液相色谱质谱联用仪校准作业指导书

液相色谱质谱联用仪校准作业指导书液相色谱质谱联用仪校准作业指导书/液相色谱质谱联用仪校准作业指导书液相色谱-质谱联用仪校准作业指导书范围本作业指导书适用于新安装、使用中和维修后的离子阱和四极杆（包括三重四级）两种种类LC-MS的校准，四极杆—翱翔时间串通等其他种类台式LC-MS的校准可参照此作业指导书进行。引用文件以下文件所包括的条则，经过在本指导书中的引用而组成本指导书的条则。本指导书宣布时，所示版本均为有效。所有标准、规范或规程都会被校正，使用本指导书的各方应商议使用以下文件最新版本的可能性。JJF1001-1998《通用计量术语及定义》JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》JJF1164-2006《台式气相色谱-质谱联用仪校准规范》归纳液相色谱－质谱联用仪是以液相色谱为进样分别系统并经过必然的接口与质谱仪耦合到仪器的解析仪器。样品经过色谱分别后经离子源离子化产生带有必然电荷、质量数的离子，采用不相同的质量解析器把电离子按质荷比（m/z）分开,获取依质量序次排列的质谱图。经过对质谱图的解析办理，进行定性、定量解析。液相色谱－质谱联用仪主要由液相色谱、离子源、质量解析器、检测器、真空系统和计算机等几部分组成。计量特色LC-MS各项技术指标见表1表1LC-MS主要技术指标技术指标要求质量范围

不低于

1000u质量正确性

*

±

0.6u分辨力（

R）*

≤1u正ESI

10pg

利血平，

m/z609

处

S/N≥10：1

（峰峰值）信噪比

*

负ESI

20pg

氯霉素，

m/z321

处

S/N≥10：1

（峰峰值）正APCI

20pg

利血平，

m/z609

处

S/N≥10：1

（峰峰值）整机定量重复性

*

RSD≤10%注：1标*的为必定校准项目本技术指标仅供参照,不作为合格性判断依照校准/测试条件5.1实验室环境要求仪器室内不得有强烈的机械振动和电磁搅乱，不得存放与实验没关的易燃、易爆和强腐化性气体或试剂。实验室温度：20℃～30℃。相对湿度：≤70％。5.2标准物质与试剂利血平-50%乙腈水溶液：100.0pg/μL；利血平-50%乙腈水溶液：10.0pg/μL；氯霉素-50%乙腈水溶液：200.0pg/μL；氯霉素-50%乙腈水溶液：20.0pg/μL；碘化铯钠-异丙醇水溶液：2μg/μL碘化钠，50ng/μL碘化铯溶于50%异丙醇水溶液；5.3标准设备微量注射器：10μL6校准/测试项目与校准/测试方法6.1外观检查仪器应拥有以下表记：名称、型号、制造厂名(或公司名)、出厂编号，并附使用说明书。仪器主机、色谱仪、计算机、真空部件和检测器等圆满(吻合出厂说明书要求)，各部件连接正确，各插件亲密配合，接触优异，仪器启动后无异常噪声。仪器的按键开关、各调治旋纽均能正常工作，无松动现象，指示灯显示正常。仪器运行中使用的高电压、大电流和高温等应在仪器的显然部位贴有警示标志，提示操作者注意这些潜藏危险。仪器应注明使用电压和频率等。6.2分辨力仪器牢固后，选择ESI正离子模式，采用手动调谐，将碘化铯钠溶液直接注入质谱中，参照附录D平均选择5个扫描质量，优化仪器至最正确状态，记录各目标离子峰获取半峰宽W1/2。6.3质量范围参照6.2条件将碘化铯钠溶液经过进样泵直接注入质谱中，选择Scan模式，设定扫描范围为（20~2000）m/z，观察可否出现质量数1000以上的质谱峰。6.4质量正确度参照6.2条件，将碘化铯钠溶液经过进样泵直接注入质谱中，记录133，323,473,623,922,1072等碘化铯钠主要离子的质量数，理论值见附录D，依照公式（1）计算质量正确度MMi测量Mi理论(1)式中Mi测量——第i个离子三次测量平均值，u；Mi理论——第i个离子理论值，u。6.5信噪比正ESI源仪器牢固后，将100pg/ul的利血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子最正确响应后记录参数并保存调谐文件。

609至调谐达成后依照调谐文件设定参数，以

50：50乙腈水溶液为流动相，使用

C18或等效色谱柱分别，注入

10pg利血平溶液，选择

SIM模式，提取

m/z

609特色离子，依照公式（

2）计算信噪比。S/N

Hm/zH噪声

(2)式中：

Hm/z——提取离子的峰高；H噪声——基线噪声。负ESI源仪器牢固后，将200pg/ul的氯霉素溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子最正确响应后记录参数并保存调谐文件。

321至调谐达成后依照调谐文件设定参数，以50：50乙腈水溶液为流动相，使用C18或等效色谱柱分别，注入20pg氯霉素溶液，选择SIM模式，提取m/z321特色离子，依照公式（2）计算信噪比。正APCI源仪器牢固后，将100pg/ul的利血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子609至最正确响应后记录参数并保存调谐文件。调谐达成后依照调谐文件设定参数，以50：50乙腈水溶液为流动相，使用C18或等效色谱柱分别，注入

20pg利血平溶液，选择

SIM模式，提取

m/z

609特色离子，依照公式（2）计算信噪比。6.6测量重复性参照6.5.1条件，注入200pg/ul的；利血平溶液10ul，选择SIM模式，提取m/z609特色离子，连续测量6次，记录相应峰面积，依照公式（3）计算重复性RSD

6x)2(xii11100%(3)61x式中：RSD——相对标准偏差，%；xi——第i次测量峰面积；——峰面积的算术平均值。校准/测试结果办理与复校周期7.1按程前言件《CX34-01证书/报告管理程序》要求出具校准/测试报告。7.2检测部门对原始记录进行整理和归档。7.3依照校准结果，发校准证书或校准通知书。在校准结论中明确说明被校准仪器可否合格、存在问题及建议。7.4液相色谱-质谱联用仪的校准周期为2年，更换重要部件、维修或对仪器性能思疑时，应随时校准。附录A液相色谱-质谱联用仪信噪比扩展不确定度A.1归纳测量依照SSY0052-2010《液相色谱-质谱联用仪作业指导书》环境条件温度（15～27）℃，相对湿度小于75%RH。测量标准液相色谱-质谱联用仪标准物质。被测对象Agilent6100测量过程SSY0052-2010《液相色谱-质谱联用仪作业指导书》评定结果的使用吻合上述条件的测量结果，一般可直接使用本不确定度的评定结果。A.2数学模型数学模型：S/NHm/z(1)H噪声式中：Hm/z：提取离子(m/z)的峰高H噪声：噪声峰高度A.3不确定度重量的计算信号峰高值测量不确定度u(Hz/m)：仪器测量峰高时，它与标准物质的浓度、进样量和峰高测量值的不确定度有关，因此信号峰高值测量不确定度应包括三个方面：信号峰高测量值的相对不确定度进u(H1)，标准物质的不确定度u(H2)、微量进样器的不确定度u(H3)和仪器重复测量的不确定度。信号峰高测量值的相对不确定度进u(H1):信号峰高测量值的测量有两种方法：一是依照工作站中记录的选择离子流图，读取峰高值和基线值，以两点差的绝对值作为峰高的测量值，这种峰高的测量方法的相对不确定度优于0.2%；二是用工作站记录相应的选择离子流图，再用游标卡尺量取谱图的峰高的高度。谱图的高度一般为100mm,峰高为70～90nm，其相对不确定度的重量估计为u(H)0.5%。A.3.1.2标准物质的相对不确定度u(H2)：标准物质的相对不确定度是检定质谱计的不确定度的主要本源之一，它直接影响检定结果，标准物质的相对不确定度平时由标准物质证书给出，标准物质证书给出其定值的偏差为10mg±2%，以为其为矩形分布，因此u(H2)2%/31.2%。微量进样器校准的相对不确定度u(H3)：微量注射器的体积刻度是重要的不确定度本源之一，因此，微量注射器必定经校准后才能使用。规程中规定校准一般称量6次，相对标准偏差1%。(进行检定结果计算时，应当采用校准值)uW2)1/60.4%。(重复测量相对不确定度u(H4):现在以一台6310的液相色谱-质谱联用仪为例做重复性测量：在相同的条件重复进样10次，按仪器自己计算信噪比的软件进行计算，所得的表1中的数据：表1：型号为6310的液相色谱-质谱联用仪10次连续测量的数据序号12345678910信噪185132185225228219196174231212比nx)21(xi由上表可计算出其单次相对标准偏差i114.8%snx1由于u(H1)，u(H2)，u(H3)，u(H4)相对独立，22(H3)222222则u(Hz/m)u(H1)u(H2)(H4)0.5%1.2%0.4%14.8%14.9%A.3.2基线噪声测量值的不确定度u(N)：基线噪声测量的不确定度主要来自卡尺检定的不确定度和用卡尺测量的不确定度，一般为2%。若是用色谱工作站记录基线噪声，则其不确定度优于1%。A.4合成标准不确定度：A.4.1数学模型：S/NHm/zH噪声式中：Hm/z：提取离子(m/z)的峰高H噪声：噪声峰高度A.4.2方差与流传系数由：uc2(y)[f/xi]2u2(xi)依照(1)可以推导出：u2(S/N)c12u2(Hm/z)c22u2(H噪声)c11(S/N)/Hm/zH噪声c2(S/N)/1H噪声H噪2声由于式中各不确定度重量互相独立，c1c21表3不确定度一览表不确定度重量标准不确定度本源u(xi)u(H1)信号峰高测量值的相对不确定度u(H2)标准物质的不确定度u(Hz/m)u(H3)微量进样器校准的相对不确定度u(H4)重复测量不确定度u(N)基线噪声值测量的不确定度A.4.4合成标准不确定度：2(S/N)22(Hz/m)22(H噪声),c1c2由uc1uc2uu(S/N)u2(Hz/m)u2(H噪声)(14.8%)2扩展不确定度：为了计算的方便，均取=2由公式Urelku(S/N)可得：Urelku(S/N)214.9%29.8%30%

标准不确定度重量值Ciu(xi)0.5%1.2%0.4%14.8%2.0%1得：(2.0%)214.9%A.5扩展不确定度的评定为了计算的方便，均取=2由公式Urelku(S/N)可得：Urelku(S/N)214.9%29.8%30%A.6测量不确定度的报告该液相色谱-质谱联用仪信噪比的扩展不确定度表示为U=30%，k=2。附录B液相色谱仪-质谱联用仪量值溯源图国家标准物质中心化学基准直接测量深圳市计量质量检测研究院标准名称：液相色谱-质谱联用仪检定用标准物质测量范围：离子阱和四极杆液相色谱-质谱联用仪正确度等级：二级直接测量客户被测名称：液相色谱-质谱联用仪测量范围：离子阱和四极杆液相色谱-质谱联用仪信噪比不确定度：Urel=30%，k=2附录C计量质量检测研究院校准记录格式（供参照）客户名称：型号规格：

出厂编号：

仪器名称：液相色谱—质谱联用仪财富编号：制造厂名：技术依照：有效期/复校周期：标准器名称特色

年检定/校准地点：设备编号

检定/校准日期：检定/校准证书号有效期

年代日环境条件：使用前后状态

℃

%RH使用前：□正常

/□不正常使用后：□正常

/□不正常一、外观：正常□二、分辨率：三、质量范围：四、质量正确度理论值实测值五、信噪比峰高信噪比六、测量重