高效液相色谱法测定咖啡因_第1页
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文档简介

高效液相色谱法测定咖啡因第1页，共13页，2023年，2月20日，星期四主要内容一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、注意事项五、数据处理第2页，共13页，2023年，2月20日，星期四一、实验目的1、学习高效液相色谱法分离咖啡因的原理。2、练习高效液相色谱仪的基本操作。3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。第3页，共13页，2023年，2月20日，星期四二、实验原理咖啡中含咖啡因约1.2～1.8%，茶叶中含2.0～4.7%，可乐饮料和APC药片中均含有咖啡因。其分子式为C8H10O2N4，结构式：定量测定咖啡因的传统分析方法是采用萃取分光光度法。

第4页，共13页，2023年，2月20日，星期四二、实验原理利用混合物不同组分在固定相和流动相中分配系数(或吸附系数、渗透性等)的差异，使不同组分在作相对运动的两相中进行反复分配，实现分离的分析方法。色谱法第5页，共13页，2023年，2月20日，星期四色谱法分类色谱法气体超临界流体气固色谱（GSC）气液色谱（GLC）超临界流体色谱(SFC)胶束电动色谱（MEKC）液液色谱（LLC）吸附色谱（LSC）尺寸排阻色谱(SEC)键合相色谱(BPC)离子交换色谱(IEC)亲和色谱(AC)毛细管电色谱(CEC)液固色谱（LSC）液体第6页，共13页，2023年，2月20日，星期四高压泵流动相溶剂废液色谱柱进样口检测器高效液相色谱仪第7页，共13页，2023年，2月20日，星期四保留值定性分析第8页，共13页，2023年，2月20日，星期四校准曲线法定量分析或第9页，共13页，2023年，2月20日，星期四三、实验步骤1、溶液的配制：

分别取1、2、3、4、5mL100μgmL-1的咖啡因标准储备液，以超纯水稀释至50mL，即得到20、40、60、80、100μgmL-1的标准溶液。2、绘制标准曲线：待基线平稳后，吸取系列标准溶液，分别进样分析，绘制标准曲线。3、样品测定：吸取待测样品进样分析，根据其峰面积，依据标准曲线计算样品中咖啡因含量。第10页，共13页，2023年，2月20日，星期四1、流动相和样品溶液需过滤后使用。2、流动相还需脱气。3、基线平稳后才能进样分析。4、进样前要清洗微量进样器。5、实验结束后要冲洗系统和色谱柱。四、注意事项第11页，共13页，2023年，2月20日，星期四五、数据处理1、根据标准溶液色谱图进行咖啡因成分的定性；2、绘制标准曲线并打印；2、计算样品

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