其他类成分分析

杨杰其他类成分分析其他类成分分析概述中药的品种繁多，所含的化学成分更是丰富多彩。随着人们对客观世界认识的不断深化，各种先进的分离分析手段的更新，更多的具有活性的化学成分将被发现。其他类成分分析氨基酸、蛋白质分析（自学）多糖分析有机酸（自学）环烯醚萜分析木脂素分析（自学）萜类及其衍生物分析其他类成分分析多糖分析上世纪60年代以来，人们逐渐发现多糖有一些独特的、多方面的生理活性，且无毒性，是比较理想的治疗药物。

昆布素-----动脉粥样硬化香菇多糖-----抗肿瘤活性银耳多糖------免疫增强剂黄芪多糖-----抗病毒、抗肿瘤

现在多糖类药物己引起国内外科学家的重视。其他类成分分析多糖也叫多聚糖，是由10个以上单糖基聚合而成。这类物质不仅聚合的单糖数目多，分子量大。

1、多糖的单糖组成及其摩尔比；

2、多糖中糖苷键连接类型；

一、定性方法其他类成分分析水解HPLC其它方法TLCGC-MS1、多糖的单糖组成及其摩尔比其他类成分分析无论采用哪一种分析方法，首先都需将多糖完全水解。常用的水解方法有稀酸水解和三氟乙酸水解，两种方法水解方法都可以使多糖水解完全。酸的浓度水解时间水解温度其他类成分分析（1）薄层色谱法应用于多糖的单糖组成研究的方法中，薄层色谱法比较简单，但是灵敏度较低，有些含量低的单糖不易检测出来，利用此方法可以初步检测多糖的单糖组成。可用的薄层色谱吸附剂有硅胶、纤维素、硅藻土和氧化铝。常用的展开系统有丙酮-水（96：4）、正丁醇-乙酸乙酯-异丙醇-乙酸-水-吡啶（7：20：12：7：6：6）、正丁醇-乙酸-水（4：1：5）。显色剂有1，3-二羟基萘硫酸溶液，或苯胺-邻苯二甲酸的正丁醇饱和水溶液，100℃烘约10min。

其他类成分分析由于糖的紫外吸收较弱，因此在用到高效液相色谱法测定多糖的单糖组成时，紫外检测器检测效果不好。选择合适的检测器很重要：

（1）示差折光检测器具有稳定、易于操作、样品不被破坏等特点，但该法受温度和流动相组成的影响，不能使用梯度洗脱。

（2）u-is检测器：因为糖只在近紫外区190nm有吸收，若采用柱前衍生或柱后衍生反应，生成具有强紫外吸收的物质，可大大提高灵敏度。

（3)ELSD方法可解决上述问题，可与梯度洗脱相容，已有研究者应用HPLC-ELSD直接测定二糖海藻糖及D-木糖等单糖，但多糖的含量测定还未见报道（2）高效液相色谱法其他类成分分析用高效液相色谱测定单糖的组成，由于各单糖结构相似，峰不易分开，不能达到理想的分离度，这给分析多糖的单糖组成带来一定困难。可使用氨基柱

其他类成分分析目前，多糖的组成分析多采用气相色谱法。由于单糖的挥发性很低，所以在应用气相色谱法对多糖的单糖组成进行分析时，必须首先要进行衍生化处理以增加其挥发性。常用的衍生化处理方法有硅烷化法和乙酰化法。

（3）气相色谱法其他类成分分析2、多糖中糖苷键连接类型；

高碘酸氧化和Smith降解，通过降解产物，可以了解多糖中的糖苷键的连接方式。通过红外光谱，核磁共振谱可以了解糖苷键的构型（α型或β型）。通过酶解，以特定酶与多糖反应，确定糖苷键的连接。其他类成分分析定量分析利用组成多糖

的单糖的缩合

反应而建立：

比色法直接测定多糖

本身而建立：

高效液相法

气相色谱法二、定量方法其他类成分分析1．苯酚-硫酸法（Molish）测定原理是先用80％乙醇提取其中所含有的单糖、低聚糖及甙类等干扰性成分，再用热水提取多糖类成分。多糖类在硫酸作用下，先水解成单糖分子，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚（或萘酚）缩合，其中已糖缩合物成橙黄色溶液，在490nm波长处有特征吸收；而戊糖及糖醛酸的缩合物在480nm波长处特征吸收；其吸收度与糖含量呈线性关系。（一）总多糖的定量分析

14其他类成分分析2．3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定

DNS法原理是利用3,5-二硝基水杨酸在碱性溶液中，与多糖水解产物还原糖共热后还原成棕红色的氨基化合物，此氨基化合物在540nm波长处有特征吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系。3．蒽酮-硫酸法测定糖类与硫酸发生脱水反应，生成糠醛或衍生物，和与蒽酮-试剂缩合产生颜色，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm波长有最大吸收，吸收度与糖含量呈线性关系。15其他类成分分析（二）单糖分析方法

多糖组分复杂，较难直接测定单体多糖的含量。现常用的分析方法是，先将多糖酸水解，再用气相色谱法或高效液相色谱法确定其组成（单糖的种类及比例），可以单糖的量推算多糖的量。以往多用气相色谱法测定单糖含量，但由于单糖不具有挥发性，一定要制备成相应的衍生物后才能测定，操作步骤较为繁琐。现今用高效液相色谱法测定糖含量的论文较多见。

分析实例-三七多糖中单糖的含量测定16其他类成分分析17其他类成分分析一．理化性质与常用分析方法

1．环烯醚萜类成分的分布环烯醚萜（iridoid）类成分是由二个异戊二烯构成的含有10个碳原子的单萜类化合物，其母核都为环状，具有烯键和醚键，常与糖结合成甙。植物界常见的环烯醚萜甙主要是环烯醚萜萄萄糖甙和4-去甲基环烯醚萜葡萄糖甙。环烯醚萜甙存在于栀子、鸡矢藤、马钱子、肉苁蓉等中药中；而4-去甲基环烯醚萜甙则是地黄、玄参、车前等中药的主要成分。裂环烯醚萜（secoirdoid）类成分是环烯醚萜的开环衍生物，这类成分在龙胆科植物中发现最多，尤其是在龙胆属和獐芽菜属植物中存在更为普遍。

环烯醚萜苷类分析18其他类成分分析2．理化性质

易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇。对酸敏感，成苷后苷键易被酸水解断裂，苷元中C1位的羟基和C2位的氧是—个半缩醛结构，化学性质活泼，易发生进一步氧化聚合等反应，尤其是在酸碱的作用下或有共存酶存在更易变化。玄参、地黄等炮制后变黑就是由于这类成分水解、聚合所致。19其他类成分分析3．定性分析

分析这些成分难度较大，但仍可利用其结构特点和理化性质寻找其定性鉴别、含量测定的依据。如该类成分与氨基酸共同加热可显深红色或蓝色；或于其冰醋酸溶液各加少量铜盐显蓝色；与Shear试剂（浓盐酸与苯胺1：15混合）反应显不同颜色。薄层定性分析可用硅胶G、硅胶GF254薄层板，或聚酰胺薄膜。显色剂有硫酸乙醇溶液、茴香醛试液、香草醛硫酸试液、对二甲氧基苯甲醛-硫酸溶液。20其他类成分分析4．定量分析

（1）分光光度法：利用环烯醚萜类成分与某些试剂的显色反应，于分光光度计上测定吸收度进行定量分析。如梓醇的薄层-分光光度法测定。（2）薄层扫描法：可用硅胶GF254薄层板，检测荧光熄灭斑点，如栀子及炮制品中栀子甙含量；也可用硅胶G或聚酰胺薄膜，用显色或在紫外区测定，如龙胆中龙胆苦甙、当药苦甙、当药甙的含量测定。（3）高效液相色谱法：对于有紫外吸收的环烯醚萜类成分可用HPLC法测定，如栀子苷、龙胆苦苷、梓醇等成分的测定。21其他类成分分析二．含环烯醚萜苷常用中药分析

（一）地黄中环烯醚萜甙的分析地黄为玄参料植物地黄RehmanniaglutimosaLibosch的新鲜或干燥块根，分别称为“鲜地黄”与“生地黄”，炮制后称为“熟地黄”。鲜地黄功效为清热生津、凉血止血；生地黄功效为清热凉血、养阴生津；熟地黄功效为滋阴补血、益精填髓。含环烯醚萜甙类成分梓醇（catalpol）、二氢梓醇（dihycrocatalpol）、桃叶珊瑚甙（aucubim）、益母草甙（leonuride）、黄陵香甙（melittoside）、地黄甙（rehmannioside）A、B、C、D等。22其他类成分分析23其他类成分分析24其他类成分分析25其他类成分分析1.定性分析

（1）薄层色谱法：地黄粉末2g，加甲醇20ml，加热回流1h，放冷，滤过，滤液回收甲醇至5ml，作为供试品溶液。另取梓醇对照品加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5μl，点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿-甲醇-水（14：6：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。26其他类成分分析

2.定量分析

（1）高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸溶液（1：99）为流动相；检测波长为210nm。理论板数按梓醇峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备：精密称取梓醇对照品适量，加流动相制成每1ml含10μl对照品的溶液，即得。27其他类成分分析

供试品溶液的制备：取生地黄切成约5mm的小块，经80℃减压干燥24h后，磨成粗粉约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流提取1.5h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至10ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。生地黄按干燥品计算，含梓醇（C15H22O10）不得少于0.20%。其他类成分分析

鲜地黄中梓醇含量为0.774％~4.92％，干地黄中梓醇含量为0.010％~0.726％。其中地道药材怀地黄中梓醇含量高于其它产地的样品；鲜地黄含量高干地黄，这是由于加工过程中导致梓醇分解，含量平均下降1/2~2/3，熟地黄含量明显偏低；不同产地干地黄的梓醇含量相差很多，这与产地、品种及商品贮存有关，贮藏1年的地黄含量有所下降。

29其他类成分分析（二）龙胆中裂环烯醚萜甙的分析

龙胆为龙胆科植物条叶龙胆CentianamanshueicaKitag.、龙胆G．scabraBge、三花龙胆G．trifloraPall．或坚龙胆G．regescensFranch．的根或根茎，前3种习称“龙胆”，后一种习称“坚龙胆”。具清热燥湿、泻肝胆火之功效。龙胆中含有多种裂环烯醚萜甙类成分，如龙胆苦甙（gentiopicroside）、当药甙（sweroside）、当药苦甙（swertiamarim）、苦龙胆酯甙（gmarogentim）等，另含龙胆三糖、龙胆碱等。30其他类成分分析gentiopicrosideswertiamarim

31其他类成分分析32其他类成分分析33其他类成分分析1.定性分析

（1）薄层色谱法取龙胆粉末0.5g，加甲醇5ml，浸渍4~5h，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（20：2：1）为展开剂，二次展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。34其他类成分分析（2）显微化学①取龙胆粉末行微量升华，镜检可见带绿黄色的针晶、柱状晶体及其它形状的聚合晶体。②升华的结晶加硫酸和硝酸各1滴，到出现气泡时加热，开始产生油滴，接着为橙黄色球晶状固体或细小的单晶或簇晶生成。

（3）化学法：

取龙胆粉末约1g，加甲醇10m1。冷浸过夜，滤过，滤液浓缩到2m1，加酸酸化，加碘化铋钾试剂有桔红色沉淀（检查生物碱）。35其他类成分分析2.定量分析

（1）高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（3：7）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。内标溶液的制备：精密称取咖啡因适量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。36其他类成分分析测定法：精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液各5ml，摇匀，取10µl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取龙胆中粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇110ml，放置12h，时时振摇，精密量取上清液2ml，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加甲醇至刻度，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，按内标法以峰面积计算，即得。本品含龙胆苦苷（C16H20O9）不得少于1.0%。其他类成分分析

一．理化性质与常用分析方法1．萜类及其衍生物的分布及理化性质2．常用分析方法（1）定性分析萜类化合物的鉴别可用理化显色反应和薄层色谱法。理化显色反应常用的试剂同挥发油分析。萜类及其衍生物分析38其他类成分分析（2）定量分析

薄层色谱法和气相色谱法均可用于萜类化合物的定量分析。但薄层色谱法测定时选择专属性的显色剂较为困难；气相色谱法要注意分离度和对照品问题。萜类含氧化合物或内酯类成分的熔点要高于其它挥发油类，对照品稳定性较好；加之结构中多有双键或共轭体系，使的采用高效液相色谱法对其进行定量分析成为可能。故近年来这方面的报道颇多，《中国药典》2005版药典对白芍、赤芍、木香、穿心莲、银杏叶（萜内酯成分）均采用高效液相色谱法控制质量。39其他类成分分析二.含萜类及其衍生物常用中药分析

（一）白芍中单萜苷分析白芍为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall.的根，采挖后，除去头尾和细根，置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，晒干。具平肝止痛、养血调经、敛阴止汗之功效。含单萜苷类成分芍药苷（paeoniflorin）、氧化芍药苷（oxypaeoniflorin）、苯甲酰芍药苷（benzoylpaeoniflorin）、白芍苷(albiflorin)、苯甲酰氧化芍药苷(benzoyloxypaeoniflorin)等。

40其他类成分分析

paeoniflorinR1=HR2=HoxypaeoniflorinR1=OHR2=H

41其他类成分分析42其他类成分分析43其他类成分分析1．定性分析

（1）取白芍粉末5g，加乙醚50ml，加热回流10min，滤过。取滤液10ml，蒸干，加醋酐1ml与硫酸4~5滴，先显黄色，渐变成红色、紫色，最后呈绿色。（2）取白芍粉末