安捷伦HPLC工作原理及简单操作

Agilent1260HPLC工作原理及简单操作

10-12-安捷伦HPLC工作原理及简单操作第1页Agilent1260HPLC工作原理及简单操作培训目标：

1.了解HPLC各模块原理；

2.掌握HPLC各模块日常维护关键点；

3.掌握开机，关机。安捷伦HPLC工作原理及简单操作第2页Agilent1260HPLC工作原理及简单操作内容：一、HPLC各模块原理及维护；二、开机/关机操作；

三、讨论；四、评定。安捷伦HPLC工作原理及简单操作第3页一、HPLC各模块工作原理及维护HPLC：高效液相色谱仪（HighPerformancesLiquidChromatography）。

由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、统计仪等几个部分组成。工作时储液器中流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，因为样品溶液中各组分在两相中含有不一样分配系数，在两相中做相对运动时，经过重复屡次吸附-解吸分配过程，各组分在移动速度上产生较大差异，被分离成单个组分依次从柱内流出，经过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到统计仪，数据以图谱形式打印出来。安捷伦HPLC工作原理及简单操作第4页关于溶剂HPLC各模块工作原理及维护全部溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水；全部溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机对应使用有机相滤膜，不能混用。每一次滤膜只能用一次，不能重复使用；假如没有在线脱气机，全部溶剂应经过超声脱气；水易滋生藻类，防止直接照射，过滤水最好使用不要超出两天；假如条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M叠氮化钠；注意溶剂相容性，防止使用不相容溶剂；防止使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂；在溶剂瓶中溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡时，用水冲洗，但不要使用超声处理。安捷伦HPLC工作原理及简单操作第5页关于在线真空脱气机在线真空脱气机管路容量为12ml，压力范围为110Torr-190Torr。为确保脱气机良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路，每个通道使用不低于30ml异丙醇。1，新脱气机或新管路；2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间交换时；3，输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶剂混合物。HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第6页关于泵：（四元泵）HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第7页关于泵（泵头组件）出口球阀BOV清洗阀PurgeValve柱塞杆Piston主动输入阀AVHPLC各模块工作原理及维护活塞外框架SealWash组件泵头密封垫泵腔安捷伦HPLC工作原理及简单操作第8页更换过滤白头在清洗阀中过滤白头需要更换，在清洗状态下，设置流量为5ml/min，此时系统压力假如超出10bar，则需更换过滤白头。更换步骤：1，关闭泵电源；2，用扳手去掉通往进样器上毛细管，拔掉废液管；3，用专用扳手小心把清洗阀卸下来；4，轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封垫，将过滤白头拿出；5，更换新过滤白头，装上聚四氟乙烯密封垫和金密封垫；6，装上清洗阀；7，连接管路。过滤白头聚四氟乙烯密封垫金密封垫清洗阀PurgeValveHPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第9页更换过滤白头1，去掉毛细管，废液管2，卸掉清洗阀3，更换过滤白头4，更换白头，装好清洗阀HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第10页泵注意事项1，溶剂过滤、脱气；2，防止使用腐蚀性溶剂；3，在满足分析前提下，尽可能使用较低流速—较低系统压力。4，更换过滤白头；5，考虑溶剂相容性；6，尽可能使用新鲜水；7，使用0.01M以上浓度缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶剂比如环己烷时，提议使用聚乙烯密封垫，部件号为0905-1420，在0—200Bar下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨损。四元泵：四元泵多通道百分比阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在A、D通道，以防止盐颗粒析出。提议A通道：水；B、C通道：有机溶剂；D通道：缓冲溶液。HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第11页样品准备样品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解过滤样品，确保样品中不含固体颗粒用流动相或比流动相弱溶剂溶解样品进样量尽可能小关于进样器HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第12页关于进样器准备位置调用样品瓶吸样品进样和运行位置标准进样过程...HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第13页自动进样器样品要洁净、经过过滤。洗针：把样品残留降低到最小程度，可降低进样记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。屡次吸液

用于进样量大于100ul

HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第14页关于恒温柱箱控制范围：最高80ºC，低温低于室温10ºC。预热块体积左面为3ul，右面为6ul，除非有特殊要求，左右温度应保持一致。一定要关闭前面板。HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第15页关于原理HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第16页关于色谱柱保护过滤全部溶剂和样品使用保护柱仪器在使用完成，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液。

柱子在不使用时，两端密封保留在适当溶剂中保留柱子注意色谱柱pH值使用范围不要高压冲洗柱子不要高温下过长时间使用硅胶键合相HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第17页检测器—DADDAD(DiodeArrayDetector)二极管阵列检测器，是以光电二极管阵列作为检测元件UV-VIS检测器.DAD光源—氘灯有一定半衰期，普通为1000小时左右，所以在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯使用寿命,不过也不要频繁开关,这么也会影响寿命。同时，打开灯需要预热10min左右，灯使用时间越长，预热时间也要越长。流动池污染后，会造成灵敏度下降、噪声加大，应防止脏样品进入流动池。定时使用异丙醇冲洗系统对保持流动池性能有一定好处。HPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第18页检测器—DADHPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第19页检测器—FLDHPLC各模块工作原理及维护FLD(FluorescenceDetector)荧光检测器：是利用一些溶质在受到紫外光激发后，能发射可见光（荧光）性质来检测。FLD是一款含有高度灵敏度和高度选择性检测器。其激发光源是氙灯，此灯不需要预热。其流通池和DAD一样，也要定时用异丙醇冲洗，以确保性能。安捷伦HPLC工作原理及简单操作第20页检测器—RIDHPLC各模块工作原理及维护安捷伦HPLC工作原理及简单操作第21页二、开机/关机操作SealwashComputerPowerChemstationPurgeSCPCP安捷伦HPLC工作原理及简单操作第22页开机操作：1，打开计算机。2，打开LC各模块电源，等候仪器自检完成，1-2min。3，双击桌面上“Instrument1Online”图标，进入化学工作站,在工作站打开各工作模块。4，打开SealWash清洗液开关，清洗10min。5，打开清洗阀，排除系统中气泡，平衡差不多30min.6,拧上清洗阀，将流量设为所需流速，平衡30min即能够打样。关机操作：1，假如使用了缓冲溶液流动对应先用水冲洗系统30min。2，用纯有机相冲洗系统30min。3，在工作站上关闭各个模块。4，退出工作站，关闭计算机。5，关闭LC各个模块电源。二、开机/关机操作安捷伦HPLC工作原理及简单操作第23页指示灯状态每个部件接通电源后LED灯显示绿色关机poweroff准备进样poweron没准备好NotReady运行Run故障Error驻留ResidentBlink仪器LED状态显示电源开关显示黑Black黑Black黄Yellow绿Green红Red黄闪烁Yellowblinking6种LED仪器状态：开机/关机操作安捷伦HPLC工作原理及简单操作第24页逆时针旋转打开清洗阀，清洗阀打开时，液体从废液管中流出，为清洗状态。更换溶剂后，打开清洗阀，设置流量5ml/min，冲洗5-10min.顺时针旋紧清洗阀为关闭状态,此时流动相由毛细管流向进样器.逆时针打开清洗阀顺时针关闭清洗阀毛细管出口,流向进样器废液管,清洗阀打开时溶剂由此流向废液瓶.开机/关机操作清洗阀PurgeValve安捷伦HPLC工作原理及简单操作第25页每次用过仪器后必须做!整台液相色谱仪维护1.在使用过含盐缓冲液后必须清水冲洗泵15分钟，此时必须打开排放阀，不能使废液进入色谱柱。2.关上排放阀，用90%+10%水、甲醇溶液冲洗整个系统，时间为15～20分钟，流量1ml/min。本步骤主要是冲洗洁净系统内其