光度计的基本结构（一）光源提供入射光的装置1．钨丝灯或卤钨灯适用波长范围是350～1000nm2．氢灯或氘灯（二）单色器是将来自光源的连续光谱按波长顺序色散，并从中分离出一定宽度谱带的装置，是仪器的关键部件。13三、紫外-可见分光光度计的基本结构（三）吸收池吸收池也叫比色皿、比色杯、样品池和液槽等，是用来盛放被测溶液的器件。玻璃吸收池和石英吸收池。光程在0.1～10cm之间14三、紫外-可见分光光度计的基本结构（四）检测器是一种光电能量转换器，即把光信号转换为电信号的装置。1．光电池光电池有硒光电池和硅光电池。2．光电管3．光电倍增管4．光电二极管阵列5．电荷耦合器件

15三、紫外-可见分光光度计的基本结构（五）讯号处理与显示器

在紫外-可见分光光度计中，光电管输出的电讯号很弱，需经过放大才能以某种方式将测量结果显示出来。常用的显示方式有电表指示、数字显示、荧光屏显示、结果打印及曲线扫描等。显示方式一般有透光率和吸光度，有的还能转换成浓度、吸光系数等。16三、紫外-可见分光光度计的基本结构影响分光光度法准确性的因素（一）非单色光的影响（二）杂散光的影响（三）散射光和反射光的影响（四）非平行光的影响（五）吸收池的影响（六）电压、检测器负高压波动的影响（七）其他因素的影响17三、紫外-可见分光光度计的基本结构(一)波长准确度和波长重复性(二)光度准确度(三)光度重复性(四)光度线性范围(五)单色器分辨率(六)光谱带宽(七)杂散光(八)噪音(九)基线的稳定性(十)基线平直性18四、紫外-可见分光光度计的性能指标及评价紫外-可见分光光度计的使用19五、紫外-可见分光光度计使用与故障处理20紫外-可见分光光度计基本操作流程开机参数设置打开主机、PC电源，进入WINDOWS界面，启动工作站，连接主机，仪器初始化自检结束，即可工作进入菜单，选择测定模式，设置实验所需的参数将待测样品、参比样分别放入样品池和参比池按已设定的参数和程序，按开始键仪器自动完成检测根据实验所得结果进行分析，产生报告样品装载样品测定结果