免疫实验诊断1

免疫实验诊断1第一页，共52页。临床免疫学检查及意义

免疫学检查由于具有特异性和敏感性，在实验诊断中应用越来越广泛。常应用于体液免疫、细胞免疫、感染免疫、肿瘤免疫、变态反应、移植免疫等相关疾病诊断和预后观察。免疫学检查意义：应用免疫学理论和技术研究疾病的病因、发生、发展和转归，帮助疾病诊断和预防治疗。第二页，共52页。

AntigenB-lymphocytephagocyte

T-lymphocyte

PrimedTLcytokine

PlasmacellantibodyTmemorycellBmemorycellReviewimmuneresponseNKcomplementTumormarker其它第三页，共52页。做免疫学检查思考点特异性、灵敏性性别、年龄检测物质性质地域性时效性免疫抑制剂等药物影响第四页，共52页。介绍常用免疫学检测方法凝集沉淀试验流式细胞技术ELISA发光物标记技术生物芯片技术快速金标技术免疫印迹PCR第五页，共52页。第一节：免疫球蛋白检测

免疫球蛋白合成、分泌及特性：合成分泌特性IgG脾和淋巴结中浆细胞抗细菌、抗病毒、抗毒素可通过胎盘、可被动免疫IgA肠系淋巴组织中浆细胞抗细菌、抗病毒、抗毒素，尤其分泌型在消化道、呼吸道等管腔抗感染IgM脾和淋巴结中浆细胞感染后最早出现，杀菌、溶菌、溶血、凝集作用明显IgE粘膜固有层中浆细胞分泌参与I型变态反应第六页，共52页。IgGIgAIgMIgE特性主要特性生理变化IgG占总Ig70-80%，能通过胎盘，次级免疫应答孕期含量与母体基本相同，出生3-4月最低，16岁前达成人水平IgA分为血清和分泌型，血清型占总Ig10-15%，SIgA与局部抗感染相关新生儿含量很低，16岁前达成人水平IgM初级免疫应答，可以五聚体形式存在，占总Ig5-10%20周起合成，新生儿为成人10%，8-10岁达成人水平IgE血清中含量最低Ig，占总Ig0.002%新生儿含量极低，12岁前达成人水平第七页，共52页。IgGIgAIgMIgE病理变化增高降低IgG慢性感染、慢性肝炎、肝硬化、淋巴瘤、和某些自身免疫性疾病（如SLE)，免疫增殖疾病（如MM）先天免疫缺陷，获得性免疫缺陷（如肾病综合征，营养不良，甲亢），使用免疫抑制剂，重链和轻链病等

IgA慢性感染、慢性肝炎、肝硬化、淋巴瘤、和某些自身免疫性疾病（如SLE)，免疫增殖疾病（如MM），肾病IgA降低见于呼吸道反复感染者，先天免疫缺陷，获得性免疫缺陷（如肾病综合征，营养不良，甲亢），重链和轻链病等IgM同IgG外宫内感染可急剧增高基本同IgGIgE同IgG外过敏性疾病可明显增，寄生虫感染，间质性肺炎等，特异性IgE增高与过敏原相关基本同IgG第八页，共52页。IgG亚类检测IgG亚类分为4种，血液中含量IgG1>IgG2>IgG3>IgG4，最高和最低可差10倍以上，亚类增高或减低通常与总IgG相关，但有些患者亚类异常，而总IgG正常或与亚类异常情况反相。IgG1缺失常见于免疫缺陷疾病，导致反复感染IgG2缺陷为IgG亚类缺陷中最常见者，且多见于儿童，可引起呼吸道反复感染IgG3缺陷见于成人反复性呼吸道感染IgG4缺陷与IgG2和IgA缺乏有关。IgG4水平升高见于异位性皮炎、哮喘和某些寄生虫疾病。第九页，共52页。M蛋白检测临床意义M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，是由一种单克隆B细胞异常增殖时产生，一般不具抗体活性。阳性主要见于

1.多发性骨髓瘤2.巨球蛋白血症

3.重链病4.半分子病

5.恶性淋巴瘤6.良性M蛋白血症蛋白电泳第十页，共52页。第二节：补体检测（complement）

补体是主要由巨噬细胞分泌存在于新鲜血液中具有酶样活性的球蛋白，补体不耐热易降解，故补体检测须用新鲜血清。补体有C1-C9(经典途径）及BF、DF、PF（旁路途径）和补体调节因子组成。临床常作总补体活性（CH50）和单一因子C3、C4、BF及C1q检测。第十一页，共52页。总补体溶血活性（CH50)检测

增高急性感染、急性组织损伤、恶性肿瘤和风湿病早期，补体增高常与其它血浆蛋白改变相伴随。降低自身免疫性疾病SLE的活动期急性肾小球肾炎冷球蛋白血症等严重肝病变先天性缺乏SRBCAbcSRBC第十二页，共52页。c3、c4、c1q、B因子检测参与途径降低增高C3经典、旁路1）合成障碍2）消耗过多3）先天缺乏1）急性炎症2）急性组织损伤3）排异反应C4经典C1q经典B因子旁路第十三页，共52页。第三节细胞免疫检查簇分化抗原CD（Clusterofdifferentiation）:细胞在发育分化过程中，细胞表面抗原物质发生变化，CD抗原即指细胞变化过程中不同时期产生的抗原。目前临床CD4（TH）与CD8（TS）检测应用广泛。簇分化抗原检测方法目前较多采用流式细胞仪技术进行分析，流式细胞免疫分析技术为特异抗体加标记技术加单细胞检测。特点：特异性、灵敏性高、检测精密度均较以前手工操作高很多。第十四页，共52页。流式细胞仪检测简介

第十五页，共52页。淋巴细胞表面标志检测E玫瑰花形成实验TCSRBCSRBCSRBCSRBCSRBCSRBCSERSERSERSERSERSER第十六页，共52页。T细胞表面标志检测CD3（总T细胞）、E玫瑰花试验检测临床意义

增高：甲亢、淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力、器

官移植后排异反应

减低：AIDS、胸腺发育不良、联合免疫缺陷、也可见

于放疗和化疗及免疫抑制类药物治疗

CD4、CD8检测临床意义

CD4+增高：类风湿关节炎活动期，自身免疫疾病

CD4+减低：AIDS等病毒感染、免疫抑制剂治疗、严重

创伤、大手术等

CD8+增高：传染性单核细胞增多症和巨细胞病毒感染

急性期、慢性乙型肝炎

CD8+降低：部分自身免疫性疾病、Ⅰ型糖尿病等第十七页，共52页。B细胞表面标志检测B细胞表面抗原和表面受体检测临床意义

表面抗原CD19、CD20、CD21、CD22

CD19增高：B细胞系统恶性肿瘤

CD19降低：体液免疫缺陷疾病

CD21为EB病毒和CD3受体

CD20在B细胞激活后逐步降低

CD22在B细胞激活时逐步增高

SmIgB细胞表面特异性标志

SmIg增高：B细胞恶性增殖相关疾病，如慢淋、毛细胞白血病、巨球蛋白血症。

SmIg降低：体液免疫缺陷相关疾病第十八页，共52页。CD4/CD8测定临床意义CD4/CD8测定临床意义

增高：多见于自身免疫性疾病，如类风关活动期、多发性硬化症、SLE、器官移植后排异反应、膜性肾小球肾炎等

降低：AIDS、瘤型麻风病、恶性肿瘤发作期、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染急性期、血吸虫病等。第十九页，共52页。淋巴细胞功能检测T淋巴细胞转化试验意义

细胞生物学功能的体外试验，应用于免疫缺陷、增强、移植等。实验要求较高。

转化率增高：Down氏综合症

转化率降低：细胞免疫功能低下或缺陷相关疾病

NK细胞活性测定意义

NK细胞无需抗原刺激可直接杀伤靶细胞，可释放IFN-r、TNF-B和GM-CSF,在机体抗肿瘤和抗感染免疫中发挥重要作用

增高：感染早期，器官移植干扰素等免疫增强剂治疗

降低：恶性肿瘤，免疫缺陷疾病，使用免疫抑制剂。第二十页，共52页。细胞因子检查细胞因子种类繁多，功能复杂，多种因子可具有相同功能，各种细胞因子间可互相作用，细胞因子功能同时受到细胞因子受体功能影响，因此在选择检测项目和结果分析时要综合考虑。第二十一页，共52页。细胞因子产生细胞靶细胞对靶细胞主要作用IL-2TLTLNKBL促进生长和细胞因子产生促进生长和活化生长及抗体合成IL-6MC、TL、内皮细胞TL&BL成熟BL肝脏辅助刺激济生长急性期反应物（纤维蛋白原）TNFMC、TLPMN内皮细胞丘脑下部肝脏肌肉脂肪TL&BL活化（炎症）活化（炎症、凝集）发热急性期反应物（血清淀粉样A蛋白）分解蛋白（恶病质）辅助刺激剂IFN纤维母细胞、MC所有NK抗病毒，抑制细胞增殖，加强MHC1类表达和活化第二十二页，共52页。肿瘤标志物的概念一般而言，TM是指存在于肿瘤细胞内或肿瘤细胞表达及脱落的物质，或是宿主对肿瘤反应而产生的物质。由于肿瘤发生、发展原因至今尚未完全解决，提示肿瘤的标志也并未完全明确，所以肿瘤标志物概念还有待补充和修正。Tumormarkersaresubstances,usuallyproteins,thatareproducedbythebodyinresponsetocancergrowthorbythecancertissueitself.Sometumormarkersarespecific,whileothersareseeninseveralcancertypes.Manyofthewell-knownmarkersarealsoseeninnon-cancerousconditions.Consequently,thesetumormarkersarenotdiagnosticforcancer.第二十三页，共52页。第四节：肿瘤标志物本质广义上肿瘤标志物是指与肿瘤发生、发展、消亡相关的各种物质。包含遗传物质（如致癌或抑癌基因）、病毒（如EBV-IgA与鼻咽癌)、酶（NSE)、激素（HCG)和临床应用广泛的一些肿瘤抗原（CEA、AFP)等。肿瘤细胞本身产生的肿瘤标志物常分为两类：1）当理化、病毒、遗传等因素引起正常细胞内基因突变而发生癌变时，癌变细胞内及表达在其表面的蛋白质等成份发生某种变化，形成肿瘤抗原，这种抗原可以表达在正常细胞，而肿瘤细胞表达高，也可因肿瘤导致组织结构变化，肿瘤抗原进入血液，如PSA；或仅在胚胎组织中表达，正常成人细胞中不表达，在发生肿瘤时又重新表达，如AFP、CEA。第二十四页，共52页。2）由肿瘤细胞产生的特殊抗原，这种抗原在性质上与正常细胞所表达的抗原不同。癌基因的发现证明正常细胞有癌基因存在，只是处于不表达状态，其一旦被激活，就失去正常调控，使细胞发生癌变。而由于癌基因表达产物与肿瘤抗原的关系至今未完全清楚，所以目前未发现很特异的肿瘤抗原（基因理论和动物实验得到证实）。第二十五页，共52页。肿瘤标志物的分类血清胚胎抗原肿瘤相关糖脂及糖蛋白激素肽、酶、蛋白等

瘤标志物目前有100多种。尚未有统一全面的分类标准。常分为血清/血浆肿瘤标志物和组织肿瘤标志物。组织分化标志转移潜在性标志癌基因及抑癌基因增殖标志第二十六页，共52页。理想肿瘤标志物的要求TM特性要求与临床意义灵敏含量与肿瘤病情相符部位特异肿瘤特异早发现早诊断判断复发区分良性与恶性鉴定肿瘤类型器官部位特异病程和治疗观察第二十七页，共52页。TM检测临床意义辅助临床早发现、早诊断帮助区分区分良性与恶性肿瘤协助临床肿瘤类型鉴定及肿瘤部位鉴别帮助临床对肿瘤病程判断治疗效果观察，提前判断复发第二十八页，共52页。几种肿瘤标志物检测意义标志物性质相对特异肿瘤其它肿瘤其它疾病AFP甲胎蛋白胚胎类糖蛋白原发性肝细胞癌睾丸癌、畸胎瘤肝炎、肝硬化等CEA癌胚抗原胚胎类糖蛋白直肠癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌乳腺癌、肺癌等肠道息肉、炎症，肝、肺等炎症PSA前列腺额特异抗原具有酶样活性蛋白前列腺癌肾癌、膀胱癌前列腺肥大和炎症、泌尿生殖系统疾病CA15-3糖蛋白乳腺癌肺癌、肾癌等肝、肠等非肿瘤疾病CA125糖蛋白卵巢癌乳腺癌、胰腺癌等卵巢囊肿、肝炎等CA199糖蛋白胰腺癌胃癌、结肠癌等急性胰腺炎、肝硬化等第二十九页，共52页。几种肿瘤标志物检测意义标志物性质相对特异肿瘤其它肿瘤其它疾病CA72-4糖蛋白胃癌结肠癌、卵巢癌SCC糖蛋白鳞状上皮细胞癌抗原胚胎类糖蛋白子宫颈癌肺癌、鼻咽癌肝炎、结核TPA组织多肽抗原胚胎类糖蛋白支气管癌膀胱癌肝炎PAP前列腺酸性磷酸酶酶前列腺癌前列腺肥大或炎症NSE神经元特异性烯醇化酶酶小细胞肺癌其他非小细胞肺癌、神经内分泌肿瘤等血小板和红细胞中存在第三十页，共52页。肿瘤标志物的选择建议TM肝癌①AFP②CEA

③CA19-9④AFU⑤SF胰腺癌①CA19-9②CA242③CA50④CA125

⑤CEA胃癌①CEA②CA19-9③CA72-4④PG⑤CA242⑥结直肠癌①CEA②CA19-9③CA72-4④CA242⑤TPS肺癌①NSE②CEA③CYFRA21-1④TPS乳腺癌①CEA②CA15-3③Her-2/neu④TPS女性生殖系统肿瘤①宫颈癌HPV,SCC②卵巢癌CA125③生殖细胞癌HCG前列腺癌①PSA②PSM③PACP恶性淋巴瘤①LDH②β2-MG

③CA125④TNFα脑胶质瘤①NSE②BEHAB③GFAP④VEGF鼻咽癌①VCA-IgA②EA-IgA③SCC④TPS骨转移肿瘤①骨吸收指标②骨形成指标第三十一页，共52页。同一肿瘤多种肿瘤标志物选择1000255075100灵敏度%假阳性率（1-特异度）%AFP检测CEA检测0255075无意义试验ROC曲线第三十二页，共52页。人类具有完善的免疫系统，正常情况下，免疫系统具有识别自我与异己的功能，因而能够防御异物入侵，而对自身组织不产生或产生极微弱的免疫应答反应，称自身耐受。一旦机体外部或内部因素发生改变，可使免疫耐受受到影响，导致免疫系统对自身组织产生明显的免疫应答反应。如是低限度和非持久性，一般影响不大，高限度和持久存在则引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病血清学检测方法很多，特异性较差，动态检测可帮助临床对预后及疗效观察。第五节自身抗体检测第三十三页，共52页。荧光免疫技术目前常用于免疫组化和自身抗体检测，特定可用于定位。较多用于PCR和流式细胞技术细胞核第三十四页，共52页。常见自身抗体检测及临床意义名称 临床意义类风湿因子（RF）类风湿性关节炎及其它免疫性疾病抗ds-DNA抗体 SLE的较特异性抗体抗Smith抗体 SLE的较特异性抗体抗组蛋白抗体 药物性狼疮及其它免疫性疾病 抗核糖核蛋白抗体混合结缔组织病、SLE等 抗SS-A和SS-B抗体干燥综合症、SLE、RA等抗Scl-70抗体 系统性硬化症等抗线粒体抗体原发性胆汁性肝硬化等第三十五页，共52页。常见自身抗体检测及临床意义名称 临床意义Jo-1抗体肌炎和间质性肺纤维化抗中性粒细胞胞浆抗体血管炎症、自身免疫性肝病等抗甲状腺球蛋白抗体乔本氏甲状腺炎等甲状腺疾病抗血小板抗体血小板减少症抗平滑肌抗体自身免疫性肝病抗精子抗体男子不育症抗心磷脂抗体SLE、RA等疾病HLA-B27强直性脊椎炎等第三十六页，共52页。第六节感染免疫检查人体感染病原体后经过一段时间产生抗体一般可持续数月或数年，因此抗体检测可判断现症感染和既往感染情况第三十七页，共52页。

风湿热是一种变态结缔组织疾病，常见有风湿性心脏病、风湿性关节炎等。风湿热常由A组溶血性链球菌引起，此菌可产生一种“O”溶血素具有抗原性，ASLO就是检测机体产生的抗溶血素“O”抗体。链球菌感染后抗“O”的产生一般在一周左右，4-6周达高峰。可见于风湿性心脏病、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、呼吸道感染等。ASLO动态检测对病程及疗效观察意义较大，结合CRP和ESR检测临床意义更大。

抗链球菌溶血素“O”检测（anti-streptolysinOASLO）

第三十八页，共52页。

伤寒是由伤寒杆菌引起的急性肠道传染病。伤寒杆菌有两种抗原，即菌体抗原“O”抗原和鞭毛抗“H”原。肥达氏反应就是检测由上述两种抗原刺激机体产生的抗体。肥达氏反应用于辅助诊断伤寒和副伤寒感染，由于抗体产生需要一定时间，故第一周阳性率10%，第二周达60%-70%，第四周达90%。临床常以二次标本（早期和中期或恢复期）的凝集效价变化来判断是否感染。伤寒病人的“O”抗体较“H”出现早，存在时间短，“H”相反。预防接种可引起“H”增高，“O”正常。肥达氏试验第三十九页，共52页。OH可能情况升高正常伤寒发病早期、或其它沙门氏菌感染交叉反应正常升高预防接种、既往感染升高升高患伤寒可能性较大升高A/B/C升高可能患副伤寒甲、乙、丙肥达氏试验第四十页，共52页。

结核分枝杆菌主要引起细胞免疫，但也可引起体液免疫产生特异性IgG抗体，临床常用ELISA方法检测特异性IgG抗体，PCR方法检测结核DNA，但两种方法均存在部分假阳性，样本找结核杆菌方法最为经典。结核抗体和DNA检测第四十一页，共52页。幽门螺杆菌检测幽门螺杆菌（Hp）感染是人类最常见的慢性感染之一，与胃十二指肠等消化系统疾病密切相关。由于HP感染具较大危害性，故近几年HP检测方法被高度重视，也取得飞速发展。目前诊断幽门螺杆菌感染的方法很多，依据是否需做内窥镜检查分为侵入性和非侵入性两大类。侵入性常做尿素酶试验。非侵入性试验除C13或C14呼气试验外，目前血清学HP是诊断现症感染较好方法，易于儿童HP感染检测和体检普查。第四十二页，共52页。梅毒血请学检测当机体感染梅毒螺旋体后，会产生二种抗体，一种为抗类脂抗体，另一种为抗螺旋体抗原抗体，后者较前者特异性强。由于目前螺旋体体外培养较难，故血清学检测是目前临床常用检查方法。常用方法有快速血浆素反应（RPR）和梅毒螺旋体血凝试验（TPPA），后者特异性高一般用于确定试验，RPR一般作过筛试验和既往感染标志。第四十三页，共52页。TORCH感染免疫学检测病原类型常规检测引起主要疾病弓形虫toxoplasmagondii寄生虫IgM抗体人畜共患。胎儿感染，可引起流产、中枢神经疾病等风疹病毒RubellavirusRNAIgG/IgM抗体胎儿感染，可引起流产、畸形等巨细胞病毒CytomegalovirusDNAIgG/IgM抗体，核酸成人99%感染过CMV,免疫功能低下者易再感或复燃，CMV可通过胎盘感染胎儿,影响较大单纯疱疹病毒HerpssimplexvirusDNAIgG/IgM抗体疱疹性口腔炎、角膜炎、脑膜炎等，孕妇感染可导致流产等第四十四页，共52页。日本血吸虫抗体检测机体感染血吸虫后可产生特异抗体，可作血清IgG、IgM、IgE检测，帮助临床诊断和流行病调查。常用方法：环卵沉淀试验，ELISA法特异抗体检测血吸虫感染早期引起肝、脾肿大，晚期发展为门脉高压、巨脾和腹水。简介囊虫抗体检测猪肉绦虫的幼虫寄生人体,机体产生特异抗体.寄生虫感染免疫学检测第四十五页，共52页。CRP是一种急性时相蛋白，由肝脏合成，能激活补体促进细胞吞噬等免疫功能。近年来CRP检测被广泛应用。CRP增高特点为：急性期增高明显，预后降低迅速，且受其它因素影响很小，特异性较差。明显增高：急性细菌性感染、严重创伤、烧伤、大手术、风湿病活动期等。