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文档简介

实验试剂：QIAGENDNAFFPETissueKit试剂盒、实验仪器：离心机、生物安全柜、Nanodrop2000分光光度计、LightCycler480荧光定量PCR、恒温金属浴。一、DNA提取1.ExtractDNA（详见QIAGENDNAFFPETissueKit,货号56404）HE染色：1） 石蜡块固定至切片机上，调整切片机切片厚度设置为2ym；2） 切取2ym厚度的组织片1张，先放入15%酒精中，然后从15%酒精中放入45C水中捞片;3） HE染色;HE分析；如图*记录：病理号、病理诊断、肿瘤细胞比例。1） 石蜡块固定至切片机上，调整切片机切片厚度设置为5ym,首先切除表面的2-3片，以去除表面氧化层；2） 切取5gm厚度的组织片3片（如果组织块过小，需要多切几片），然后放入EP管中，加入lml二甲苯振荡混匀，以充分溶解组织周围石蜡，14000rpm离心2min吸去上清去除石蜡，如果石蜡过多，可以用二甲苯再洗一次；3） 加入无水乙醇lml（去除二甲苯），14000rpm离心2min吸尽上清后开盖直至残余乙醇全部挥发（大约lOmin）；4） 加入18OMATL和20卩1蛋白酶K,震荡混匀；5） 56°C1h（期间可以适当摇晃颠倒样品，使之混匀裂解充分）；6） 90C1h（注意管盖，由于90°高温可能会导致开盖，以致液体被蒸发；时间不要太长1小时足够；一个水浴锅时，56C到90C之间应该将样本置于室温中）；7） 短暂离心使液体聚于管底，加入200MAL，震荡混匀，然后加入200卩1无水乙醇，震荡

混匀；8） 短暂离心使液体聚于管底，将整个液体全部移入收集柱中，然后8000rpm离心lmin,丢弃收集管后将收集柱置于新的收集管中；9） 加入500卩1AW1漂洗液，离心8000rpm,lmin,丢弃收集管后将收集柱置于新的收集管中；10） 加入500卩1AW2漂洗液，离心8000rpm,lmin,丢弃收集管后将收集柱置于新的收集管中；11） 离心14000rpm,3min,以去除收集柱中的残余液体；⑵加入ATE（洗脱液）50卩1，然后室温静置2min；13）离心14000rpm,1min,收集洗脱液。二、 DNA浓度调整1） 用Nanodrop2000分光光度计检测DNA样品的浓度；*记录时间、样品浓度、260/280值2） 石蜡样

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