CD11b在脾脏和淋巴结的分布差异及其生物学特性,病理学论文

CD11b在脾脏和淋巴结的分布差异及其生物学特性,病理学论文脾脏和淋逢迎是成熟T细胞定居的场所，定居于此处的T细胞接受树突状细胞(dendriticcell，DC)、巨噬细胞提呈的抗原后活化、增殖，分化为效应性T细胞。脾脏在胚胎期具有造血功能，成年后成为最大的免疫器官，可去除血液中的病原体、衰老细胞及异物等。淋逢迎是免疫应答发生的主要场所之一，淋逢迎中T细胞的比例远高于脾脏。细胞在免疫器官的不同分布、功能与细胞外表的黏附分子密切相关。CD11b是一种相对分子质量(Mr)为165000～170000的整合素蛋白，常作为单核巨噬细胞的分化标志。CD11b与CD18以非共价键结合构成补体iC3b受体(complementreceptorofiC3b，CR3)。CR3主要表示出在巨噬细胞、NK细胞、粒细胞、活化的淋巴细胞、B-1细胞和小胶质细胞外表。CR3可与细胞间黏附分子1(intercellularadhesionmolecule1，ICAM-1)结合，介导细胞间黏附，炎性细胞的趋化。为阐释CD11b在脾脏和淋逢迎的分布差异及其生物学特性，本研究对CD11b在C57BL/6小鼠脾脏和淋逢迎细胞的表示出及其功能进行初步讨论。1材料和方式方法1．1材料C57BL/6小鼠，6～8周龄，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，小鼠饲养在河南省实验动物中心SPF级环境。流式细胞术所用的荧光团标记的大鼠抗小鼠抗体(CD3-eFl660、CD4-FITC、CD8-PE、CD8-Percp-Cy5．5、CD11b-PE、CD11b-eFl660、CD44-PE、CD62L-Percp-Cy5．5)及大鼠IgG2b同型对照-PE购自eBioscience公司。1．2方式方法1．2．1Freund完全佐剂皮下免疫小鼠分为2组，免疫组和对照组，每组小鼠5只以上。Freund完全佐剂(completeFreundsadjuvant，CFA)含灭活结核分枝杆菌H37Ra5mg/mL，与磷酸盐缓冲液以1∶1体积混合后彻底乳化，于C57BL/6小鼠背部两侧皮下注射乳化剂，总免疫剂量200L/只。1．2．2流式细胞术分析取小鼠脾脏和淋逢迎，制备单个核细胞悬液，计数1106细胞，按讲明要求分别参加荧光团标记的抗体，4℃避光孵育30min;PBS洗涤2次，流式细胞仪检测，分析CD11b在脾脏和淋逢迎CD3+和CD3－细胞的表示出;分别以CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞设门，分析CD11b在不同T细胞亚群的表示出;先以CD4+细胞设门，进一步以CD11b+和CD11b－细胞设门，分析CD44+CD62L+双阳性细胞在CD11b+和CD11b－细胞中的表示出比例;CFA免疫后，以CD3+CD4+细胞设门，分析CD11b在CD4+T细胞亚群的表示出变化。流式数据用Cellquest软件分析。1．2．3统计学分析所有数值以xs表示，两组间差异显着性用t检验进行分析，P＜0．05表示差异有统计学意义。2结果2．1CD11b在脾脏和淋逢迎细胞中的差异表示出CD11b在脾脏细胞的总体表示出(19．92．5)%略高于淋逢迎(16．04．2)%，但CD11b在脾脏和淋逢迎细胞的分布差异显着。在淋逢迎，CD11b主要表示出在CD3+细胞(12．521．32)%，CD3－CD11b+细胞仅占(2．950．83)%。在脾脏，CD11b主要表示出于CD3－细胞(14．930．94)%，CD3+CD11b+细胞仅占(4．160．77)%(图1)。【1】2．2CD11b在不同T细胞亚群的表示出CD11b在脾脏和淋逢迎T细胞中的表示出分别为(10．491．71)%和(11．961．32)%，差异无统计学意义(P=0．337)。但在脾脏和淋逢迎T细胞中CD11b均主要表示出在CD4+T细胞，而在CD8+T细胞上的表示出较少。脾脏和淋逢迎CD4+T细胞CD11b的表示出分别为(18．701．82)%和(20．061．12)%(P=0．185)，CD8+T细胞CD11b的表示出分别为(2．290．24)%和(2．200．20)%(P=0．693)。【2】2．3T细胞表示出CD11b与其活化的关系CD44和CD62L常用于评价CD4+T细胞的活化状态。CD4+CD11b+T细胞中CD44+CD62L+细胞占52．4%，CD4+CD11b－T细胞中CD44+CD62L+细胞占10．6%。提示，高表示出CD11b的CD4+T细胞处于活化状态(图3)。【3】2．4CFA免疫诱导T细胞高表示出CD11bCFA可刺激机体局部免疫反响，CFA背部皮下免疫初始C57BL/6小鼠，第3天获取集合淋逢迎和脾脏细胞。发现CFA免疫后淋逢迎CD4+T细胞高表示出CD11b，由初始状态(淋逢迎)的(20．061．12)%升高至(58．223．41)%(P＜0．01)。脾脏CD4+T细胞CD11b表达轻微升高，由初始状态(脾脏)的(18．701．82)%升高至(25．423．17)%，但两者差异无统计学意义(P=0．103，图4)。【4】3讨论CD11b是补体iC3b受体(CR3)的链。通常以为，CD11b仅表示出于巨噬细胞外表，在炎症反响中介导单核巨噬细胞对靶细胞的调理作用。当前，关于CD11b的研究多集中于中性粒细胞、单核巨噬细胞、髓系来源的抑制细胞和自然杀伤细胞。CD11b在T细胞上的表示出研究较少，在小鼠CD4+T细胞上的表示出尚未见报道。Wagner等报道，人外周血T细胞可少量表示出CD11b，CD11b主要表示出于CD8+T细胞，CD4+T细胞活化后也可表达。Ichikawa等以CD11c+细胞设门，发现小鼠脾脏细胞中存在一群CD4+CD11b+细胞，并将其命名为CD4+DC。Koo等在骨性关节炎和风湿性关节炎患者的关节滑膜液中发现大量CD4+CD11b+细胞，并以为该群细胞为单核细胞。CD11b在脾脏和淋逢迎细胞的分布、在T细胞亚群的差异表示出当前仍不清楚。本研究发现，CD11b在脾脏主要表示出于单核巨噬细胞，但在淋逢迎主要表示出于T细胞。脾脏大量存在的单核巨噬细胞与其去除衰老、凋亡细胞及异物有关。CD11b可表示出于脾脏和淋逢迎T细胞，且主要表示出于CD4+T细胞，CD8+T细胞几乎不表示出。CD11b在小鼠T细胞亚群的表示出与在人T细胞亚群的表示出正好相反。如上所述，CD4+CD11b+细胞曾被作为CD4+DC、单核细胞进行研究。本研究以CD3+细胞设门，分析CD11b在CD4+和CD8+细胞中的表示出，因而能够以为该群细胞为T细胞。CD11b在小鼠CD4+T细胞上的表示出尚未见报道。CD11b是介入炎症反响的重要黏附分子，CD11b/CD18与其配体ICAM-1的互相作用对于中性粒细胞与血管内皮细胞的黏附，及其随后穿越血管内皮细胞发挥重要作用。相对于CD4+CD11b－细胞，CD4+CD11b+细胞高表示出CD44和CD62L。CD44和CD62L是T细胞活化的标志分子。提示，CD4+CD11b+细胞为一群活化的T细胞。CD11b可能作为黏附分子介入T细胞活化后的细胞迁移。CFA免疫后，集合淋逢迎CD4+T细胞CD11b表示出升高，脾脏CD4+T细胞CD11b表示出稍微升高。本实验进一步印证CD4+T细胞CD11b的表示出与细胞活化有关。Wagner等报道，CD11b仅在静止的人外周血T细胞外表少量表示出，细胞活化后高表示出CD11b。我们的研究结果与文献报道一致。综上所述，CD11b不仅表示出