酶的非水相催化

酶的非水相催化酶的非水相催化第1页Contentsofchapter61、酶催化反应介质2、有机介质反应体系

3、酶在有机介质中催化特征

4、有机介质中酶催化反应条件及其控制

GoGoGoGo5、酶非水相催化应用

Go酶的非水相催化第2页6.1酶催化反应介质水是酶促反应最常见反应介质但对于大多数有机化合物来说，水并不是一个适宜溶剂。因为许多有机化合物(底物)在水介质中难溶或不溶。因为水存在，往往有利于如水解、消旋化、聚合和分解等副反应发生。是否存在非水介质能确保酶催化？？在活细胞中酶大多集中在水和有机溶剂界面，酶在细胞中作用模型是含水有机溶剂系统酶促反应。酶的非水相催化第3页Hill.A.C(1898)J.Chem.Soc,73,634-658Kastlc,J.C.andLocvCnhart,A.a.(1900)AmChem,J,24,491-525Sym,E,A(1933)Biochem,Z,258,304-324Sym,E,A(1936)Enzymologia1,156-160失败原因？酶催化反应介质酶的非水相催化第4页Klibanov试验酶的非水相催化第5页酶催化反应介质Zaks,A.andKlibanov,A.M(1984),Science224,1249-1251ZaKs,A.andKlibanov,A.M.(1985),Proc.Natl,Acad,Sci.u.s.a.82,3192-3196.成功原因？酶的非水相催化第6页酶非水相催化类型有机介质中酶催化

有机介质中酶催化是指酶在含有一定量水有机溶剂中进行催化反应。适合用于底物、产物二者或其中之一为疏水性物质酶催化作用。酶在有机介质中因为能够基础保持其完整结构和活性中心空间构象，所以能够发挥其催化功效。气相介质中酶催化

酶在气相介质中进行催化反应。适合用于底物是气体或者能够转化为气体物质酶催化反应。因为气体介质密度低，扩散轻易，所以酶在气相中催化作用与在水溶液中催化作用有显著不一样特点。酶的非水相催化第7页酶非水相催化类型超临界介质中酶催化酶在超临界流体中进行催化反应。超临界流体是指温度和压力超出某物质超临界点流体。

离子液介质中酶催化酶在离子液中进行催化作用。离子液（ionicliquids）是由有机阳离子与有机（无机）阴离子组成在室温条件下呈液态低熔点盐类，挥发性低、稳定性好。酶在离子液中催化作用含有良好稳定性和区域选择性、立体选择性、键选择性等显著特点。酶的非水相催化第8页6.2有机介质反应体系非极性有机溶剂酶悬浮体系(微水介质体系)

用非极性有机溶剂取代全部大量水，使固体酶悬浮在有机相中。但依然含有必需结合水以保持酶催化活性(含水量普通小于2%)。酶状态能够是结晶态、冻干状态、沉淀状态，或者吸附在固体载体表面上。与水互溶有机溶剂水单相体系有机溶剂与水形成均匀单相溶液体系。酶、底物和产物都能溶解在这种体系中。非极性有机溶剂水两相/多相体系由含有溶解酶水相和一个非极性有机溶剂(高脂溶性)相所组成两相体系。酶的非水相催化第9页（正）胶束体系：胶束又称为正胶束或正胶团，是在大量水溶液中含有少许与水不相混溶有机溶剂，加入表面活性剂后形成水包油微小液滴。◆表面活性剂极性端朝外，非极性端朝内，有机溶剂包在液滴内部。◆反应时，酶在胶束外面水溶液中，疏水性底物或产物在胶束内部。反应在胶束两相界面中进行。反胶束体系：又称为反胶团，是指在大量与水不相混溶有机溶剂中，含有少许水溶液，加入表面活性剂后形成油包水微小液滴。◆表面活性剂极性端朝内，非极性端朝外，水溶液包在胶束内部。◆反应时，酶分子在反胶束内部水溶液中，疏水性底物或产物在反胶束外部，催化反应在两相界面中进行。不论采取何种有机介质反应体系，酶催化反应介质中都含有机溶剂和一定量水。它们都对催化反应有显著影响。

酶的非水相催化第10页一、反应体系中水对酶催化反应影响天然酶都溶于水，只有在一定量水存在条件下，酶分子才能进行催化反应。所以酶在有机介质中进行催化反应时，水是不可缺乏成份之一。有机介质中水含量多少对酶空间构象、酶催化活性、酶稳定性、酶催化反应速度等都有亲密关系，水还与酶催化作用底物和反应产物溶解度相关。酶分子只有在空间构象完整状态下，才含有催化功效。在无水条件下，酶空间构象被破坏，酶将变性失活。故此，酶分子需要一层水化层，以维持其完整空间构象。有机介质中水含量对酶催化反应速度有显著影响。存在最适水含量。酶的非水相催化第11页必需水猪胰脂肪催化甘油三丁酸酯和正庚醇转酯反应酶的非水相催化第12页1、必需水概念紧紧吸附在酶分子表面，维持酶催化活性所必需最少水量，称为必需水。酶的非水相催化第13页干燥酶水合过程⑴与酶分子表面带电基团结合到达0-0.07g水/g酶；⑵与酶分子表面极性基团结合(0.07-0.25g/g)；⑶凝聚到酶分子表面相互作用较弱部位（0.25-0.38g/g）；⑷酶分子表面完全水化，被一层水分子覆盖。酶的非水相催化第14页2、酶活与水关系：酶活最大时——蛋白质结构动力学刚性和热力学稳定性（柔性）之间到达最正确平衡点。“刚柔并济”酶的非水相催化第15页3、影响酶必需水含量原因（酶和溶剂）a．不一样酶需水量不一样溶菌酶在含水量38%以上，即每个酶分子周围有300个以上水分子，整个酶被一层单分子水层所包围，酶活性才能发挥。在辛烷中糜蛋白酶催化仅需吸附50个水分子脂肪酶仅需几个水分子就可显示出活性。b.同一个酶在不一样有机溶剂中最适反应需水量不一样溶剂疏水性越强，需水量越少。酶的非水相催化第16页4．表征必需水作用参数---热力学水活度水活度（wateractivity)：特定温度和压力条件下，反应体系中水摩尔分数Xw与水活度系数гw乘积：аw

=гw×Xwгw是溶剂疏水性函数，溶剂疏水性越大，гw越大。аw

是一个强质性质物理量，在平衡状态时，反应体系中各组分（酶、溶剂、底物和产物）аw

是相同。酶的非水相催化第17页酶的非水相催化第18页研究水活度意义1、最正确水活度与溶剂极性几乎无关，大约在0.55左右。2、能够排除溶剂对最适含水量影响。3、水活度可由反应体系中水蒸汽压除以在相同条件下纯水蒸汽压而测得。酶的非水相催化第19页二、有机溶剂对酶催化反应影响

常见有机溶剂有辛烷，正己烷，苯，吡啶，丙醇，乙腈，二氯甲烷等。1、有机溶剂对酶结构与功效影响

在有机溶剂中，酶分子（经过修饰后可溶于有机溶剂者除外）不能直接溶解，而是悬浮在溶剂中进行催化反应。依据酶分子特征和有机溶剂特征不一样，保持其空间结构完整性情况也有所差异。酶在有机介质中与有机溶剂接触，酶分子表面结构将有所改变。当酶悬浮于有机溶剂中，有一个别溶剂能渗透到酶分子活性中心，会降低活性中心极性，可能降低酶与底物结合能力；可能与底物竞争活性中心结合位点，降低底物结合能力，从而影响酶催化活性。酶的非水相催化第20页2、有机溶剂对酶活性影响

极性较强有机溶剂，如甲醇，乙醇等，会夺取酶分子结合水，影响酶分子微环境水化层，从而降低酶催化活性,甚至引发酶变性失活。所以应选择极性适宜溶剂，控制好介质中含水量，防止酶在有机介质中因脱水作用而影响其催化活性。有机溶剂极性强弱能够用极性系数lgP表示。P是指溶剂在正辛烷与水两相中分配系数。极性系数越大，表明其极性越小；反之极性系数越小，则极性越强。研究表明，有机溶剂极性越强，越轻易夺取酶分子结合水，对酶活力影响就越大。极性系数lgP<2极性溶剂普通不宜作为有机介质酶催化溶剂使用。酶的非水相催化第21页（1）单相共溶剂体系中，有机溶剂对酶活性影响有机溶剂直接作用于酶，破坏维持酶活性构象氢键和疏水作用力，或破坏酶周围水化层，使酶失活或变性。有些酶活性会伴随一些有机溶剂浓度升高而增大，在某一浓度（最适浓度）到达最大值；若浓度再升高，则活性下降。（2）低水有机溶剂体系中，大个别酶活性得以保留，但也有一些酶活性亦改变。酶的非水相催化第22页（3）反向微团体系中，微团效应使一些酶活性增加酶活力依赖微团水化程度，即取决于水与表面活性剂摩尔比（R）。超活性：凡是高于水溶液中所得酶活性值活性称为超活性（Super-activity）。认为：超活性是由围绕在酶分子外面表面活性剂这一外壳之较大刚性所引发。酶的非水相催化第23页超活性产生机理酶的非水相催化第24页根据

（1）微团水化程度（W）（W=[H2O]/[表面活性剂]）最正确值和酶活性最大值呈正相关。（２）W值最正确时，微团内径总是相当于被包裹酶分子直径。酶的非水相催化第25页3、有机溶剂对底物和产物分配影响◆有机溶剂与水之间极性不一样，在反应过程中会影响底物和产物分配，从而影响酶催化反应。◆有机容剂能改变酶分子必需水层中底物和产物浓度。◆普通选取2≤lgP≤5有机溶剂作为有机介质为宜。酶的非水相催化第26页6.3酶在有机介质中催化特征

酶在有机介质中起催化作用时，因为有机溶剂极性与水有很大差异，对酶表面结构、活性中心结合部位和底物性质都会产生一定影响，从而显示出与水相介质中不一样催化特征。酶的非水相催化第27页

◆在有机介质中，因为酶分子活性中心结合部位与底物之间结合状态发生一些改变，致使酶底物特异性会发生改变。◆不一样有机溶剂含有不一样极性，所以在不一样有机介质中，酶底物专一性也不一样。在极性较强有机溶剂中，疏水性较强底物轻易反应；而在极性较弱有机溶剂中，疏水性较弱底物轻易反应。

1、底物专一性酶的非水相催化第28页2、对映体选择性（enantioselectivity）又称为立体选择性或立体异构专一性，是酶在对称外消旋化合物中识别一个异构体能力大小指标。◆酶在有机介质中催化，与在水溶液中催化比较，因为介质特征发生改变，而引发酶对映体选择性也发生改变。◆酶在水溶液中催化立体选择性较强，而在疏水性强有机介质中，酶立体选择性较差。酶的非水相催化第29页3、区域选择性酶在有机介质中进行催化反应含有区域选择性（regioselectivity）,即酶能够选择底物分子中某一区域基团优先进行反应。4、键选择性：酶在有机介质中进行催化反应含有化学键选择性。键选择性与酶起源和有机介质种类相关。

酶的非水相催化第30页5、稳定性热稳定性提升；储存稳定性提升例：丹麦Nove企业生产脂肪酶LipozymeTM，在水溶液中60℃保温1小时后剩下酶活只有10%，而在橄榄油中一样条件下脂肪酶剩下酶活仍近100%。60℃对乌桕脂和硬脂酸甲酯转化反应24小时后，酶仍保持82%。酶的非水相催化第31页

在低水有机溶剂体系中，酶稳定性与含水量亲密相关；普通在低于临界含水量范围内，酶很稳定；含水量超出临界含水量后酶稳定性随含水量增加而急剧下降。酶的非水相催化第32页6、pH值特征◆在有机介质反应中，酶所处pH环境与酶在冻干或吸附到载体上之前所使用缓冲液pH值相同。这种现象称之为pH印记（pH-imprinting）或称为pH记忆。◆酶在有机介质中催化反应最适pH值通常与酶在水溶液中反应最适pH值靠近或者相同。利用酶这种pH印记特征，能够经过控制缓冲液中pH值方法，到达控制有机介质中酶催化反应最适pH值。酶的非水相催化第33页有机相酶反应优点1．有利于疏水性底物反应，能催化在水中不能进行反应。2．可提升酶热稳定性。3．可改变反应平衡移动方向。4.可控制底物专一性。5.酶和产物易于回收。6.可防止微生物污染。酶的非水相催化第34页6.4有机介质中酶催化反应条件及其控制◆酶在有机介质中能够催化各种反应，主要包含：合成反应、转移反应、醇解反应、氨解反应、异构反应、氧化还原反应、裂合反应等。◆酶在有机介质中各种催化反应受到各种原因影响：酶种类和浓度、底物种类和浓度、有机溶剂种类，水含量、温度、pH和离子强度等。酶的非水相催化第35页酶种类选择：应含有对有机介质变性潜在能力，在有机介质中能保持其催化活性构象，还要尤其注意酶稳定性、底物专一性、对映体选择性、区域选择性、键选择性等。酶形式选择：⑴酶粉：a-胰凝乳蛋白酶在酒精中转酯反应，催化活性随反应体系中酶量降低而显著增加。⑵化学修饰酶：SOD经糖脂修饰后变成脂溶性，对温度、pH、蛋白酶水解稳定性均高于天然SOD。⑶固定化酶：酶固定在不溶性载体上，反抗有机介质变性能力、反应速度、热稳定性等都可提升。1、酶选择酶的非水相催化第36页固定化载体影响①载体能经过分配效应猛烈地改变酶微环境中底物和产物局部浓度。例：在水浴液中，底物肉桂酸浓度在0.1mmol/L以上可强烈抑制马肝酸脱氢酶，但在乙酸丁酯中使用亲水载体固定化酶，底物浓度高达50mmol/L也不会发生抑制作用。②载体影响酶分子上结合水③经过载体与酶之间形成多点结合作用，可稳定酶催化活性构象。例：α-胰凝乳蛋白酶与聚丙烯酰胺凝胶共价结合后，在乙醇中稳定性显著提升，而且对有机溶剂抗性随酶与载体间共价键数量增加而增强。酶的非水相催化第37页

生物印迹(bio-imprint)是一个经过酶与配体问相互作用、诱导，从而改变酶构象方法。

其原理是利用酶在水溶液中柔性，加人手性竞争性抑制剂，然后将这种酶-抑制剂复合物转入亲脂性溶剂，使酶三维结构以一个改性状态被“冻结”，除去抑制剂改性酶凭借其“记忆”功效就含有了对底物立体选择性。

利用生物印迹方法能够调控酶底物专一性、立体选择性和对映体选择性等。酶的非水相催化第38页生物印迹过程以下：(1)将酶溶于含有其配体缓冲溶液中，使酶构象被诱导而发生改变；(2)将此酶液冷冻干燥形成酶粉，水分不经融化直接升华，能够固定酶构象；(3)用有机溶剂冲洗冻干酶粉，除去印迹分子；(4)将有机溶剂冲洗过酶粉过滤并真空干燥。酶的非水相催化第39页

大家利用酶与配体相互作用性质，诱导改变酶分子构象，制备出含有结合特定配体能力新型酶制剂。Klibanov等将枯草杆菌蛋白酶从含有竞争性抑制剂N-Ac-Tyr配体（竞争性抑制剂）缓冲液中沉淀、干燥、除配体后，放在无水有机溶剂中，发觉被配体印迹后酶催化活性提升100倍，而在水溶液中则无此现象产生。生物印迹实例酶的非水相催化第40页2、底物选择和浓度控制

酶在有机介质中底物专一性与在水溶液中专一性有些差异，所以要依据酶在所使用有机介质中专一性选择适宜底物。底物浓度对酶催化反应速度有显著影响，普通说来，在底物浓度较低情况下，酶催化反应速度随底物浓度升高而增大。当底物到达一定浓度以后，再增加底物浓度，反应速度增大幅度逐步降低，最终趋于平衡，逐步靠近最大反应速度。

酶的非水相催化第41页3、有机溶剂选择

有机溶剂是影响酶在有机介质中催化关键原因之一，在使用过程中要依据详细情况进行选择。有机溶剂极性选择要适当极性过强（lgP<2）溶剂，会夺取较多酶分子表面结合水，影响酶分子结构，并使疏水性底物溶解度降低，从而降低酶反应速度，在普通情况下不选取；极性过弱（lgP＞

5）溶剂，即使对酶分子必需水夺取较少，疏水性底物在有机溶剂中溶解度也较高，不过底物难于进入酶分子必须水层，催化反应速度也不高。通常选取2≤lgP≤5

溶剂作为催化反应介质。

酶的非水相催化第42页有机溶剂与反应匹配性（即相容性）（包含反应产物与溶剂匹配性，极性产物倾向于保留在酶附近，可能引发产物抑制或无须要副反应发生。例：对于酶促糖改性而言，使用疏水性，与水不互溶溶剂是不现实，因为不溶性底物和不溶性酶之间无相互作用，必须用亲水性溶剂（如吡啶或二甲基甲酰胺）例：在己烷中聚苯酚氧化酶催化反应中，极性苯醌产物不溶于己烷，造成在酶周围水层发生不需要聚合，该聚合物缠住酶，降低酶活，而在极性更强氯仿中，苯醌分配到主体溶剂中不会使酶失活。有机溶剂对酶催化反应是惰性例：酯基转移反应包括到醇对于酯亲核攻击而产生另一个酯，假如溶剂也是酯，就会生成以溶剂为基础酯，假如溶剂是醇，也会得到类似结果。酶的非水相催化第43页4、水含量控制

有机介质中，水含量对酶分子空间构象和酶催化反应速度有显著影响。要经过试验确定反应体系最适水含量。最适水含量与溶剂极性相关，通常随溶剂极性增大，最适水含量也增大；而到达最大反应速度水活度却改变不大，都在0.5～0.6之间。在实际应用时应该控制反应体系水活度在0.5～0.6范围内。酶的非水相催化第44页5、温度控制

温度是影响酶催化作用主要原因之一。在最适温度下酶催化反应速度到达最大。在微水有机介质中，因为水含量低，酶热稳定性增强，所以其最适温度高于在水溶液中催化最适温度。要注意是酶与其它非酶催化剂一样，温度升高时，其立体选择性降低。

酶的非水相催化第45页6、pH值控制

酶在有机介质中催化最适pH值通常与在水溶液中催化最适pH值相同或者靠近。在有机介质中，酶催化活性与酶在缓冲溶液中pH值和离子强度有亲密关系。酶分子从缓冲溶液转到有机介质后，酶分子保留了原有pH印记。经过调整缓冲溶液pH和离子强度方法对有机介质中酶催化pH值和离子强度进行调整控制。酶的非水相催化第46页6.5酶非水相催化应用

酶催化反应应用脂肪酶肽合成青霉素G前体肽合成酯合成醇与有机酸合成酯类转酯各种酯类生产聚合二酯选择性聚合酰基化甘醇酰基化蛋白酶肽合成合成多肽酰基化糖类酰基化羟基化酶氧化甾体转化过氧化物酶聚合酚类、胺类化合物聚合多酚氧化酶氧化芳香化合物羟基化胆固醇氧化酶氧化胆固醇测定醇脱氢酶酯化有机硅醇酯化酶的非水相催化第47页一、手性药品拆分

手性药品：化学组成相同，而其立体结构互为对映体两种异构体化合物。酶的非水相催化第48页手性药品两种对映体药理作用药品名称有效对映体作用另一个对映体作用普萘洛尔（Propranolol）萘普生（Neproxen）青霉素胺（Penicillamine）羟基苯哌嗪(Dropropizine)反应停（Thalidomide）酮基布洛芬（Ketoprofen）喘速宁（Trtoquinol）乙胺丁醇（Ethambutol）萘必洛尔（Kebivolol）S构型，治疗心脏病,β-受体阻断剂S构型，消炎、解热、镇痛S构型，抗关节炎S构型，镇咳S构型，镇静剂S构型，消炎S构型，扩张支气管S,S构型，抗结核病右旋体，治疗高血压,β-受体阻断剂R构型，钠通道阻滞剂R构型，疗效很弱R构型，突变剂R构型，有神经毒性R构型，致畸胎R构型，防治牙周病R构型，抑制血小板凝集R,R构型，致失明左旋体，舒张血管1992年，美国FDA明确要求对于含有手性特征化学药品，都必需说明其两个对映体在体内不一样生理活性、药理作用以及药品代谢动力学情况。许多国家和地域也都制订了相关手性药品政策和法规。这大大推进了手性药品拆分研究和生产应用。当前提出注册申请和正在开发手性药品中，单一对映体药品占绝大多数。酶的非水相催化第49页概念⒈光学活性物质：能使平面偏振光旋转化合物为光学活性物质。⒉手性：一个含有光学活性有机物不能与它镜像重合⒊对映异构体：两个互为镜像但不能重合对映体称为对映异构体，它们旋光能力相同，但方向相反。⒋外消旋体：等量对映异构体混合物没有光学活性，成为外消旋体。⒌外消旋体拆分：即利用拆分技术将外消旋体两个对映体分开。经过外消旋体拆分可得纯光绪活性物质。酶的非水相催化第50页光学活性物质制备技术

不对称合成法以含有手性中心天然化合物即手性源为原料，经过传统化学合成方法，保留其活性中心，取得新手性化合物；也能够用前手性底物与手性助剂或手性催化剂反应，生成光学活性产物。酶是一类含有催化活性蛋白质，本身就是手性物质，所以可作为不对称合成手性催化剂。酶的非水相催化第51页外消旋体拆分

利用拆分技术将外消旋体两个对映体分开。非生物拆分法：⑴机械分离法；⑵形成和分离对映体异构法；⑶色谱分离法；⑷动力学拆分。生物拆分法：利用一个酶或一系列酶。酶的非水相催化第52页⑴非水相酶反应应用研究热点是手性产品合成和开发。脂肪酶和酯酶应用最多。工业应用：奥地利Chemie-linz企业已从美国MIT

购置了Klibanov教授非水相酶催化法拆分a-卤代丙酸专利许可，并建立了中试工厂，大批量生产光学活性除草剂中间体。⑵生物拆分法原理：实质为动力学拆分过程，即两个对映体竞争酶同一个活性中心位置，二者反应速率不一样，产生选择性，从而使反应产物含有光学活性。酶的非水相催化第53页生物拆分法快：E+A→E+P慢：E+B→E+Q

表征参数：对映体选择率底物中一对异构体（同一个酶两种竞争性底物）Vm/Km之比；反应某一拆分过程效果，也表征酶选择性大小，是酶反应特征参数。酶的非水相催化第54页二、多肽合成

例：a-胰蛋白酶能够催化N-乙酰色氨酸与亮氨酸合成二肽。水中反应合成率为0.1%以下；在乙酸乙酯和微量水组成系统中，合成率可达100%。酶的非水相催化第55页三、甾体转化

例可松转化为氢化可松酶促反应，在水-乙酸丁酯或水-乙酸乙酯组成系统中，转化率高达100%和90%。酶的非水相催化第56页脂肪酶-位置选择性酯化反应葡萄糖苷-6-O-酰基衍生物是一个可生物降解非离子表面活性剂，它能够用脂肪酸和葡萄糖苷在脂肪酶催化下进行选择性酯化得到：酶的非水相催化第57页糖酯合成酶的非水相催化第58页脂肪酶-消旋化合物选择性酯化以2-取代-1,3-丙二醇和脂肪酸为原料，在有机溶剂介质中用脂肪酶(CCL)或猪肝酯酶（PLE）催化酯化反应，可得到较高光学纯度R-或S-酯。酶的非水相催化第59页脂肪酶-消旋化合物拆分

有机介质中用脂肪酶(PSL)催化酯化用于γ-羟基-α,β-不饱和酯拆分。能够防止副反应发生。酶的非水相催化第60页脂肪酶-内酯合成反应-羟基酸或它酯在脂肪酶催化下，发生分子内环化作用得到内酯化合物。内酯可继续反应形成开链寡聚物.内酯化产物形式主要取决于羟基酸长度外，也取决于脂肪酶类型、溶剂及温度等。酶的非水相催化第61页酶的非水相催化第62页生物柴油

生物柴油是利用生物油脂生产有机燃料，是由动物、植物或微生物油脂与小分子醇类经过酯交换反应而得到脂肪酸酯类物质。能够代替柴油作为柴油发动机燃料使用。

生物油脂起源：菜子油，豆油，椰子油，棕榈油、蓖麻油、棉籽油，葵花籽油，废食用油等优点：（1）含有良好环境属性（2）含有很好低温发动机开启性能。（3）含有很好润滑性能。（4）含有很好安全性能。（5）含有良好燃料性能。（6）含有可再生性能。酶的非水相催化第63页从生物质到生物柴油生物柴油生产装备酶的非水相催化第64页美国生物柴油发展趋势酶的非水相催化第65页生物柴油生产方法当前生物柴油主要是用化学法生产，采取酸、碱催化油脂与甲醇之间转酯反应，而生成脂肪酸甲酯。反应时间短，