高中生物选修一专题二课题微生物的实验室培养学案

选修一：题二：题1微物的实验培养学【课程目标:【课题重点:

了解培养基的基知识，进行微生物培养和无菌术的操作。无菌技术的操作【课题难点

无菌技术的操作基础知识一、培养基1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出其的营基质叫培养基。可为培养和培基2．营养构成：各种培养基一般都含有、、和，此外还要满足微物生长对、以的求。3培养乳酸杆菌时需在培养基中加、养霉菌时需将培养基PH调至养菌时需将PH至养氧微生物则需提供

条件。〖思考1〗从胞的化学元素组成来看，养基中为什么都含有这些营养分？【补充1】碳：如CO2、糖、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的合物既可以作为碳源，又可以为氮源，如氨基酸等。二无技：读“无菌技术”，讨论回答下问题：(一)获得纯净培物的关键是具操作如下：实操作的作者的和进。．将用于微生物培养的、和等具进行。．为避免周围环境中微生物的染，实验操作应在附近行。4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接。(二)消毒和灭菌1消毒是指。常用的方法有、、消毒。2．灭菌是指。用的方法有：、、灭菌分别适用于那些用具〖思考〗无菌技术了防止培养物被污染外，还具有目的是什么？〖思考〗利用干热菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能得太挤，目的是什么？

〖思考〗物品装入压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续热，气压升至，温度为，维持；后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时开锅盖，其目的是防止。实操大杆的化培：本实验所用的培基是，本验可分成两个阶段进行。一备肉蛋白固培养

和1

制

备

牛

肉膏

蛋

白

胨

固体

培

养

基

的操

作

步

骤是、、、、。〖思考5制备牛肉膏蛋白胨固培养基的称量操作中作要迅速因什么？溶化操作中需要断用玻璃棒搅拌的目的是什么〖思考6〗牛膏和蛋白胨主要为微生物供什么等营养物质？2．倒平：待培养基冷却至℃左右时在酒精灯火焰附近作进行。其过程是：①在火焰旁右手，手；②使锥形瓶的瓶；③左手将培养皿，右手，立刻盖上皿盖。④待平板冷却凝后，将平板。〖思考7〗锥瓶的瓶口通过火焰的目的什么？〖思考8〗倒板的目的是什么？〖思考9〗若盖和皿底之间粘有培养基则该平板能否培养微生物？为么？〖思考10〗制斜面培养基作用是什么？，试管为什么加塞棉塞？二纯大杆菌微生物接种：最用的是接种和斜面接种。．平板划线法是

法和

法。另外还有穿的操作，将聚集的菌种逐稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：将

在酒精灯火焰上烧直至。在酒精灯火焰旁冷却接种环，打开大肠杆菌的菌种试管的棉。③将菌种试管口通过火焰达到的目的。④将冷的接种环伸入到。将菌种试管再次通过火焰后塞上棉塞⑥将皿盖打开一条缝隙，把接环，上皿盖要破培养基⑦灼烧接种却后从重复上述过程完三四五区域内划线注意不要将

划线。相连。

⑧将平板

培养。〖思考11〗菌种前灼烧接种环的目的是什么？为什么除第一次线外，其余划线前都要灼烧接环？取菌种和划线前要求接种环冷却后进行，其目是？最后灼烧接种环目的是？。在第1次线后都上次划线末端开始的目的是。2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将进行培养。当稀倍数足够高时，即可获得单个菌形成的标准菌落。系列稀释操作：①取盛有mL水的无试管6，编号101、102、104、105、106。②用灼烧冷却的液管吸取mL菌注入编号为试管中，并吹打3次使之混匀。③从101倍液中取mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀获得102倍液。依此类推。〖思考12〗列稀释操作的注意事项是什么？〖思考13〗布平板操作的步骤是什么？结分与价1培未接种培养基的作用是什么，若有菌落形成，说明什么2在汤培养基上，大肠杆菌菌落色？形态？3培和24h后的菌落大？；菌落分布位置

原因？〖思考14〗某培养基上出现了特征不同的菌落是什么原因？〖思考15〗繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存种的方法是什么？典精

类一生物营要素【例1下列关于微生物营养的说法，正确的是………………)

．同一种物质不可能既作碳源作氮源B．凡是碳都能提供能量．除水以外的无机物仅提供无盐．无机氮源也能提供能量类二菌技【例2】细菌养过程中分别采用了高压蒸气、精、火焰灼烧等几种不同的理，这些方法依次用杀灭哪些部位的杂菌……)A．接种针、手、培养基．高压锅、手、接种针C．培养基、手、接种针D．接种针、、高压锅类三

制培基【例3以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是…………)．操作顺序为计算、称量、溶、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯C．待培养基冷却至℃左右时进行倒板D．待平板冷却凝固约～10min后平板倒过来放置【例4下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A.防杂菌污染B.消杂菌C.培养基和发酵设备都必须菌D.灭必须在接种前

eq\o\ac(

,知)eq\o\ac(

,)识展3．毒灭的区消毒是一种采用温和的理化因素，仅杀死物体面或内部一部分对人体有害的病菌，而对被消毒物体基本无害的措施。例如一常用的对皮肤、水果、饮用水进药剂消毒的方法；对酒、牛奶、果汁和酱油等进行毒处理的巴氏消毒法，等等。灭菌是采用强烈理化因素使任何物体内外部的切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。例如种高温灭菌措施等。4．生的养类异养微生物生命动所需要的能源，主要靠有机氧化分解释放能量，碳源是异养生物的主要能源质，碳源对异养微生物来说，仅可为机体提供构成细胞物质，且为机体提供完成整生理活动所需能量异养微生物也可以光能作为能源如红螺菌，在环境中没有有物的条件下，它可以利用光能把环境中的CO合为身有机物；在有有机物存在的件下，可以利用有机物进行生，其代谢类型为兼性营养型细菌依微生物生长所需碳的性质以及所需能源，将微生的营养类型归纳如下：各类微生物所需源和能源的比较在生产实践和社生活中，我们可以利用某些微物碳源的特殊性来解决环境污染粮食危机等问题我们可以利用某些细菌、放线、酵母菌以石油作为碳源的原理消除石油污染。运用些细菌可以分解、利用氰化物酚等有毒物质的原理处理有毒物。研究开发以纤维素石油CO等作碳源和能源的工业微生物，解粮食危机。自养微生物和异微生物类型的划分主依靠能否以作生长的主要或唯一碳

源，而不是决定氮源。例如异养微生物最常用氮源是无机氮源中的铵盐和硝酸。【补充】生长因：某些微生物正常生长代谢过中必须从培养基中吸收的微量有小分子，如某些基酸、碱基、维生素等。【补充】培养基配制原则：①目的要明确：据培养的微生物种类、培养的的等确定培养基的类型和配制量②营养要协调：养基中各种营养物质的浓度和例要适宜。例如：碳氮4∶1时谷氨酸棒状杆菌量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮为3∶1时菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要适宜：细菌培养pH中性或偏性，霉菌培养基呈酸性。知拓题为了测用中是含某细菌配如下养：成

乳

蔗

磷氢

伊Y

美

蒸水

PH含

5g

5g

2g0.4g

0.065g

1000g

7.2（1）该养基的是-----------------功能---------------------------。（2）该养基含的是-----------------能---------------------------。（）该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养物质是---------------------------。（4该菌同化用的代类是--------------（5该养用来别细菌（）A霉大杆C酵母菌D

乳菌微物实室培一、选题1．下列有关培养基的叙述正确的是…)

基自

．培养基是为微生物的生长繁提供营养的基质．培养基只有两类：液体培养和固体培养基．固体培养基中加入少量水即制成液体培养基．微生物在固体培养基上生长，可以形成肉眼可见的单个细菌2.不培养基的具体配方不同，但一般都(．碳源、磷酸盐和维生素．源和维生素．水、碳源、氮源和无机盐．元素、氧元素、氢元素、氮元3．获得纯净培养物的关键是…………)．将用于微生物培养的器皿、种用具和培养基等器具进行灭菌B．接种纯种细菌．适宜环境条件下培养D．止外来杂菌的入侵4．下列常用的无菌操作中错误的是…)．用酒精擦拭双手．氯气消毒水源．实验操作应在酒精灯火焰附进行D．璃器(吸管培养)可酒精擦拭5．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤()．计算、称量、倒平板、溶化灭菌．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌．计算、称量、溶化、灭菌、平板．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板6．有关倒平板的操作错误的是………)．将灭过菌的培养皿放在火焰的桌面上．使打开的锥形瓶瓶口迅速过火焰．将培养皿打开，培养皿盖倒在桌子上．等待平板冷却凝固后需要倒来放置7．有关平板划线操作正确的是………)．使用已灭菌的接种环、培养，操作过程中不再灭菌．打开含菌种的试管需通过火灭菌，取出菌种后需马上塞上棉．将沾有菌种的接种环迅速伸平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放人培养箱中培养8．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是()．首先将菌液进行一系列的梯稀释．然后将不同稀释度的菌液分涂布到琼脂固体培养基的表面．再放在适宜条件下培养D．结果都可培养基表面形成单个的菌落9．涂布平板操作需要用到……………)．接种环、滴管、酒精灯B．接种环、液管、酒精灯．涂布器、移液管、酒精灯D．涂布器、种环、酒精灯10．接种后的培养基和一个未接种的培养基都入37℃恒箱的目的是………()．对比观察培养基有没有被微物利用B．对比分析养基是否被杂菌污染C．没必要放人未接种的培养基．了下次接种时再使用11关生物营养物质的述中，正确的是A.是源的物质不可能同时是氮源凡源都提供能量C.除以外的无机物只提供无机盐无氮源也能提供能量12．为自养生物唯一碳源的是（）A糖类B石油C二化碳D花粉饼13．肠杆菌的代谢类型是（）A自养需氧B异严格厌氧C异需氧D异兼厌氧14．种保藏应控制的条件是（）

（1湿度（2低温（3）干（4）有（5隔绝空气（6适当有氧A（1B）C（1）D）15．列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（）A含碳机物B蛋胨C含碳无机物D花生粉等天然物质16．板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（）A利于肠杆菌的接种B防止杂菌污染C利于养的冷却D防皿盖冷却水倒流入培养基17．、H、O、N的大子化合可以作为（）A异养生物的氮源、能源B异养生物的碳源、氮源C自养生物的氮源、能源、碳源自微生物的氮源、能源、碳源二非择18．鉴定培养基制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在中温天看有无，如果没有说明制作合格，反之不合格。19．你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭。如果需要，请选择合适的方法(1)养细菌用的培养基与培养皿(2)棒、试管、烧瓶和吸管(3)验操作者的双手(1)、(2)、(3)20世中系法国经济命的酿造业曾一度遭受毁灭性的打生产过程中，出现了葡萄酒变、变味的怪事。(1)据你所掌握的知识分析导致生产失败的根源是什?(2)此得出研究和应用微生物的前提是防止。21．倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅皿盖与皿底之间的部位，这个平还能用来培养微生物?为什么22．做第二次以及其后的划线操作时，为什么是从上一次划线的末端开始划?微物实室培考案基知一、1.营养物质生繁殖液体固

2水碳源氮源无机PH特殊营养物质氧3维生，酸性，中性或微碱性，无氧〖思考〗:C、H、、N、、构成细胞原生质的基本元，约占原生质总量的97％以上。二一）杂菌1.空衣手，清洁和消毒2.器皿接种用具，培养基，灭菌3.酒精灯火焰4.周围的物品（二）略巴氏消酒精2.略灼烧干高蒸气〖思考〗防感染实验操作者。〖思考〗避免妨碍空气流通。〖思考〗有利于锅温度升高100kPa，℃～，零，容器中的液体暴沸，实验操作、一1计算→量→溶→→倒平板思考：防止牛肉膏吸收空气中水分。防止琼脂糊底而致烧杯破裂。〖思考〗糖维生素和有机氮2，锥形瓶，拔出棉塞，迅速通过火焰，打开条缝隙，将培养基倒入培养皿，倒过来放置〖思考〗消灭瓶口杂菌，防止杂菌感染培养基。〖思考〗防止培养冷却过程中形成的水滴落到培养表面。〖思考〗不能。空中杂菌会在这些粘附培养基上繁，并污染皿内培养基。〖思考〗增大接种面积，保持通气并防止杂菌感。答案。二、平板线稀涂布平板1通过种环在琼脂固体培养基表面连续线，①接种环，烧红。③，消灭试管口杂菌。④菌液中取出一菌种。⑥，伸入平板内划3～5条平行，⑦，第一区划线末端开始向第二区域内，第五区的划线与第一区划线⑧，倒置放在培养箱中〖思考消接种环上的微生物目的是消灭接种环上残留菌种止高温杀死菌种；防止细菌染环境和操作者。获得由单个菌形成的标准菌落。2不同释度的菌液分别涂布到琼脂固体养基的表面，①，9mL，灭菌。②，1。③，1〖思考〗操作中试管口和移液管应在离火焰1～处。整个操作过中使用了1支液管结分与价

1对培基灭菌不彻底白色为形光有光泽边缘整齐3大不同；菌落分布位置相。原因是时间越长，菌落中细繁殖越多，菌落体积越大；菌落位置不动，但菌落数多。〖思考〗有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。〖思考临保藏法和甘油管藏法者利用固体斜面培养基培养存在4℃冰箱中，每～个月种培养一次，缺是保存时间较短，容易发生污和变异；后者将菌种与无菌体等量混合后保存在－20冷冻箱中。【例1解析此考查学生对生物的营养和能源的理解异养微生物来说含C、O、N的合物既是碳源，又是氮源CO是能自养细菌的碳源，但能提供能量CO和N。是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提用以化能合成作用的能源。答D启示：含C、H、o、N的合物既是微生物碳源，又是微生物的氮源；有机碳源能提供能量，无机源不能提供能量；无机物也可供碳源、氮源和能源。【例2】解析：此题考查学生对无菌技术的掌。高压蒸气灭菌锅是灭菌的个设备，通常用于培养基灭菌。用酒精擦拭双手是消毒一种方法。火焰灼烧，可以迅速底地灭菌，适用于微物的接种工具，如接种环。答