水产动物疾病诊断技术

hhhh现代生物技术在水产动物疾病诊断上的应用生命科学与技术学院 水产养殖06-4班 安海燕 060110140120杂交技术、聚合酶链反应(PCR)技术等。由于上述检测技术的灵敏度高、特异性近年来,根据目前国内外研究的动向,随着分子生物学技术在水产领域的生物技术的发展已为病原体的检测提供了快速、高效、灵敏的技术手段。多领域，尤其在生物医学的理论研究和临床诊断方面更是发挥了不可替代的作进行了研究与应用。单克隆抗体以广泛应用。80年代后期，已成功研制出传染性胰腺坏死病毒、出血病毒等单鱼出血病毒和对虾白斑病毒，均获得了较为酶联免疫吸附酶联免疫吸附检测(ELISA)是将抗原或抗体吸附在载体表面，通过酶与底物术用于疾病检测上，如李焕荣等(1997)Dot－ELISA?(1995)应用单克隆抗体酶联免疫技术检测到了对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒；陈怀青等(1993)应用Dot－ELISAhecELISAPI核酸探针核酸探针是指利用特定标记的DNARNAHiney(1992)将此技术应用诊断细菌性鱼病，Comps等(1996)采用地高辛标记的RNAFEVBruce(1994)DNADNA聚合酶链反应酶链反应(PCR)技术是指在引物的指导下，体外酶促反应，迅速扩增DN**段的一种方法。该法反应十分迅速，几小时内便可扩增到108－10倍，因而PCRPCRPCR病毒以及周围水体内的病菌等。PCR与其他技术的联用PCR优点。例如Sukhum-sirichart等(2002)通过在反应体系中加入地高辛标记的dUTP,PCR(PolymeraseChainReaction-Enzyme-Linked-Immuno-sorbentAssay,PCR-ELISA)(HepatopancreaticPar-vovirus,HPV),通过比较实验,说southern(Southernhybridization)10PCRPCRSchwabThermusthermophilusrTth,与RT-PCR结合建立了DEIA(DNAenzymeimmunoassay)法检测出了诺沃克样病毒(Nor-walk-likeviruses,NLVs),由于该SouthernCerroTaqManPCRF.psychrophilum.Heath等等利用竞争PCRPiscirick-ettsiasalmonis(InternalTran-scribedSpacer,ITS)DGGE(变性梯度凝胶电泳)检测到了结果。16SrRNA16S rRNARNA（Conserveddomain）Variable domain。保守区能反映生物物种的亲缘关系，可变区能揭示生物物种的特征核酸序列，被认为是最适细菌系统发育和分类鉴定的指标。目前16SrRNA序列分析已广泛用于水产动物病原菌的鉴定Ragnhild过对分离于大西洋鲑鱼虹鳟鱼大菱鲆和鳕鱼中的致病弧菌的16SrRNA序进行比对，对鱼类致病弧菌进行分类Carlos等通过对26株不同来的鱼病菌的16S rRNA基因序列的分析确定了鱼出血性败血病血症病原美人发光杆菌的分类地位，并建立了基于16S rRNA基因的巢式PCR病原检测方法Cerda等利用一种特异的16SrRNA基因探针对V.vulnificus病毒进行检测。邹玉霞等（2004）通过对大菱鲆出血症病原菌的16S rRNA基因进行系统发育学分析确定了该病原菌为鳗弧菌耿毅从发生急性流行性传染病的斑点叉尾鱼回肝脏肾脏分离到一高致病性的菌株经16S rRNA序列分析鉴定其为嗜麦芽寡养单胞菌。细胞培养Lu(1995)应用对虾淋巴器官原代培养细胞检测对虾黄头杆状病毒(YBV制剂等。限制性酶酶切检测DNADNA，(RFLP)DNAKatjaEiner-Jen