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文档简介

生物化学检验技术酶活性测定方法分类、原理、优缺点及应用

按监测方法分类分光光度法（主要）荧光法量气法放射性核素法电极法其他方法酶活性测定方法分类按反应时间分类定时法连续监测法酶活性测定方法分类一、定时法（终点法、两点法）概念：

测定酶促反应开始后一段时间内底物的减少量或产物的增加量，计算酶促反应的平均速度。

特点：

优点：简单，不需要特种仪器。

缺点：难以确定酶促反应是否处于线性期。

注意：固定时间法时间段的预定不宜太长，一般以30～60分钟为宜。图1定时法三种不同反应进程

吸光度图1中显示在酶促反应的三种可能进程中虽然从t1到t2三种反应过程所生成的产物量相同，但实际反应有很大区别。曲线c说明酶促反应接近终点时已经减慢。曲线b说明在反应早期存在停滞期。只有曲线a用定时法可以准确测定代表酶活性浓度的反应速度。因此用定时法时必须了解不同酶促反应速度和时间的关系，应先做预实验找出酶促反应速度恒定的时期，确定线性时间，然后在这段时间进行测定，避开延滞期和一级反应期。二、连续监测法（continuouemonitosing）概念：测定底物或产物随时间的变化量，又称为速率法。

（连续监测法是临床实验室中测定酶活性浓度的最主要的方法。）连续监测法原理每隔一定时间（10～60s）连续测定酶反应中产物或底物的变化量称为连续监测法。又称动力法或速率法，终点法的测定两个时间点，该法进行多点连续测定。连续监测法是临床实验室中测定酶活性浓度的最主要的方法。连续监测法的种类及应用（方法学分类）：

1、直接连续测定法

通过分光光度法、荧光法、旋光计、pH计、电导仪、粘度计等各种手段连续监测产物的生成量或底物的减少量来计算酶的活性，其中以分光光度法应用最广。基本模式为：2、间接连续测定法（分为一步间接法和酶偶联法）

1）一步间接法：指在原来反应体系中加入一些试剂，这些试剂不与酶作用也不影响酶的活性，同时又能与待测酶的产物迅速作用，产生可以被仪器检出的物质。其模式为：

待测酶底物待测酶的产物（无法监测）特异性试剂最终产物2)酶偶联法:指在反应体系中加入一个或几个工具酶，经过待测酶与工具酶的连续催化，将待测酶生成的某一产物转化为新的可测定的产物，当加入酶的反应速度与待测酶反应速度达到平衡时，可以用指示酶的反应速度来代表待测酶的活性。其模式为：待测酶辅助酶指示酶底物待测酶产物（无法检测）中间产物终产物

3、特点：在方法设计上，选择紫外吸收法或色原显色法

优点:能动态观测酶促反应进程，可以明显地找到反应的线性期，结果准确可靠，标本和试剂用量少，可在较短时间内完成测定。缺点：要求高，要

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