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生化实验过氧化氢酶米氏常数的测定傅璐1211400122013/11/28过氧化氢酶米氏常数的测定傅璐121140012一、实验目的1.了解米氏常数的测定方法2.学习提取生物组织中的酶二、实验原理米氏反应动力学米氏方程(Michaelis-MentenEquation):米氏常数的意义：反映酶的种类：Km是一种酶的特征常数，只与酶的种类有关，与酶浓度、底物浓度无关。米氏常数是酶促反应达到最大反应速度Vmax一半时的底物浓度。其数值大小反映了酶与底物之间的亲和力：Km值越大，亲和力越弱，反之Km值越小，亲和能力越强。Km可用来判断酶（多功能酶）的最适底物：Km值最小的酶促反应对应底物就是该酶的最适底物。3.米氏常数的求法：该方法的缺点是难以确定最大反应速度Vmax。该方法的缺点是难以确定最大反应速度Vmax。该作图法应用最广。但在低浓度是v值误差较大，在[S]等差值实验时作图点较集中于纵轴。因此在设计底物浓度时，最好将1/[S]配成等差数列，这样可使点距较为平均，再配以最小二乘回归法，就可以得到较为准确的结果。此法优点是横轴上点分布均匀，缺点是1/v会放大误差，同时对底物浓度的选择有要求。[S]<<Km时图形近于水平线，[S]>>Km时直线将在原点附近与轴相交。4.氧化酶：生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是消除体内自由基：①POD：过氧化物酶②SOD:超氧化物歧化酶③CAT：；过氧化氢酶5.过氧化氢酶的作用：植物体内活性氧代谢加强而使过氧化氢发生积累。过氧化氢可进行一步生成氢氧自由基。氢氧自由基是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶（catalase，CAT）可以清除过氧化氢、分解氢氧自由基，保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。6.过氧化氢酶活力的测定方法：米氏常数Km=-0.1913七、实验结果分析：1.曲线上少一个点的原因：用移液管移取序号为2的过氧化氢溶液（应为1.25ml）错误的移取了1.75ml，故在制图时将其舍去。2.曲线线性较好（R²=0.9988）的原因：本实验采取了两人分工的方法完成实验，控制反应结束及滴定分别由一人完成，所以标准都相同，从而在一定程度上提高了实验的准确性。Km计算结果呈负值的原因：Km呈负值（即整条直线都向下移动），亦即所有测定的v值都偏大。由v=(c1*V1-2.5*c2*V2)/5，故推断最可能的原因是V

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