脐带间充质干细胞杨洁

脐带间充质干细胞概述杨洁2014-10-13目前一页\总数二十八页\编于二十一点目录定义技术流程临床应用优势前景目前二页\总数二十八页\编于二十一点什么是脐带间充质干细胞？脐带间充质干细胞（MesnchymalStemCells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞。

目前三页\总数二十八页\编于二十一点工艺流程简介供者筛选采集接收制备培养冻存复苏发放运输临床应用信息反馈目前四页\总数二十八页\编于二十一点供者筛选供者需要提供供者的既往病史、现病史、家族史等资料。目前五页\总数二十八页\编于二十一点样本采集运输要求脐带采集标准：

1.脐带长度不得低于20cm2.脐带两端均在2-3cm处结扎

3.脐带保存液在有效期内，并且无明显颜色变化

4.脐带保存瓶无漏液现象，密封严实、无裂横

5.采集套装内容完整，无缺失

6.采集信息登记完整、字迹清楚易辨认

7.脐带运输时间在规定范围内

8.温度控制在适度范围内（0度-25度）目前六页\总数二十八页\编于二十一点样本接收标准脐带的接收标准：

1.样本信息一致、无误，并能追溯至脐带所有人。2.母血采集量≥5ml

脐血检测样本采集量≥5ml3.采集套装内容完整，无缺失；采集信息登记完整、字迹清楚易辨认。4.无可能造成供者基因型异常的家族史。5.供者健康调查表登记信息无异常。目前七页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞的制备方式间充质干细胞的制备原理：脐带华通氏胶内富含间充质干细胞，通过分离获得华通氏胶后，并进行体外培养，利用间充质干细胞贴壁生长和可体外扩增特性，可获得更多的间充质干细胞。组织块分离法免疫五项检测均为阴性目前八页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞的制备方式华通氏胶的提取与培养华通氏胶提取：1.消毒2.清洗3.分离出两条动脉和一条静脉4.剥取华通氏胶5.剪碎华通氏胶（大小1mm3）6.接种至培养皿培养（密度2-3g/10cm皿）目前九页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞的制备方式注意事项：1.血迹清洗要彻底2.剥取动脉与静脉要干净3.尽量不要剥取羊膜组织4.使用合格器械，器械钝口和生锈的不要使用5.接种后均匀平铺组织块目前十页\总数二十八页\编于二十一点

间充质干细胞原代培养细胞补液和换液（原代培养）

1.制备五天补液（观察是否有细胞爬出）2.八天换液目前十一页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞的传代细胞传代（原代）接种时间：细胞融合度40%-60%最基本和重要步骤目前十二页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞的传代细胞传代（非原代）接种时间：细胞融合度≥85%试剂标记、用前复核目前十三页\总数二十八页\编于二十一点目前十四页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞的冻存细胞收集前须给检测送样做细菌检测和流式（CD90+、CD105+、CD166+）冷冻保护剂（胎牛血清+DMSO）配制：DMSO10%冷冻方式深低温冰箱梯度降温目前十五页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞的冻存注意事项细胞冻存过程降温要慢，缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。操作要迅速目前十六页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞的复苏细胞复苏过程要迅速，以降低DMSO对细胞的损伤，用生理盐水清洗两遍再接种培养；若直接回输则多洗一变。目前十七页\总数二十八页\编于二十一点细胞治疗程序

1、治疗前咨询：明确诊断，明确疾病处于哪一期；

2、治疗风险：分析利弊；可能的副作用；获益

3、知情同意：目前十八页\总数二十八页\编于二十一点治疗前准备

1).安全检测:菌检；2).个体化治疗方案设计：每一位病人的治疗方案，都根据其评价结果具体制定;3).需要的细胞数量；4).细胞的使用方法；5).可能出现的不良反应及应对措施。目前十九页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞质量要求细菌检测内毒素检测革兰氏检测支原体检测活性检测≥90%阴性目前二十页\总数二十八页\编于二十一点细胞发放1.细胞的保存(基质：生理盐水或者保存液）2.运输要求：时间、温度3.病人信息填写完整4.样本检测合格目前二十一页\总数二十八页\编于二十一点MSC治疗禁忌证：

1.怀孕。2.精神病。3.严重的心、肝、肾、肺功能不全。

3.不能控制的严重感染。

4.合并其他有致命危险的疾病。5.一般受者年龄不超过65岁（个别患者>65岁）。6.自体免疫性疾病晚期。7.恶性肿瘤。8.HIV阳性目前二十二页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞治疗疾病的原理替代和修复死亡和受损伤的细胞；激活休眠和处于抑制状态的细胞；旁分泌作用（分泌神经营养因子、抗凋亡因子等）目前二十三页\总数二十八页\编于二十一点间充质干细胞移植途径腰穿途径静脉途径局部种植介入途径目前二十四页\总数二十八页\编于二十一点优势1、取材方便：采集过程简单、无痛苦，不影响母子健康；2、细胞数量丰富：增值能力强，可为组织器官的修复和再生提供所需的大量细胞；3、免疫原性低：具有独特的免疫调节功能，自体使用不引起免疫排斥反应，异体移植还可降低免疫反应；4、不涉及社会、伦理及法律方面的更多争议。目前二十五页\总数二十八页\编于二十一点目前二十六页\总数二十八页\编于二十一点

脐带间充质干细胞具有哪些临床应用价值？•

泌尿系统：肾实质的修复；•

消化系统：肝组织的修复；•

内分泌系统：胰岛细胞的修复；•

神经系统：脑、脊髓损伤的修复；•

血液系统：化疗、放疗后造血系统的修复；•

循环系统：心肌修复、血管修复；•

免疫系统：调节免疫，移植治疗时可降低免疫排斥反应；•