薄层色谱分离技术-陈晨

薄层色谱分离技术一、分离原理

薄层色谱是一种开放性色谱，是将混合组分样品溶液点在薄层板一端的起始线上，点样处称为原点，在密闭容器中用适宜的流动相（薄层色谱法中又称为展开剂）展开。因吸附剂对不同组分的吸附能力不同，展开剂对不同组分的解吸能力也不完全相同，造成各组分在薄层析上移动的速度有快有慢，经过一段时间展开后，不同的组分彼此分开，最终形成相互分离的斑点

薄层色谱法(thinlayerchromatography，TLC)

将固定相均匀平铺在光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法可分为吸附、分配、分子排阻色谱法等二、薄层色谱参数1．比移值(1）定义

组分迁移的距离与展开剂迁移的距离之比(2)计算方法2．相对比移值(1）定义

指被测组分的比移值与参照组分的比移值之比(2）计算方法(3）特点消除系统误差，值的重复性和可靠性都比好3．分离度（1)定义衡量薄层色谱分离效果的重要指标，是指相邻两斑点中心至原点的距离之差与两斑点平均径向宽度（径向宽度是指斑点沿着展开方向的宽度）的比值

(2）计算方法三、仪器与材料1．吸附剂粒径5~40硅胶聚酰胺微晶纤维素氧化铝硅藻土常用硅胶H硅胶G硅胶GF254硅胶HF254

想一想

H、G、F各代表何种意思？试解释硅胶HF365？2．载板玻璃板塑料膜金属箔厚度2mm规格5cm×20cm10cm×10cm10cm×15cm10cm×20cm

种类要求

表面光滑、平整清洁玻板处理措施清洁剂或铬酸洗液浸泡洗涤，用清水充分清洗，再用蒸馏水或去离子水冲洗，表面应不附水珠，晾干备用3．点样器手动全自动点样仪定量毛细管

平口微量注射器

4．显色剂显色剂适用范围显色方法斑点颜色浓硫酸乙醇溶液多数有机化合物喷雾加热多数加热后呈黑色碘多数有机化合物薰蒸多数显黄棕色磷钼酸乙醇溶液醛等还原性物质喷雾烘干蓝色茚三酮试液氨基酸类喷雾或浸渍紫色或黄色三氯化铁-铁氰化钾试液含酚羟基化合物喷雾或浸渍红褐色或棕红色5．显色装置喷雾瓶浸渍槽蒸气熏蒸----双槽展开缸

6．检视装置紫外分析仪(三用)摄像设备薄层色谱扫描仪(CS9301型）四、操作技术1．薄层板制备自制薄层板

市售薄层板无黏合剂分类含黏合剂10%～15%煅石膏0.2%～0.5%羧甲基纤维素钠水溶液

操作方法普通薄层板(玻璃、聚酰胺薄膜和铝基)高效薄层板（固定相粒径为5~7）分类操作方法临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板和聚酰胺薄膜可根据需要剪裁操作方法将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器（见图8-14）中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(涂层厚度为0.2mm～0.3mm)，取涂好的薄层板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30分钟，立即置于有干燥剂的干燥器中备用。手动涂布器

2．点样

普通板点样基线----距底边2.0cm

圆点状----

R≤3mm条带状-----宽度5～10mm

点或条带间距----＜8mm

点样量----＜10高效板点样基线----距底边0.8~1cm

圆点状----

R≤2mm条带状-----宽度4～8mm

点或条带间距----＜5mm

点样量----＜53.展开（1）展开要求

查阅A.何为边缘效应?何因？如何防止?B.展开剂加入量?展开剂展开距离？（2）展开方式上行近水平双向多次4．检视有色物质斑点----目光检视无色物质斑点荧光检出法化学检出法

五、检测技术1．系统适用性试验检出限

比移值0.2-0.8

分离效能

相对标准偏差

2．鉴别等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽等体积混合法----斑点单一、紧密结构相似对比法-----R