免疫酶组织化学技术-概述

病理检验技术

免疫组化技术

免疫酶组织化学技术概述免疫酶组织化学技术

概述

临床病理诊断中应用的免疫组织化学技术主要是免疫酶组织化学技术,首先用或荧光素标记特异性第一抗体(一抗)或连接抗体(二抗或三抗),然后使这些抗体与组织细胞中相应的抗原或抗原抗体结合物结合,再通过酶参与显色剂的化学反应或激发荧光素而使抗原-抗体结合物呈色,在显微镜下可观察到这些呈色,从而能在组织切片或细胞涂片中检测组织细胞内相应的抗原。免疫酶组织化学技术—概述

一、抗体标记酶及其性质免疫酶组织化学技术中酶标抗体就是将特定的酶与抗体稳定的结合,酶标记的抗体有特异性第一抗体,更多的是标记第二抗体或第三抗体。理论上选择标记抗体的酶时应考虑组织细胞中最好不存在相同或同类型的内源性酶,但实际中并非如此,这需要在免疫组化染色中采取一些措施避免这些内源性酶的干扰。免疫酶组织化学技术—概述

用于标记抗体的酶有很多,一般要符合以下要求:1.分子量不大,容易获得,是商品化的试剂。2.能够与抗体牢固结合,结合后不容易解离,而且与抗体结合后不会抑制抗体的活性。3.催化的底物是容易获得和保存的试剂。4.催化底物发生反应所形成的反应物必须具有一定的颜色,该颜色越鲜艳、越深越好，容易被观察到；反应物要稳定,不容易褪色或被染色所显示出来的物质要具有稳定性,尽可能不被制片过程中所用的化学试剂和封片剂等溶解,不会在反应部位向周围扩散。

免疫酶组织化学技术—概述

二、常用的抗体标记酶

1.辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)属于过氧化物酶类的酶,来源于深根性植物辣根。由于辣根过氧化物酶存在于植物,具有活性高、分子量小、稳定和纯酶容制备出高纯度酶的特点,所以在免疫组化技术中最常用于标记抗体。但是辣根过氧化物酶和存在于人体和动物的其他过氧化物酶一样具有相同催化某些化学反应的性质,而且这些过氧化物酶能耐受甲醛固定、乙醇和二甲苯以及石蜡的浸泡,在石蜡切片中酶的活性依然很高。免疫酶组织化学技术—概述

二、常用的抗体标记酶

1.辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)因此,辣根过氧化物酶的催化反应会受到人体或动物中存在的内源性过氧化物酶的干扰。内源性过氧化物酶主要存在于血细胞、甲状腺、乳腺和唾液腺等。氰化物可抑制过氧化物酶的活性。利用过氧化物酶能催化H2O2把联苯胺氧化成蓝色或棕褐色产物。免疫酶组织化学技术—概述

二、常用的抗体标记酶

2.碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP,ALP,AP)属于水解酶类的酶,容易分离纯化稳定。在免疫组化技术中常用于标记抗体。广泛存在于人体和动物的组织中,常见于具有活跃运转功能的细胞中,如毛细血管内皮、肝、骨骼、肾皮质和肾上腺等。免疫酶组织化学技术—概述

二、常用的抗体标记酶

2.碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP,ALP,AP)因此,碱性磷酸酶的催化反应会受到人体或动物中存在的内源性碱性磷酸酶的干扰。在石蜡切片制片过程中,受各种因素影响,酶将部分或全部失去活性。氰化物、砷酸盐、左旋咪唑等可作