MALDI-TOFMS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱培训预习提纲教学教材

资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除【MALDI-TOFMS】（基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱）培训预习提纲一仪器概况仪器名称：基质辅助激光解析电离一飞行时间质谱仪MatrixAssistedLaserDesorptionIonization-TimeofFlightMassSpectrometerMALDI-TOF公 司：美国应用生物系统AppliedBiosystem型 号：VoyagerDE—STR特 点：DEDelayedExtraction 延迟引出PSD：PostSourceDecay源后裂解技术指标：MassAccuracyLinearMode,ExternalCalibration:word可编辑资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除W±0.05%forangiotensin[1,296.6853]andmyoglobin[16,952.5].ReflectorMode,ExternalCalibration:^±0.008%forACTH18-39[m/z2,565.1989].W±0.005%forE.colithioredoxin[m/z1,1674.4]±0.005%forACTH18-39MassResolution:ReflectorResolution:三20,000forinsulin(m/z5,734).三12,000forACTHclips.LinearResolution:三3,000angiotensin.三3,500forACTH18-39[m/z2,465.1989].三1,000formyoglobin(m/z16,952).二100forBSA(m/z66,431).word可编辑资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除Sensitivity:Routinedetectionof5fmolofneurotensinwithasignaltonoiseration(S/N)>80:1.Post-SourceDecayMassAccuracy:W0.2withdefaultcalibration.应用：MALDI-TOF仪器作为一种可以确定大分子精确分子量的工具，可以对纳米材料、生物材料，高分子聚合物等的分子量及聚合度进行测定及碎片结构定性，有机合成反应的质量评价，蛋白质、多肽、核酸、寡糖等生物分子的分子质量测定蛋白质、多肽酶解产物肽图谱测定，蛋白质、多肽的氨基酸顺序分析。二原 理1.质谱仪分类word可编辑

资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除昔机赧酒仪从岗用用度分一机制谱仪从岗用用度分同位素质谙仪

气体分析质谱位其中有机质谱仪由于应用特点不同又分为，(I)飞相色谱一统谓联用仪(GC-MS)「•气相色港一四梭版评仪(Qiiadinple>-气相色谱一飞行时间质谱仪(TinwOfFlight)1 气相色谱一离子防质滑仪(Ion力叩)C2) 液相色港一班请服用仪CLC-MS)f 液相色谱一四极质谱仪｛Quadruple《液相色雅一飞行时间质犍仪《TimeOfFlight)、 液相色诰一肉『副质谱位LionTrap?⑶其他基质辅助激光解析电离一飞行时间质诺仪(Maldi-TOF)' 傅利叶变换脑谱仪CFT-MS)无机侦i帮父也括：[ 火花源双聚焦质谱仪■怯入离F悻质请慎<InductivelyCoupledPlasma.ICPMS1 -；父离亍丽谱仪(SetMidary-Iqq,SIMS)从痂潴分析器的不同价'双聚焦质揩仪四极杆质谱•便飞行时间旗谱仪离子耕质谱仪傅利叶变换质湾健word可编辑从痂潴分析器的不同价资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除一般质谱仪结构a.离子源IonSource电子电离源(ElectronIonization,EI)化学电离源(ChemicalIonization,CI)快原子轰击源(FastAtomBombardment,FAB)电喷雾源(ElectronSprayIonization,ESI)大气压化学电离源(AtmosphericPressureChemicalIonization,APCI)激光解析源(LaserDesorption,LD)b.质量分析器MassAnalyzer双聚焦分析器(DoubleFocusingAnalyzer)四极杆分析器(QuadrupleAnalyzer)word可编辑资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除飞行时间质量分析器(TimeOfFlightAnalyzer)离子阱质量分析器(IonTrapAnalyzer)傅利叶变换离子回旋共振分析器(FourierTransformIonCyclotronResonanceAnalyzer)c.检测器Detectord.真空系统VacuumSystemMALDI-TOF原理MALDI MatrixAssistedLaserDesorptionIonization基质辅助激光解析电离基质对分析物起着溶剂的作用，并且把分析物分子彼此分离开，从而减少了分子间的很强的相互作用力，使分析物簇群形成的可能性减至最小；当激光脉冲照射时，由于基质浓度远高于分析物浓度，确保激光能量大部分被基质吸收而最小限度地照射分析物。基质分子吸收的能量转变成固体混合物内基质的电子激发能，瞬间使其由固态转变成气态，形成基质离子。word可编辑资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除在中性分析物和激发出的基质离子、质子及金属阳离子之间的碰撞过程中，发生了分析物的离子化，便产生了质子化分子或阳离子化分子。这过程并不导致高分子发生链断裂，通常只生成分子离子及分子离子的多聚体。离子化后的分子被电场加速进入飞行时间质量分析器而被检测。TOF——TimeOfFlight飞行时间假设被分析物离子化后带电荷为ze,加速电压V和飞行距离L一定，被电场加速后的分子离子具有相同的动能:即质荷比与飞行时间t的平方成正比。只要测得飞行时间，即可换算成质荷比。在检测时，质荷比小的离子先到达检测器。注意:这里是质荷比，而非分子量，与分子离子所带的电荷数有关。word可编辑资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除Maldi-TOF的特点(1)软电离，不会把分子打碎(2)检测范围宽(〉400KDalton)(3)可以检测混合物(4)耐盐(5)灵敏度高(可达fmol级)Etc.突出特点：DE-DelayedExtraction延迟引出PSD-PostSourceDecay源后裂解ABI公司的VoyagerDE-STRMALDI-TOFMS提高仪器分辨率采取了两个行之有效的方法：Reflector增大了离子飞行路程且不增加飞行管长度，提高了分辨率DelayedExtraction延迟引出技术VoyagerDESTRMS仪器构造word可编辑资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除LineardetectorWiderTimedIonSelectorNewFocusingLensandBeamSteeringPlateNew6micronReflectorDetectorWiderReflectorEntranceAperture真空系统VacuumSystem激光源LaserN2,337nm,LaserIntensityLineardetectorWiderTimedIonSelectorNewFocusingLensandBeamSteeringPlateNew6micronReflectorDetectorWiderReflectorEntranceAperture真空系统VacuumSystem激光源LaserN2,337nm,LaserIntensity可调高压HighVoltageSamplepfateatVariablevoltagegridheldacceleratingata%Qftheaccel.voltagevoltaGroundedgridPotentialGradientIonizationRegionword可编辑资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除高压范围：20-25KV涉及到的参数：DelayTime,grid%d.飞行管d.飞行管FlightTube无场区，离子匀速飞行e.检测器e.检测器Detector共有两个检测器：Reflector/Linear（对应两种模式）检测器类型：MCP（MicrochannelPlate微通道片/alsoMultichannelPlate多通道片）6实验成功的关键因素a.基质Matrix基质的作用：一是从激光脉冲中吸收能量；二是使被测分子分离成单分子状态。第一个作用要求基质对激光光源有很强的吸收，因此目前文献报道的基质化合物均为含苯环的有机化合物;第二个作用要求基质和被测高分子具有很好的相容性，同时不能有分子间的相互作用。word可编辑资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除b,离子化试剂IonizationAgent合成高分子化合物一般难以通过加质子使其离子化，往往需要添加碱金属盐类或银、铜等过渡金属盐类形成离子络合物，达到离子化的目的。对于极性高分子化合物（含有杂原子，如PMMA）来说，碱金属盐类是比较有效的离子化试剂。（NaTFA）没有杂原子的非极性合成高分子（如PS）,加入银或铜盐后可以成功的离子化。（AgTFA）含胺官能团的化合物（如蛋白质、多肽），可有基质帮助（提供氢离子）直接质子化，不需外加金属离子。c,溶剂Solvent溶剂对分子量和分子量分布均有一定的影响。理想的情况是基质、样品和盐都使用同一种溶剂，以免结晶时分层。选择溶剂的先后：水、水+乙月青+TFA、THF或甲醇、其他word可编辑资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除d,样品制备技术如合适的浓度、配比、点样方法等。7综述文献MassSpectrometryofPolymersandPolymerSurfaces,S.D.HantonChem.Rev2