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文档简介

第十一章基因芯片技术生物芯片(biochip)概念:指采用光导原位合成或微量点样等方法,将大量生物大分子有序地固化于支持物表面,组成密集二维分子排列,然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交,通过特定的仪器对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析,从而判断样品中靶分子的数量。由于常用玻片/硅片作为固相支持物,且在制备过程模拟计算机芯片的制备技术,所以称之为生物芯片技术。特点:高通量、微型化和自动化。

根据芯片上固定的探针不同

组织芯片:组织切片基因芯片:寡核苷酸探针或DNA蛋白质芯片:肽或蛋白细胞芯片:细胞元件型微阵列芯片通道型微阵列芯片生物传感芯片根据芯片的原理不同生物芯片的分类:第一节基因芯片概述一、基因芯片的概念

是指通过寡核苷酸阵列原位合成或显微打印,将数以万计的DNA探针片段有序地固化于支持物上,产生二维DNA探针阵列,然后与标记的样品进行杂交。通过检测杂交信号来实现对生物样品的快速、高效检测或诊断。由于固定于支持物上的每个分子的位置及序列为已知,当荧光标记的靶分子与芯片上的探针分子结合后,可通过激光共聚焦荧光扫描或电荷偶联摄影相机对荧光信号的强度进行检测,从而对杂交结果进行定量分析。二、基因芯片技术的原理1.基因芯片技术的基本原理:-----反向斑点杂交(reversedot-blothybridization,RDB),即在固相支持物上固定已知序列核苷酸,和待检测样品标记后进行杂交,根据检测信号的有无和强弱,确定样品中该已知序列片段的有无及含量高低。2.杂交信号检测:信号的强弱不同:样品与探针严格配对的杂交分子----最强不完全杂交的双链----弱不能杂交的双链----无信号通过激光共聚焦显微镜、激光扫描仪或荧光显微镜等检测荧光信号,由计算机记录下来,经过专门设计的软件对每个荧光信号的强度进行定量分析、处理,并与探针阵列位点进行比较,即可得到待测样品的遗传信息。第二节基因芯片技术的基本步骤①基因芯片设计:提出问题,确定研究目标,选择一组特定的基因对象。②基因芯片制备:设计探针序列,确定探针及探针在芯片上的分布,制备基因芯片。③靶基因制备:将样品进行特定的生物处理,获取其中DNA、RNA等信息分子并加以标记。④杂交:选择合适的反应条件使生物分子间反应处于最佳状况中,减少生物分子之间的错配比率,从而获取最能反映生物本质的信号。⑤杂交信号检测和结果分析:目前最常用的芯片信号检测方法是将芯片置入芯片扫描仪中,通过采集各反应点的荧光强弱和荧光位置,经相关软件分析图像,即可以获得有关生物信息。第三节

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