微生物实验课1

医学微生物学实验

EXPERIMENTSOFMEDICALMICROBIOLOGY实验室规则TheRulesofMicrobialLab分组Grouping

实验一细菌形态与结构的检查examinationofbacterialmorphologyandstructure

掌握细菌的三种基本形态和特殊结构Masterbacterialmorphologyandspecialstructures掌握细菌学标本片的制作和革兰染色法MasterthepreparationofbacterialsampleslidesandGramstaining掌握油镜的使用与保护Mastertheuseofoillens了解墨汁涂片法和悬滴法Knowtheprincipleofnegativestainingandhanging-drop细菌基本形态观察

Observebacterial

morphology球菌coccus：外观呈球形或近似球形（葡萄球菌staphylococcus）杆菌bacillus：呈杆状，长短、粗细和大小不一（肠道杆菌enterobacteria）

螺形菌spiralbacteria：弧菌vibrio

菌体略带弯曲，呈逗点状或括弧形（霍乱弧菌Vibriocholera）螺菌spirilum

菌体有多个弯曲（幽门螺杆菌Helicobacterpylori）BasicshapesSpherical:coccusRod:bacillusCurvedorspiral:spiralbacterium葡萄球菌staphylococcus肠道杆菌Enterobacteria霍乱弧菌Vibriocholera幽门螺杆菌Helicobacterpylori细菌特殊结构观察

Observebacterialspecialstructures荚膜capsule：与细菌致病力有关（产气荚膜梭菌C.perfringens）鞭毛flagellum：细菌的运动器官（破伤风梭菌C.tetani）芽胞spore：判断微生物的灭菌指标（破伤风梭菌C.tetani）菌毛pilus：与细菌致病力和遗传物质的传递有关---电镜观察荚膜capsule

产气荚膜梭菌C.perfringens鞭毛flagullum破伤风梭菌C.tetani芽胞spore破伤风梭菌C.tetani芽胞spore炭疽芽胞杆菌细菌染色标本检查法a.单染法Simplestaining：如：美兰染色MethylthioniniumChloridestainingb.鉴别染色法Differentialstaining如：革兰染色Gramstain、

抗酸染色Acid-faststainc.特殊染色法Specialstaining如：鞭毛染色Flagella

stain、芽胞染色Sporestain

d.墨汁负染色法Negativestain

细菌不染色标本检查法悬滴法Hangingdropmethod压滴法Pressuredropmethod

细菌形态检查法GramstainingAcid-faststainingNegativestaining真菌fungusCapsulestaining悬滴法1．取凹玻片一张，在凹窝四周涂凡士林（或水）少许。2．取一接种环细菌液体培养物放在盖玻片中央。3．将凹玻片反转，使凹窝对准盖玻片中心，液滴即悬垂于凹窝中央。4．先用低倍镜找到悬滴的边缘，再换用高倍镜检查。镜检时光线宜稍弱，也可用暗视野显微镜观察。5．结果观察细菌的运动性（有鞭毛细菌有位置移动，无鞭毛细菌只有原位颤动。标本片的制作

Preparationofbacterialspecimen

涂片smear→干燥dry→固定Fixation涂片要薄而均匀干燥时标本面朝上固定需在酒精灯火焰上来回2～3次，杀死细菌、粘附牢固、蛋白质变性易于着色。如遇多种标本，可用蜡笔在玻片上划为数格，并于玻片的背面，标明标本的编号。革兰染色法（Gramstain）

初染：在已固定的标本片上滴加结晶紫染液（Crystalviolet），染1min，水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。媒染：滴加碘液（Gram'siodinesolution）媒染1min，水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。脱色：加95％酒精（ethanol）数滴，轻轻晃动玻片30sec，直到流下的酒精无色或稍呈淡紫色为止。水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。复染：加稀释石炭酸复红染液（basicfuchsinsolution）复染30sec，水洗。镜检待标本片自干，或用吸水纸吸干（勿撕），加一滴香柏油，油镜检查，注意观察菌体的形态及染色性紫色者为革兰阳性菌（G+菌）红色为革兰阴性菌（G-菌）实验完毕后，请把玻片放在污物盆中!革兰染色的原理等电点胞壁结构成分Structure