级五年制实验课腹腔巨噬细胞吞噬试验

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验王慧文实验原理单核细胞存在于外周血液中，巨噬细胞广泛分布在各种组织中，可以从腹腔渗出细胞、骨髓、脾脏、淋巴结、胸腺、肝脏以及肺等组织中分离获得。正常小鼠每只可收集腹腔渗出细胞约106，其中巨噬细胞占30%。如果给小鼠腹腔注射某种刺激物，可使巨噬细胞渗出增加，易于分离更多的巨噬细胞。

常用于刺激腹腔细胞渗出的物质刺激物浓度注射剂量(ml)细胞采取时间（注射后天数）获得细胞数量（×106）血清原浓度0.5-12-31-5肉胨汤10%1-1.53-53-7矿物油原浓度0.1-0.54-610-20淀粉2%-10%1-1.53-52-5明胶2%-4%0.5-13-53-7实验分组及材料试剂（每组）：2％鸡红细胞悬液1mlGiemsa－Wright染液1EP管生理盐水1瓶苦味酸1瓶分组：4人1组，一只小鼠/组器材（每组）

1ml注射器1个玻片（载玻片/盖玻片）4片1ml微量加样器1支200ul微量加样器1支tips若干1.5mlEP管2个剪刀、镊子1套显微镜温箱操作步骤实验前1天，给小鼠腹腔注射3％淀粉溶液１ml（已完成）。用1毫升注射器给小鼠腹腔注射2％鸡红细胞悬液0.5ml，用苦味酸做好标记后放回笼中；60min后脱颈椎处死小鼠。剪开小鼠腹部皮肤，用镊子提起腹膜，用剪刀剪开一小口，用1ml加样器向腹腔打入2ml生理盐水，吸出腹腔液放入EP管中。用200ul加样器在新的EP管中加入100ul腹腔液，再加入20-25ulGiemsa-wright染色液，混匀后取出20ul加在载玻片上，上面盖好盖玻片后，显微镜下观察。结果判断用40倍镜查找观察100个巨噬细胞，计数其中未吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数、吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞数及被吞噬的鸡红细胞数，计算吞噬百分率及吞噬指数。吞噬百分率:有吞噬作用的巨噬细胞数／100×100％吞噬指数:有吞噬作用的巨噬细胞吞入的鸡红细胞总数／100细胞毒试验细胞毒试验的分类抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC）补体依赖的细胞毒试验（CDC）细胞介导的细胞毒试验

NK细胞介导的细胞毒试验抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC）ADCC反应是由多种不同效应细胞群介导的杀伤性效应机制之一。

NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞具有杀伤作用。观察靶细胞被破坏的程度，用来判断它们的细胞毒性。补体依赖的细胞毒试验（CDC）实验原理：细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3或IgM)结合后，可激活补体活化的经典途径，引起细胞膜受损，细胞膜通透性改变，而使细胞外低渗的液体（水）进入细胞，使细胞胀大死亡。CELLMAC胸腺细胞或脾细胞

抗Thy-1抗体++补体

细胞溶解现象细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验是检测细胞毒性T细胞(CTL)对靶细胞的杀伤作用。CTL对靶细胞具有直接杀伤作用，能特异杀伤某些肿瘤细胞或病毒感染的细胞。CTL的细胞毒活性是评价机体细胞免疫功能的指标，但其检测需要抗原预先致敏。测定肿瘤患者CTL对瘤细胞的杀伤作用对判断肿瘤预后及观察疗效有重要意义。NK细胞介导的细胞毒试验NK细胞：无需抗原预先致敏就能杀伤靶细胞的大颗粒淋巴细胞、对肿瘤细胞及某些病毒感染的细胞具有明显的杀伤作用。NK细胞杀伤方式：１.直接接触启动杀伤：NK细胞一旦与靶细胞结合后，即可被