红细胞血型检测专家讲座

第二章红细胞血型检测江西医学高等专科学校11级检验班01

李金辉1红细胞血型检测红细胞血型检测第1页目录第一节输血前免疫学检验第二节盐水介质试验技术第三节酶处理试验技术第四节抗球蛋白试验技术第五节聚凝胺介质试验技术第六节微柱凝集试验技术第七节吸收放散技术第八节凝集试验技术第九节红细胞血型分子生物学检测技术2红细胞血型检测红细胞血型检测第2页学习要求：1.输血前主要包含哪些内容？2.受血标本接收时注意事项有哪些？3.ABO血型和RhD血型判定时注意事项有哪些？4.交叉配血试验影响原因有哪些？5.抗球蛋白试验临床应用有哪些方面？6.红细胞血型分子生物学检测技术主要有哪些？3红细胞血型检测红细胞血型检测第3页第一节输血前免疫学检验目标：是输入血液成份在受血者体内发挥其有效作用.

在正常情况下，输入红细胞在受血者体内不溶血，输入血浆成份不破坏受血者红细胞。主要程序：患者病史和标本等检验、查对及处理;ABO血型和RhD血型定型；红细胞同种抗体筛查和坚定；交叉配血试验；血小板输注前抗体检验和配合试验；不规则抗体筛选和判定；交叉配血结果汇报和发血等。4红细胞血型检测红细胞血型检测第4页一、受血者标本处理（一）标本采集输血除了需要到达预期治疗效果外，必须确保输血安全。血样由临床护士完成，因严格恪守一次只能为一位受血抽取标本，标本不得从输液管或输液侧筋脉中抽取。（二）标本接收

输血科技师接收血样标本时，应认真查对受血者相关信息，尽可能了解受血者有没有输血史、药品史、妊娠史等情况。假如有输血史，这有必要深入了解最终一次输血日期，若3个月内输过血，那么供血者红细胞没有完全代谢消失，可能依然存在于血液循环中，造成血型定型试验中出现混合凝集结果。5红细胞血型检测红细胞血型检测第5页（三）标本要求1.对输血前检验血液标本应严格要求能代表受血者当前免疫学情况，标本还需经判定和标识，确保其准确无误地来自受血者和供血者，应和血液申请单上内容一致。2.预防受血者血液标本稀释和（或）溶血，若采集过程中发生溶血则不能使用。3.受血者配血试验正确血液标本必须是输血前3天采集。4.若受血者使用右旋糖酐、PVP等治疗，应注意洗涤被检红细胞。5.每次输血后，受血者和供血者标本必须保留于2~8℃最少7天。6红细胞血型检测红细胞血型检测第6页二、受血者和供血者ABO和Rh定型

（一）、原理

依据红细胞膜表面上有没有A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型、O型4种。A型人血清中含有抗-B抗体，B型人血清中含有抗-A抗体，O型人血清中含有抗-A抗体和抗-B抗体，AB型人血清中不含ABO抗体。正定型：用抗-A及抗-B试剂与被检红细胞反应，检测红细胞表面是否存在A抗原或B抗原。反定型：用标准A细胞及B细胞与被检血清反应，检测血清中是否存在抗体。因为ABO血型系统抗体多数为IgM类，在室温盐水介质中就能出现显著凝集反应。7红细胞血型检测红细胞血型检测第7页二、受血者和供血者ABO和Rh定型8红细胞血型检测红细胞血型检测第8页二、受血者和供血者ABO和Rh定型

1.ABO定型最适反应温度为4℃，但在室温反应良好，所以常规ABO定型试验仅在室温进行。(1)定型方法：正、反定型试管离心方法当前仍被认为是最可信赖ABO定型方法。1)定型试剂：有些ABO血型诊疗试剂是以人血清汇聚而制成，但必须具备以下条件：第一，高效价(1：128)IgM抗A或抗B。第二，具很好亲和性并不含冷凝集素。第三，必需含有检测A2，A2B血型能力。第四，血清必须经过HIV，HCV，HBV等检验或经病毒灭活。另外一些ABO定型试剂是由来自培养细胞株单克隆抗体所制成。9红细胞血型检测红细胞血型检测第9页二、受血者和供血者ABO和Rh定型2)ABO亚型判定：ABO亚型判定通常使用以下试剂：抗A、抗B、抗A1、抗H、抗AIA1红细胞、A2红细胞、B型红细胞和O型红细胞。有些工作者在定型试验中，常规地选择应用抗AB抗血清，以防止错误地把弱反应性A或B型红细胞分类为O型。普通抗AB试剂对Ax型红细胞可增加凝集反应强度。10红细胞血型检测红细胞血型检测第10页二、受血者和供血者ABO和Rh定型(一)ABO定型试验中常见问题：造成这种正反定型不一致原因主要有：1)技术和管理错误：这是ABO定型中产生异常结果主要原因，包含：标本或试剂搞错；器材不洁；试剂污染或失效；离心过分或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂；结果统计或判断错误；细胞与血清间百分比不适当。2)血清异常：血清蛋白引发缗钱状形成，影响反定型结果。3)红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏红细胞，在含高蛋白介质试剂中，可发生凝集。4)异常基因型：ABO亚型检验中，A、B抗原可能为弱抗原，难以检出。11红细胞血型检测红细胞血型检测第11页二、受血者和供血者ABO和Rh定型5)近期输血：试验前曾输入过其它ABO血型不一致血液，使血液标本成为混合血型红细胞悬液，定型时显示“混合外观凝集”现象。6)嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定型时能够出现“混合外观凝集”现象。7)疾病原因造成抗原减弱：一些白血病患者和难治性贫血患者中，ABO血型系统抗原性可受到抑制，检出困难。8)红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或取得性表面异常，发生多凝集现象。9)取得性B：因为革兰阴性杆菌作用，红细胞可取得“类B”活性。12红细胞血型检测红细胞血型检测第12页二、受血者和供血者ABO和Rh定型10)血型特异性物质过高：一些卵巢囊肿病例，血型物质浓度很高，可中和抗A和抗B定型试剂，要得到正确正定型结果，必须洗涤红细胞屡次。11)近期内进行大量血浆置换治疗：因为使用大量非同型血浆作置换治疗，标本血清中含有所输供体提供抗A或抗B抗体，造成反定型错误。12)异常血浆蛋白：受检者血浆中异常白蛋白、球蛋白百分比和高浓度纤维蛋白原等造成缗钱状形成，造成假凝集现象。13)不规则抗体存在：受检者血浆中，含有ABO血型抗体以外不规则抗体，与试剂红细胞上其它血型抗原系统抗原起反应。13红细胞血型检测红细胞血型检测第13页二、受血者和供血者ABO和Rh定型14)低丙种球蛋白血症：低丙种球蛋白血症(丙种球蛋白量减低)病例，可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集反应。15)药品等原因：药品、右旋糖醉及静脉注射一些造影剂可引发红细胞凝集或类似凝集。16)年纪原因：免疫系统还未健全婴儿、由母亲被动取得抗体婴儿，或抗体水平下降老人，试验时可出现异常结果。17)防腐剂原因：患者体内可能含有对防腐剂中成份或对混悬介质抗体，造成ABO定型差错。14红细胞血型检测红细胞血型检测第14页二、受血者和供血者ABO和Rh定型（二）Rh(D)定型和定型试验中应注意问题：Rh定型主要判定D抗原（IgG抗D和IgM抗D）。Rh系统是最为复杂得多一个系统，包括临床主要有D、C、c、E、e五个抗原，其中D抗原免疫原性最强，仅次于A或B抗原。Rh血型判定方法有：玻片法、试管法、微量板法、微柱凝胶法等，试管法最为经典。当前大部分医院都使用微柱凝胶卡式血型判定，方法简便快捷，准确度较高。15红细胞血型检测红细胞血型检测第15页二、受血者和供血者ABO和Rh定型16红细胞血型检测红细胞血型检测第16页二、受血者和供血者ABO和Rh定型(1)造成Rh血型判定可能出现假阳性原因：1)受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引发红细胞凝集因子。2)受检细胞与抗血清孵育时间过长，含高蛋白定型试剂会引发缗钱状形成。3)标本抗凝不妥，受检过程中出现凝血或小纤维蛋白凝块，误判为阳性。4)定型血清中含有事先未被检测其它特异性抗体，造成假阳性定型结果。5)多凝集细胞造成定型假阳性。6)判定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。17红细胞血型检测红细胞血型检测第17页二、受血者和供血者ABO和Rh定型(2)可能出现假阴性原因1)受检细胞悬液浓度太高，与抗血清百分比失调。2)漏加或错加定型血清。3)定型血清使用方法错误，没有按说明书进行。4)离心后重悬细胞扣时，摇动用力过分，摇散微弱凝集。5)抗血清保留不妥，造成失效。18红细胞血型检测红细胞血型检测第18页二、受血者和供血者ABO和Rh定型(三)弱D型(Du型)血型及其判定：Du型抗原是RhO(D)弱抗原，这种抗原通常与大部分盐水抗D试剂不产生直接凝集反应，而与部分IgG抗D血型用间接抗球蛋白试验反应阳性。所以当我们首次得到Rh阴性结果时，必须进行作Rh阴性确认试验，即用三种不一样批号IgG抗D定型，假如全部阴性方可认为该被检者为Rh阴性，不然，只要有一批为阳性，则可认为是Du型。若D人群作为献血者按照RhD阳性对待，其血液只能给Rh阳性受血者输注；作为受血者按照RhD阴性对待，只能接收RhD阴性血液。19红细胞血型检测红细胞血型检测第19页三、不规则抗体筛选和判定一、

概念：不规则抗体是指血清中抗-A、抗-B以外其它血型抗体，也称意外抗体。不规则抗体包含同种抗体和本身抗体。本身抗体：受血者体内产生抗体，针对自己本身红细胞抗原。同种抗体：不只针对本身抗原，也会同种异型抗原发生反应。

20红细胞血型检测红细胞血型检测第20页三、不规则抗体筛选和判定二、不规则抗体筛查方法抗体筛选试验标准是让受检血清与已知血型试剂红细胞即筛选红细胞起反应，以发觉在37℃中有反应抗体1.盐水介质法：主要用于IgM类抗体筛查。优点是：方法简单、操作简单、成本低廉。缺点是：灵敏度低2.聚凝胺法优点：与水盐介质法比灵敏度有所提升。3.抗球蛋白试验：缺点：操作繁琐、工作量大、耗时等。4.酶法：能暴露隐蔽抗原，增强一些稀有抗原检测。但可能会破坏有些抗原，影响检测。当前临床是已不用。21红细胞血型检测红细胞血型检测第21页三、不规则抗体筛选和判定5.微柱凝胶卡式检测法三、不规则抗体判定抗体筛选试验用试剂筛选红细胞，通常是2或3个人份O型红细胞成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中最少有以下常见抗原：D、C、E、c、e、M、N，条件不足试验室不一定具备Lua、V、Cw、Kpa、Jsa类抗原。一旦抗体被检出，应作抗体判定试验，以确定其特异性。抗体判定试验包含以下主要内容：(1)本身细胞检验：观察患者(受者)血清与患者(受者)本身细胞反应情况，确定血清内是否有本身抗体或本身抗体和同种抗体二者同时存在。 (2)普红细胞：使用试剂细胞中谱细胞，应用各种抗体检验技术，检测患者血清，确定其抗体特异性。22红细胞血型检测红细胞血型检测第22页三、不规则抗体筛选和判定抗体判定试验结果解释及处理：1.与谱细胞反应显著，确定为单一抗体或无法确定为单一抗体，应加以判别。2.与谱细胞呈弱反应，结果不明确（1）分析结果：①是否符合剂量效应②谱细胞是否新鲜（2）改变试验方法：①使用高灵敏度方法重复试验②添加试剂后重复试验③带抗体增强后重复试验

23红细胞血型检测红细胞血型检测第23页三、不规则抗体筛选和判定3.与全部谱细胞反应，本身细胞阴性（1）强度不一致：可能存在混合抗体（2）强度一致：抗体可能为专于O细胞反应抗体（如：抗-I、抗-H、抗-HI）可能针对高频抗原抗体可能针对谱细胞抗体4.与全部谱细胞反应，本身细胞阳性（1）存在本身抗体（2）同种和本身抗体同时存在（3）冷凝集：在冷凝集素作用下存在凝集红细胞24红细胞血型检测红细胞血型检测第24页三、不规则抗体筛选和判定（4）假凝剂：在干扰因子作用下一可造成红细胞假凝集（5）酶引发多凝集（6）补体影响6.与谱细胞不反应，本身细胞阳性可能是本身抗体或C₃阳性25红细胞血型检测红细胞血型检测第25页三、不规则抗体筛选和判定四、抗体筛查和判定影响原因1.抗体筛查和判定细胞质量

筛查细胞不包含低频率抗原，不能检出低频率抗原。谱细胞：用于抗体判定试剂红细胞。在选择不规则抗体筛查或判定细胞时，应符合当地区不规则抗体分布特点。2.试验方法法IgM抗体在4℃，凝集强度显著大于室温，37℃会有减弱3.抗体特异性抗体筛查试验为阴性，并不意味着被检血清中一定没有抗体筛查细胞漏检ABO亚型抗体（如抗-A₁）26红细胞血型检测红细胞血型检测第26页三、不规则抗体筛选和判定五不规则抗体判定时遇见问题1.不规则抗体筛查阴性，输血后发觉溶血（1）交叉配血假阴性（2）抗球蛋白试验不规则抗体筛查假阴性试剂保留不妥洗涤不充分试验操作④红细胞浓度过高造成凝集减弱或红细胞浓度过低造成凝集不易被观察到2.不规则抗体筛查阳性，抗体特异性难以判定（1）抗体筛查假阳性：①离心不妥②试管污染③硅胶管引发凝集（2）谱细胞单一：应采取3个以上不一样供给商谱细胞系，排查抗体特异性。

27红细胞血型检测红细胞血型检测第27页四、交叉配血试验（一）要求和内容交叉配血要求：主侧配血要求：绝对不能够有凝集或溶血现象。次测配血要求：供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，能够有凝集现象，但不能够有溶血。凝集不凝集28红细胞血型检测红细胞血型检测第28页四、交叉配血试验交叉配血试验内容患者献血者主侧次侧主侧配血用患者血清与供者红细胞进行试验次测配血供血者血清与患者红细胞进行试验29红细胞血型检测红细胞血型检测第29页四、交叉配血试验交叉配血目标交叉配血试验是输血前必要步骤，主要是检验受血者血清中有没有能破坏供血者红细胞抗体。主要目标是为了预防输血后产生溶血性反应。尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者血不会引发有害反应，而且使红细胞在输注后能保持最长存活时间。30红细胞血型检测红细胞血型检测第30页四、交叉配血试验（二）结果解释及处理1.抗体筛查阴性，交叉配血相容：绝大部分标本抗体筛查阴性，交叉配血也是相容。2.抗体筛查阴性，主侧交叉配合试验阳性（1）复查血型（2）主侧凝集类B抗原（3）血清中可能含有一个ABO抗体，必要时能够做ABO亚型判定31红细胞血型检测红细胞血型检测第31页四、交叉配血试验3.抗体筛查试验阳性，主侧交叉配合试验阳性（1）本身对照试验阴性：受血者体内有同种不规则抗体。（2）本身对照试验阳性：受血者血清内可能有本身抗体或同时存在不规则抗体。（三）影响原因

①离子干扰②温度③操作不规范④离心不妥32红细胞血型检测红细胞血型检测第32页第二节盐水介质试验技术盐水介质试验技术惯用于血型判定、血清中IgM类抗体筛查和判定、盐水介质交叉配血等。

基本方法1.平板法用于ABO血型和RhD抗原定型特点：简单、快速，但易污染环境。2.试管法为定型试验方法，也可于半定量试验。是输血前检验最惯用试验方法。特点：简单、快速、易学，结果准确、可靠。3.微孔板法为定性试验方法。33红细胞血型检测红细胞血型检测第33页第二节盐水介质试验技术盐水介质配血方法患者献血者主侧次侧离心看结果阳性阴性34红细胞血型检测红细胞血型检测第34页第二节盐水介质试验技术35红细胞血型检测红细胞血型检测第35页第三节酶处理试验技术原理：在酶作用下切断带有负电荷羧基基团唾液酸，降低Zeta电位，缩短红细胞之间距离。增强IgG抗体对红细胞凝集。惯用正确酶：菠萝酶，无花果酶，木瓜酶36红细胞血型检测红细胞血型检测第36页第三节酶处理试验技术酶介质配血方法患者献血者主侧次侧主次侧均加酶酶上海市血液中心血37红细胞血型检测红细胞血型检测第37页第三节酶处理试验技术37℃水浴30分钟37℃离心看结果阳性阴性38红细胞血型检测红细胞血型检测第38页第三节酶处理试验技术结果判断（1）阳性对照管凝集，阴性对照管凝集，被检管凝集为阳性，不出现凝集判定为阴性。（2）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，试验失败分析原因，重新试验。39红细胞血型检测红细胞血型检测第39页第四节抗球蛋白试验技术一、基本原理抗球蛋白试验（Coombs试验）主要用于检测血清中不完全抗体如：IgG、IgA和（或）补体如：C3、C4。在盐水介质中，不完全抗体只能致敏红细胞，而不能使红细胞出现可见凝集反应，加入抗球蛋白试剂后，抗球蛋白分子Fab片段与红细胞表面受体结合，而产生红细胞凝集，所以采取此方法能够检测出血清中是否存在不完全抗体。40红细胞血型检测红细胞血型检测第40页第四节抗球蛋白试验技术抗球蛋白试验原理图41红细胞血型检测红细胞血型检测第41页第四节抗球蛋白试验技术

二、分类及应用

抗球蛋白试验直接间接致敏红细胞不完全抗体、补体血清中不完全抗体应用HDN诊疗、AIHADE诊疗、药品诱发型溶血病诊疗交叉配血及血型判定、器官移植、等42红细胞血型检测红细胞血型检测第42页第四节抗球蛋白试验技术抗球蛋白配血方法患者献血者主侧次侧37℃37℃水浴30分钟三洗

43红细胞血型检测红细胞血型检测第43页第四节抗球蛋白试验技术抗球蛋白方法配血方法加抗球蛋白抗球蛋白试剂上海市血液中心血离心看结果阳性阴性44红细胞血型检测红细胞血型检测第44页第四节抗球蛋白试验技术

三、结果判断直接抗球蛋白试验：（1）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管凝集，判定为阳性。（2）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管不凝集，须做阴性确认后判定结果。（3）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，结果不可信不能发出汇报，分析原因后重做试验。45红细胞血型检测红细胞血型检测第45页第四节抗球蛋白试验技术间接抗球蛋白试验：（1）阳性对照管展现凝集反应，阴性对照管不展现凝集反应，被检管展现凝集反应为阳性结果，表示被检者血清中含有抗体。（2）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管出现凝集，试验失败，分析原因重做试验。46红细胞血型检测红细胞血型检测第46页第四节抗球蛋白试验技术

四、注意事项（一）直接抗球蛋白试验1.抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，防止出现前带现象而误判为阴性。2.结果判读时应转动拖拉，细胞扣摇散后，如肉眼未见凝集，应将反应物涂于玻片上，在在显微镜下观察确认阴性。3.被检标本需用EDTA抗凝，防止出现假阳性；标本不宜久置，预防红细胞上已致敏抗体游离到血浆中，造成假阴性或阳性程度降低。4.红细胞表面存在蛋白质就会与抗球蛋白结合。所以受检红细胞一定要充分洗涤，除去血清蛋白，防止假阴性产生。5.如需深入分析体内致敏红细胞免疫球蛋白类型，能够分别以抗IgG、抗C3单价抗球蛋白血清进行试验。47红细胞血型检测红细胞血型检测第47页第四节抗球蛋白试验技术（二）间接抗球蛋白试验1.红细胞洗涤过程中不宜中途停顿，每次加生理盐水前要是红细胞完全悬浮；洗涤过程中预防交叉污染；应充分洗涤，防止残留抗体部分中和抗球蛋白试剂而产生假阴性。2.振摇试管不宜用力过大，防止将涣散红细胞凝块摇散，使强阳性结果误判为弱阳性结果，弱阳性结果误判为阴性，对于弱阳性结果观察细胞扣是否出现缺口来判读。3.离心后应马上看结果，不宜久置。4.致敏时间：30-60分钟，不超出90分钟

48红细胞血型检测红细胞血型检测第48页第四节抗球蛋白试验技术

三、抗球蛋白试验影响原因一、亲和力亲和力常数越高，抗原抗体反应致敏阶段抗体水平越高二、孵育时间和温度37℃孵育30-60分钟三、离子强度在单纯离子强度溶液中，可增强抗体结合作用，孵育时间将缩短到15～30分钟四、抗原、抗体百分比2滴血清对1滴2％～5％红细胞悬液五、洗涤应尽可能去除上清液，降低未结合免球蛋白。六、体外补体致敏七、红细胞本身凝集49红细胞血型检测红细胞血型检测第49页第五节聚凝胺介质试验技术聚凝胺试验技术是一个快速、简便检测红细胞不完全抗体方法，可用来检测IgG抗体，但IgG抗体抗-K抗体除外。一、试验原理

凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液离子强度，降低红细胞周围阳离子云，促进血清（浆）中抗体与红细胞对应抗原结合，再加入带亚电荷高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面负电荷，缩短细胞间距，形成可逆非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚胺引发非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导特异性凝集则不会分散50红细胞血型检测红细胞血型检测第50页第五节聚凝胺介质试验技术聚凝胺(Polybrene)配血方法患者献血者主侧次侧室温放置1分钟主次侧均加聚凝胺Polybrene上海市血液中心血51红细胞血型检测红细胞血型检测第51页第五节聚凝胺介质试验技术聚凝胺(Polybrene)配血方法离心聚凝胺引发红细胞非特异性凝集重悬液上海市血液中心血主次侧均加重悬液看结果阳性阴性52红细胞血型检测红细胞血型检测第52页第五节聚凝胺介质试验技术二、应用范围血型判定、抗体筛查及交叉配血试验三、特点灵敏、速度快、准确、操作要求高。四、注意事项1.不能用含有枸橼酸钠和肝素抗凝标本2.用聚凝胺试验技术交叉配血，出现不配合时，要用抗球蛋白试验重做，结果不一致时，以抗球蛋白试验为主。3.聚凝胺只能是正常红细胞发生凝集，对缺乏唾液酸细胞（如：T细胞及B细胞）无作用。53红细胞血型检测红细胞血型检测第53页第六节微柱凝集试验技术一、试验原理

凝胶含有分子筛效应和亲和效应，在微柱凝胶介质中红细胞抗原与对应抗体结合，利用凝胶空间位阻经低速离心，凝集红细胞悬浮在凝胶上层，而未和抗体结合红细胞则沉于凝胶底部（管底尖部）。54红细胞血型检测红细胞血型检测第54页第六节微柱凝集试验技术一、微柱凝胶试验原理

将红细胞和抗血清加在凝胶上部反应，离心后观察凝集红细胞，被阻挡在小柱中凝胶上部或中央，证实发生凝集反应，判断凝集反应阳性,游离红细胞，被挤过装有过滤介质小柱，而抵达小柱底部，证实未发生凝集判断阴性.

操作及结果判定55红细胞血型检测红细胞血型检测第55页第六节微柱凝集试验技术二、应用1.抗球蛋白试验直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验。2.ABO血型判定可做单纯粹定型，也可同时做正反定型。3.其它血型系统检测如Rh其它抗原（CcEe）定型三、特征及优点1.简便2.准确结果清楚明确，可重复性强。3.敏感4.结果保留时间长5.标本用量少6.标准化7.安全56红细胞血型检测红细胞血型检测第56页第六节微柱凝集试验技术四、微柱凝集试验中可能存在问题1.抗凝剂不足或不含抗凝剂血浆标本常出现假阳性。2.试验室温度较低时，易出现假阳性结果。3.抗原、抗体过少、过弱；抗原、抗体百分比不妥时易出现假阴性。4.离心力过大时，轻易使弱阳性成为阴性格局。5.溶血反应：①反应液是低渗溶液②温度过冷或过热③红细胞或抗体被污染

④其它可使红细胞破坏理化原因57红细胞血型检测红细胞血型检测第57页第六节微柱凝集试验技术五、不足与发展前景微柱凝集抗人球蛋白试验及微柱胶免疫检测技术本质是血凝试验，这理论上位制备抗原抗体包被红细胞为指示红细胞，以间接血凝试验来检测红细胞抗原抗体以外其它血液红细胞、中路标志、病原微生物，以及人体中其它可溶性抗体，如对药品抗体、本身抗体检测等提供了比传统血凝检验更为敏感、准确、简单易行方法。微柱凝集试验技术奖在临床各个领域有更为辽阔发展。58红细胞血型检测红细胞血型检测第58页第七节吸收放射试验一、概念1.吸收试验:抗原与抗体结合是特异性，所以含有抗体活性血清加入对应抗原后，抗体活性下降或消失，这种作用称为吸收试验。2.放散试验是抗原与抗体结合是可逆，在物理条件改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来试验称为放散试验59红细胞血型检测红细胞血型检测第59页第七节吸收放射试验（一）相关概念抗体可与对应抗原在适当条件下可发生凝集或致敏，这种结合是可逆，如改变一些试验条件，抗体可从红细胞解离下来，然后检测解离下来抗体。这种试验称为吸收放散试验。※冷本身抗体

：理论上讲凡是37℃与本身红细胞不反应，而只有在低于37℃环境下才能和本身红细胞反应抗体均可称为冷本身抗体。实际上，冷本身抗体大多数只能在很低温度下(比如4℃)与本身细胞反应。※温本身抗体：温本身抗体是指在37℃条件下能和本身红细胞反应抗体。当患者血清中含有温本身抗体时，患者普通都有些贫血或溶血症状。温本身抗体可分为两类:大多数情况下为lgG类温本身抗体，极少数情况下也会存在IgM性质温本身抗体。60红细胞血型检测红细胞血型检测第60页第七节吸收放射试验（二）吸收试验冷抗体在4℃反应最强，通惯用冷吸收技术（本身抗体用本身红细胞吸收；同种抗体用对应红细胞吸收）。IgM抗体通常在4℃条件下比22℃或37℃更轻易吸收，且轻易完全吸收。IgG抗体通常在37℃吸收效果最好，但难以完全吸收。1.冷抗体吸收试验应用范围：①本身冷抗体吸收②其它冷抗体吸收2.温抗体吸收试验应用范围：①本身冷抗体吸收②其它冷抗体吸收61红细胞血型检测红细胞血型检测第61页第七节吸收放射试验（三）放散试验放散试验是把结合到红细胞膜上抗体解离下来，用于其它目标。经过放散试验得到含有或不含有抗体溶液称为放散液。※放散目标：得到红细胞上致敏抗体或没有抗体吸附红细胞，前者得到是本身抗体，用于本身吸收；后者得到是红细胞，用于血型判定和交叉配血。※放散方法：热放散技术、乙醚放散技术、磷酸氯喹放散技术、冻融放散技术、柠檬酸放散技术、二甲苯放散技术等。62红细胞血型检测红细胞血型检测第62页第七节吸收放射试验1.热放散技术§应用范围ABO抗体放散（新生儿溶血病试验）§注意事项温度过高，抗体可能变性；温度过低，轻易使

抗体从红细胞上解离不完全2.乙醚放散技术§乙醚为有机溶剂，能够破坏红细胞膜，解离IgG抗体，该方法制备放散液，抗体回收率高。§适用范围主要用于红细胞上各种IgG抗体扩散。3.磷酸氯喹放散技术§主要用于得到没有任何抗体附着红细胞。此方法不能将补体从红细胞膜上解离下来。63红细胞血型检测红细胞血型检测第63页第七节吸收放射试验4.冻融放散技术§适用范围ABO抗体放散，如新生儿溶血病相关检测试验。5.柠檬酸放散技术§适用范围用于解离红细胞膜上致敏IgG抗体对红细胞进行抗原判定，但Kell系统判定除外。§注意事项该方法可破坏Kell系统抗原，尤其是K抗原，所以本方法放散后细胞不能进行Kll系统定型试验。64红细胞血型检测红细胞血型检测第64页第七节吸收放射试验（四）吸收放散试验应用☆证实存在于红细胞上若抗原☆分离、判定混合液体☆除去血清中不需要抗体☆浓缩低效价抗体☆核实抗体特异性☆利用吸收放散技术判定引发新生溶血病和免疫性输血反应抗体☆研究判别免疫性溶血性贫血抗体65红细胞血型检测红细胞血型检测第65页第八节凝集抑制试验

一、概述：

抗体能与有对应抗原红细胞发生特异性凝集，体液中可溶性抗原物质能与该抗体发生特异中和，抑制了抗体凝集红细胞作用。用这种可溶性物质来抑制抗体与红细胞凝集试验，称为凝集抑制试验。惯用于ABH或Lewis分泌状态检验，帮助ABO亚型确实认以及特殊情况下（红细胞标本完全溶血）ABO血型判定。66红细胞血型检测红细胞血型检测第66页第八节凝集抑制试验二、抑制物处理及抗体标化☆搜集液体唾液标本作为抑制物，煮沸使酶