耳聋基因检测与耳聋一级预防-final

耳聋基因检测与耳聋一级预防-final第一页，共47页。亿人年耳聋防治是重大医学难题全球听力障碍人数(WHO)NEnglJMed.2007耳聋基础第二页，共47页。——数据来自：第二次（2006年）全国残疾人抽样调查中国耳聋人群庞大耳聋基础第三页，共47页。

先天性听力障碍发病率：1-3‰

全国每年新增耳聋患儿：2-6万

先天性听力障碍－发病率高每10000新生儿中先天性出生缺陷的发生率耳聋基础第四页，共47页。导致严重后果：语言障碍（十聋九哑）目前无有效治疗方法，主要依赖助听器与人工耳蜗植入等辅助手段影响终生：家庭社会负担沉重每个听障患儿增加社会成本约20-50万元先天性听力障碍－危害性高耳聋基础第五页，共47页。效果依赖早期发现、早期诊治和防控

助听器验配

人工耳蜗植入先天性听力障碍－高度可干预性

言语康复训练耳聋基础第六页，共47页。先天性耳聋防治思路东部地区中部地区西部地区UNHS及干预网络的建立与实施聋病基因孕前产前筛查降低出生率高危因素筛查及干预模式的建立与实施关口前移重心下移重心下移偏远地区重心下移儿童保健网络筛查及干预耳聋基础第七页，共47页。耳聋的病因复杂：遗传性病因占主要部分明确的遗传因素为耳聋的预防创造条件耳聋基础第八页，共47页。非综合征性耳聋基因>60个显性30个隐性50个线粒体2个X-连锁4个综合征性耳聋基因>40个遗传性耳聋具高度遗传异质性——HereditaryhearinglossHomepage耳聋基础第九页，共47页。常见耳聋基因少，占遗传因素多《Journaloftranslationalmedicine》:GJB2mutationspectrumin2063Chinesepatientswithnon-syndromichearingimpairment《Americanjournalofmedicalgenetics》:Molecularetiologyofhearingimpairmentassociatedwithnon-syndromicenlargedvestibularaqueductinEastChina.《Americanjournalofhumangenetics》:Maternallyinheritedaminoglycoside-inducedandnonsyndromicdeafnessisassociatedwiththenovelC1494Tmutationinthemitochondrial12SrRNAgeneinalargeChinesefamily.针对常见耳聋基因的一级预防具有高度可行性常见耳聋基因占遗传性耳聋50%以上，药物性耳聋40%以上GJB2（～40%-50%）SLC26A4（～15%-20%）线粒体基因（40%以上药物性耳聋）

常见耳聋基因检测第十页，共47页。基因检测与婚育指导产前诊断常见耳聋基因筛查常见耳聋基因检测第十一页，共47页。聋病基因筛查在北京、上海等重点城市已得到初步开展，筛查技术成熟GJB2SLC26A4线粒体DNA突变热点

常见耳聋基因筛查常见聋病基因筛查使先天性听力障碍的预防成为可能常见耳聋基因检测第十二页，共47页。耳聋基因筛查与预防模式高危筛查模式目标：高危人群（耳聋人群及其亲属等）筛查手段：全序列测定为主（GJB2、SLC26A4和MT-RNR1）筛查时间：孕前、婚前、恋前普遍筛查模式目标：正常听力人群筛查手段：快速筛查为主，序列测定为辅(GJB2、SLC26A4和MT-RNR1三大基因的热点突变)筛查时间：孕前或孕早期

常见耳聋基因检测第十三页，共47页。耳聋基因高危筛查试点及合作单位：上海市长宁区残联会员常见耳聋基因检测第十四页，共47页。GJB2双等位基因突变（29.5%）SLC26A4双等位基因突变（14.1%）线粒体基因突变（6.0%）原因不明：（50.3%)常见耳聋基因突变检出比例：49.7%耳聋基因高危筛查N>200例常见耳聋基因检测第十五页，共47页。耳聋基因高危筛查优缺点分析常见耳聋基因检测第十六页，共47页。耳聋基因普遍筛查育龄或孕早期女性隐性基因突变携带者配偶基因芯片筛查耳聋基因芯片筛查夫妇双方均为同证基因突变携带者线粒体A1555G突变产前基因诊断遗传咨询药物性耳聋遗传咨询常见耳聋基因检测第十七页，共47页。有效检测样本（怀孕早期孕妇）：3056例孕妇中携带耳聋基因突变160例，占总样本的5.23%。携带者自身均听力正常，157例无家族史，3例MT突变孕妇家族多人有药物性聋病史。MT突变7例，对母系成员进行氨基糖苷类抗生素药物预警，以避免药物性耳聋全序列检测非MT突变的阳性孕妇配偶124例，13家庭具隐性遗传性耳聋生育风险，5例进行了产前诊断，1例胎儿为p.V37I/c.235delC复合杂合，其余为突变携带或野生型。耳聋基因普遍筛查常见耳聋基因检测第十八页，共47页。耳聋基因普遍筛查优缺点分析常见耳聋基因检测第十九页，共47页。

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AA父母正常，孩子耳聋

“隐性遗传”耳聋基因诊断与遗传咨询实例？孕早期羊水穿刺产前基因诊断

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(25%)Aa(50%)aa(25%)产前基因诊断可有效预防隐性遗传性耳聋的再生育风险耳聋遗传咨询第二十页，共47页。父母耳聋，孩子个个耳聋

同证婚配：后代100%会耳聋耳聋基因诊断与遗传咨询实例聋人婚前进行耳聋基因检查，可避免同证婚配的出现

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AA耳聋遗传咨询第二十一页，共47页。AA;bbaa;BB

父母耳聋，孩子正常

Aa;Bb“多基因遗传”?携带不同隐性耳聋基因突变的聋人夫妇可生育正常听力的孩子耳聋基因诊断与遗传咨询实例耳聋遗传咨询第二十二页，共47页。？Bb正常人群中耳聋基因突变携带率(Bb)为5%耳聋基因诊断可为遗传性耳聋高危人群提供生育风险评估及预防BBBbBbBb耳聋基因诊断与遗传咨询实例耳聋遗传咨询第二十三页，共47页。

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C“线粒体基因母系遗传”?携带线粒体耳聋基因突变的人群通过指导可避免药物性耳聋的发生耳聋基因诊断与遗传咨询实例耳聋遗传咨询第二十四页，共47页。耳聋基因遗传咨询与诊断

了解病因，帮助确诊预防下一代聋病的发生预防亲属或下一代药物性耳聋的可能耳聋遗传咨询第二十五页，共47页。罕见已知耳聋基因检测

非常见耳聋基因致病患者的分子病因罕见已知耳聋基因致病？罕见已知耳聋基因众多，如何检测？罕见耳聋基因检测第二十六页，共47页。本研究所检测的79个耳聋基因常见的耳聋致病基因：Sanger测序罕见耳聋基因检测：定向捕获二代测序可行性分析：OtoSCOPE®芯片（54个已知耳聋基因，2010年，UniversityofIowa）79个已知耳聋基因的二代测序（本研究）2010年二代测序首次应用于已知耳聋基因检测适宜的检测技术罕见已知耳聋基因检测罕见耳聋基因检测第二十七页，共47页。总样本量：183例经济高效的检测方案检测方案（二步法）第一步：常见耳聋基因Sanger测序（所有样本）第二步：79个耳聋基因二代测序（排除常见耳聋基因致病样本）二步法优点：节约二代测序样本数量罕见已知耳聋基因检测罕见耳聋基因检测第二十八页，共47页。79个已知耳聋基因病因构成图常见耳聋基因突变：35.5%GJB2:19.7%SLC26A4：12.0%MT-RNR1:3.8%罕见耳聋基因突变：15.8%罕见已知耳聋基因病因构成：15.8%罕见已知耳聋基因检测罕见耳聋基因检测第二十九页，共47页。罕见耳聋基因的异质性强罕见基因突变分布图致病突变广泛分布于15个基因中Novelmutation91.8%(45/49)Reportedmutation:8.2%（4/49)新发突变占绝大多数致病突变是否报道分布图OrphanetJournalofRareDiseases

2013,

8:85罕见已知耳聋基因检测罕见耳聋基因检测第三十页，共47页。新耳聋基因克隆与发现

所有已知耳聋基因检测后都为阴性新耳聋基因致病？已知耳聋基因非编码区致病？已知耳聋基因大片段缺失？……新耳聋基因克隆第三十一页，共47页。遗传性耳聋家系连锁分析遗传标记基因型分离表型分离基因型-表型共分离耳聋基因的定位克隆新耳聋基因克隆第三十二页，共47页。外显子捕获/二代测序

二代测序耳聋基因定向外显子捕获/测序平台排除已知耳聋基因增加克隆新耳聋基因的把握新耳聋基因克隆第三十三页，共47页。Genome-WideLinkageAnalysisPerformedin9affectedand9unaffected(>35yrs)新耳聋基因克隆第三十四页，共47页。候选区域新耳聋基因克隆第三十五页，共47页。Genome-WideLinkageAnalysis9affectedand8unaffected

IlluminaOmniZhongHuaBeadChip(900,015SNPs)

Chr16p13kgp1005458-kgp2546988(2.1Mb)

MaxiumLOD=3.8OverlappedwithDFNB86interval新耳聋基因克隆第三十六页，共47页。WholeExomeSequencing3affectedand2unaffected

新耳聋基因克隆第三十七页，共47页。WholeExomeSequencingCandidatevariants:non-synonymousvariants(missense,nonsense,splicingsite,indels,etc)withallelefrequencies≤0.001

II-3III-9III-7III-5III-11II-3,III-7,III-9:Affected

III-5,III-11:Unaffected新耳聋基因克隆第三十八页，共47页。WholeExomeSequencingConfirmedbySangersequencinginallfamilymembers新耳聋基因克隆第三十九页，共47页。Genome-WideLinkageAnalysis9affectedand8unaffected

IlluminaOmniZhongHuaBeadChip(900,015SNPs)

Chr16p13kgp1005458-kgp2546988(2.1Mb,124genes)MaxiumLOD=3.8OverlappedwithDFNB86interval新耳聋基因克隆第四十页，共47页。Thep.Ser178LeuVariantofTBC1D24HighlyconservativeNotseenin1000normalhearingcontrols新耳聋基因克隆第四十一页，共47页。HumMutat，2014,35(7):814-818TBC1D24新耳聋基因克隆第四十二页，共47页。耳聋基因检测技术：一代测序DNA抽提>PCR扩增>扩增片段测序>突变检测优点：可覆盖目标基因全